本文選題：朝鮮淫羊蕾 + 多糖��； 參考：《南京中醫(yī)藥大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：人參、茯苓等很多富含多糖的補益類中藥在增強自身免疫方面得到廣泛的開發(fā)利用,多糖也在輔助腫瘤治療的研究中得到廣泛的認可。淫羊藿作為中國傳統(tǒng)補益類中藥,也具有提高免疫抗腫瘤的功效,但有關(guān)其多糖類成分的文獻報道較為單薄,為了更好的解析淫羊藿強身健體的補益功效,本文在實驗室對朝鮮淫羊藿的研究基礎(chǔ)上,從朝鮮淫羊蕾多糖出發(fā),對其分離純化和腫瘤免疫活性進行了系統(tǒng)地探索,對純化得到的一個活性較好的淫羊蕾多糖進行理化性質(zhì)、結(jié)構(gòu)解析和腫瘤免疫機制的研究。主要內(nèi)容包括以下幾點:建立朝鮮淫羊藿粗多糖水提醇沉的最佳工藝。利用Box-Benhnken中心組合設(shè)計試驗,響應(yīng)面分析法對結(jié)果進行分析,確定的最佳提取方案為:在87℃條件下,16倍量的水,提取2次,每次4小時。由此工藝所得多糖得率的均值為1.023%,而根據(jù)回歸方程,多糖得率理論預(yù)測值為1.045%,前后相對誤差僅為2.15%,說明運用響應(yīng)面法優(yōu)化得到的模型可行,參數(shù)也較為合理。驗證朝鮮淫羊藿粗多糖體內(nèi)腫瘤免疫藥效。建立C57BL6小鼠Lewis肺癌模型,淫羊蕾多糖給藥14天。結(jié)果表明:一定劑量下的粗多糖能夠有效地阻止腫瘤機體免疫器官的萎縮,可以不同程度地提高血液中免疫細胞因子IL-2、IFN-γ的水平,同時促進脾臟細胞增殖,逆轉(zhuǎn)在腫瘤發(fā)展過程中,造成的CD4+T和CD8+T細胞二者的比例下降,抑制T細胞限速酶IDO在腫瘤組織的表達,改變血液中M1,M2型巨噬細胞的比例,破壞腫瘤生長微環(huán)境從而間接發(fā)揮抗腫瘤作用。以免疫活性為導(dǎo)向,耦合現(xiàn)代分離純化技術(shù)對朝鮮淫羊藿粗多糖進行篩選。粗多糖首先進行透析(MW:3000)脫小分子物質(zhì),然后根據(jù)表面電荷的不同和分子大小的差異,分別用DEAE-52和Sephadex-100對其進行分離,利用lewis腫瘤細胞毒性實驗、體外脾細胞增殖實驗,腹腔巨噬細胞吞噬實驗、細胞因子的分泌功能實驗進行體外活性篩選,得到免疫活性較高的F3,命名為EPS。綜合應(yīng)用高效液相、核磁共振、紅外、紫外等手段對所得的純化多糖EPS進行結(jié)構(gòu)解析。得出其單糖組成:巖藻糖、甘露糖、鼠李糖、葡萄糖醛酸、氨基半乳糖、葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖。摩爾比為1:1.28:10.97:0.43:7.41:2.77:10.34:11.33,高效凝膠滲透色譜顯示EPS為單峰,說明其為均一物質(zhì),經(jīng)GPC軟件計算得其平均分子量(MV)為180×104Da,紅外可以顯示出多糖類物質(zhì)的一般吸收特征峰,在波數(shù)為1017,840,618,537cm-1處有吸收,表明EPS含有吡喃環(huán),1640,1420附近有強吸收,表明酸性基團-COOH的存在。此外,EPS在紫外270～290nm處有弱吸收峰,推測其是n-π*躍遷引起的R吸收帶,說明該化合物中可能存在C=O,基本理化性質(zhì)表明EPS糖醛酸含量較高,這也與紅外吸收相互印證。最后利用小鼠腹腔巨噬細胞、抗原遞呈專職DC細胞和T細胞的免疫活性功能對純化多糖EPS進行深入探索。結(jié)果表明EPS可以促進巨噬細胞、DC細胞表面與抗原遞呈和細胞增殖相關(guān)的marker增多,促進提高二者的增殖及抗原遞呈功能。此外還可以促進巨噬細胞分泌IL-6,TNF-α,促進DC細胞分泌IL-12等腫瘤免疫因子,誘導(dǎo)Th細胞分化,增強其免疫抗腫瘤活性。最后,在卵清蛋白(OVA)存在下,EPS可以促進小鼠CD4+T細胞增殖,提高INF-γ水平,增強T細胞殺傷腫瘤細胞功能。
[Abstract]:The results showed that the optimal extraction scheme is that the crude polysaccharide can effectively prevent the atrophy of the immune organs of the tumor body . The results show that the optimal extraction scheme is as follows : The results showed that EPS could promote the proliferation of mouse CD4 + T cells , increase the INF - 緯 level and enhance the function of T cell killing tumor cells .
【學(xué)位授予單位】：南京中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R284;R285

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本文編號：1912036