發(fā)布時(shí)間：2018-04-22 03:32

  本文選題：苦牛大力 + 總黃酮��； 參考：《廣西醫(yī)科大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：目的:建立苦牛大力中芒柄花素和高麗槐素的含量測(cè)定方法,苦牛大力總黃酮(the total flavonoids of Radix Millettia Championi,FRMC)的抗炎和提高免疫作用以及對(duì)小鼠急性肺損傷(acute lung injury,ALI)的保護(hù)作用及作用機(jī)制,并探討FRMC與甜牛大力總黃酮(the total flavonoids of Radix Millettia Speciosa,FRMS)在抗炎、提高免疫和保護(hù)ALI方面作用效果的差異,為苦牛大力在抗炎和提高免疫及保護(hù)ALI方面是否可作為甜牛大力的替代或補(bǔ)充品及其藥用價(jià)值的開(kāi)發(fā)應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)和理論基礎(chǔ)。方法:1.含量測(cè)定:采用HPLC法,以芒柄花素和高麗槐素作為標(biāo)準(zhǔn)品,選用Welchrom-C18色譜柱(4.6 mm×250 mm,5μm),測(cè)定的色譜條件為:流動(dòng)相為乙腈-水(37.5:62.5),芒柄花素的檢測(cè)波長(zhǎng)為248nm、高麗槐素的檢測(cè)波長(zhǎng)為309 nm,對(duì)苦牛大力和甜牛大力中芒柄花素和高麗槐素含量進(jìn)行測(cè)定并比較其含量的差異。2.抗炎和提高免疫作用的研究:采用二甲苯引起小鼠耳腫脹、角叉菜膠導(dǎo)致小鼠足腫脹、醋酸導(dǎo)致小鼠毛細(xì)血管通透性增加以及棉球置于小鼠腹股溝誘發(fā)肉芽腫炎癥模型及環(huán)磷酰胺制備小鼠免疫抑制模型來(lái)觀察FRMC的抗炎和提高免疫作用,并與FRMS抗炎和提高免疫作用進(jìn)行比較。3.對(duì)ali的保護(hù)作用:鼻腔滴注脂多糖(lps)制備小鼠ali模型,測(cè)定各組小鼠的肺系數(shù)、肺泡灌洗液(broncholveolarlavagefluid,balf)中白細(xì)胞(whitebloodcell,wbc)數(shù)目和總蛋白(pro)含量、肺組織中超氧化物歧化酶(superoxidasedismutase,sod)和丙二醛(mda)含量的變化;用酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法(elisa法)測(cè)定各組小鼠肺組織中白細(xì)胞介素6(il-6)、白細(xì)胞介素-1bata(il-1β)和腫瘤壞死因子(tnf-α)的表達(dá)水平;采用蘇木精-伊紅染色法(hematoxylin-eosinstaining,he)觀察小鼠肺組織病理形態(tài)學(xué)的改變。4.對(duì)ali的保護(hù)機(jī)制研究:采用免疫組化法檢測(cè)各組小鼠肺組織中核轉(zhuǎn)錄因子-κbp65(nf-κbp65)蛋白的表達(dá)量;實(shí)時(shí)熒光定量pcr測(cè)定各組小鼠肺組織中il-6、tnf-α、nf-κbp65及toll樣受體4(tlr4)mrna的表達(dá)量。結(jié)果:1.苦牛大力和甜牛大力芒柄花素和高麗槐素的含量情況:苦牛大力甜牛大力(p0.05)。2.與模型對(duì)照組比較,frmc各劑量組均可明顯抑制二甲苯引起的小鼠耳腫脹、角叉菜引起的小鼠足腫脹,降低醋酸引起腹腔毛細(xì)血管通透性的增加,減輕小鼠肉芽腫(p0.05或p0.01);frmc中、高各劑量及frms各劑量組均可提高免疫抑制小鼠的胸腺指數(shù),frmc和frms中、高劑量組均可提高免疫抑制小鼠的廓清指數(shù)、吞噬指數(shù)及遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)(delayedtypehypersensitivity,dth)程度(p0.01或p0.05);其中,frmc低、中劑量組對(duì)二甲苯引起的小鼠耳腫脹作用強(qiáng)于frms(p0.05),而對(duì)小鼠肉芽腫抑制作用弱于frms(p0.05),在提高廓清指數(shù)方面,frmc低劑量組強(qiáng)于frms(p0.05),frmc高、中劑量組提高dth程度較frms相應(yīng)劑量組弱(p0.01或p0.05)。3.與模型對(duì)照組比較,frmc和frms各劑量組可不同程度地降低小鼠肺系數(shù)、pro滲出量(p0.05或p0.01),減少小鼠balf中wbc數(shù)(p0.05或p0.01),不同程度地增加肺組織中sod的含量,減少mda的含量(p0.05或p0.01),不同程度地減少肺組織tnf-α、il-6、il-1β的分泌量(p0.05或p0.01);其中,frmc高劑量組對(duì)提高sod作用較frms弱(p0.01),frmc中、高劑量組對(duì)mda的降低作用較frms弱(p0.05),其他指標(biāo)frmc與frms相應(yīng)劑量組作用效果相似(p0.05);病理形態(tài)學(xué)檢查顯示:frmc和frms均可改善肺組織中炎性細(xì)胞浸潤(rùn)、肺間質(zhì)增厚、肺水腫等情況,減輕lps對(duì)小鼠肺組織的損害。4.與模型對(duì)照組比較,frmc和frms各劑量組均可減少nf-κbp65蛋白在肺組織中的表達(dá)水平(p0.01);frmc各劑量組可不同程度地抑制tlr4、nf-κbp65、il-6和tnf-αmrna的表達(dá)量(p0.05或p0.01),frms各劑量組可以降低肺組織中nf-κbp65、il-6和tnf-αmrna的表達(dá)水平(p0.05),frms中、高劑量組可抑制tlr4mrna的表達(dá)水平(p0.05或p0.01);與frms相應(yīng)劑量組比較,frmc低劑量組抑制小鼠肺組織中nf-κbp65蛋白、nf-κbp65及tlr4mrma的表達(dá)強(qiáng)于frms(p0.01),frmc高劑量抑制il-6mrma的表達(dá)強(qiáng)于frms(p0.05),余下指標(biāo),frmc和frms作用效果相似(p0.05)。結(jié)論:1.該HPLC方法可用于苦牛大力芒柄花素和高麗槐素的含量測(cè)定;2.FRMC具有良好的抗炎和提高免疫作用,抑制耳腫脹強(qiáng)于FRMS,抑制小鼠肉芽腫抑制弱于FRMS,提高免疫作用稍弱于FRMS;3.FRMC和FRMS對(duì)LPS致小鼠ALI均具有較好的保護(hù)作用,作用機(jī)制與干擾TLR4/NF-κB通路,抑制炎癥性因子的表達(dá)及生成有關(guān)。
[Abstract]:Objective : To establish a method for the determination of anti - inflammatory and anti - inflammatory effects of Radix Millettia speciosa ( FRMS ) in mice , and to study the protective effects of FRMC on acute lung injury ( ALI ) . The expression of interleukin - 6 ( IL - 6 ) , interleukin - 1bata ( il - 1尾 ) and tumor necrosis factor ( TNF - 偽 ) in lung tissues of mice were determined by enzyme - linked immunosorbent assay ( ELISA ) . The results showed that frmc and frms could significantly inhibit the expression of nf - k b65 , il - 6 and fm4mrma in lung tissues ( p . 05 or p0.01 ) .

【學(xué)位授予單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R284.1;R285.5

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1785427