發(fā)布時(shí)間：2018-03-17 22:35

  本文選題：何首烏　切入點(diǎn)：蒽醌　出處：《湖北科技學(xué)院》2017年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：目的:本課題分別通過(guò)從細(xì)胞水平和動(dòng)物水平上這兩部分探討何首烏及其主要成分對(duì)肝毒性的影響,旨在系統(tǒng)的評(píng)價(jià)與探究何首烏對(duì)肝臟的毒性損害及其毒性的物質(zhì)基礎(chǔ)。方法:(1)細(xì)胞水平:選取何首烏中已知十個(gè)主要單體(二苯乙烯苷、虎杖苷、蘆薈大黃素、土大黃苷、大黃素、大黃酚、大黃酸、大黃素甲醚、金絲桃苷、沒(méi)食子酸)在100?M濃度下于HL7702細(xì)胞上進(jìn)行細(xì)胞增殖抑制(MTT法)評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn),得到各組單體的細(xì)胞增殖抑制率并在此基礎(chǔ)上選取有明顯抑制作用的單體物質(zhì),采用不同藥物濃度(1?M、10?M、25?M、50?M、100?M)進(jìn)行細(xì)胞增殖抑制作用的研究。(2)急性毒性評(píng)價(jià)動(dòng)物實(shí)驗(yàn):50只SPF級(jí)ICR小鼠,雌雄各25只。在動(dòng)物房中適應(yīng)性飼養(yǎng)2-3 d后,按體重分層隨機(jī)分籠,雌雄性分別為5只一籠,每組10只。單次給藥劑量為20.0g浸膏粉/kg進(jìn)行經(jīng)口一次給藥。給藥后的4h開始觀察,每日一次至第15 d結(jié)束。在給藥日第1 d、第7 d和第15 d測(cè)定小鼠體重一次及測(cè)定給藥后4-7 d和第12-15 d的攝食量。15 d觀察結(jié)束后脫頸處死后,觀察心臟、肺臟、腎臟、肝臟、脾臟、胃腸道等有無(wú)異常情況。(4)長(zhǎng)期毒性評(píng)價(jià)動(dòng)物實(shí)驗(yàn):70只SPF級(jí)C57BL/6雄性小鼠,分別進(jìn)行60 d和90 d連續(xù)按炮制品和生品何首烏的醇提取物溶液進(jìn)行高低劑量每日一次給藥并每周記錄體重兩次,高劑量為40 g/kg,低劑量為20 g/kg。在60 d和90d后分別進(jìn)行血液生化常規(guī)指標(biāo)、小鼠肝臟、腎臟、肺和體重的檢測(cè)和肝臟勻漿測(cè)試MDA和MPO。同時(shí)用蘇木精-伊紅染色法進(jìn)行小鼠肝臟染色并在光鏡下觀察組織損傷程度。結(jié)果:(1)細(xì)胞MTT結(jié)果:二苯乙烯苷、金絲桃苷、大黃酚、沒(méi)食子酸在100?M濃度下對(duì)細(xì)胞增殖作用沒(méi)有影響。在100?M濃度下,虎杖苷、蘆薈大黃素、大黃素甲醚、土大黃苷的細(xì)胞增殖作用略有下降但無(wú)明顯差異(P0.05)。而大黃素和大黃酸對(duì)L-02細(xì)胞有明顯的抑制增殖作用(P0.01)。故選取大黃素、大黃酸在1?M、10?M、25?M、50?M、100?M濃度下進(jìn)行細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)。在48 h和72 h下,大黃素和大黃酸的抑制作用分別隨著濃度的增加,呈時(shí)間-效應(yīng)-濃度的關(guān)系。(2)急性毒性動(dòng)物實(shí)驗(yàn):一次給藥后15d內(nèi),雌雄兩組小鼠均無(wú)死亡。雄性組小鼠給藥后第4 d、第7 d及15 d內(nèi)體重?zé)o差異(P0.05)。雌性小鼠組在給藥后第7 d和第15 d內(nèi)體重有明顯差異(P0.01)。給藥后第7 d,雄性生何首烏醇提物組每只小鼠攝食量遠(yuǎn)遠(yuǎn)均低于對(duì)照組,隨后幾日內(nèi)慢慢恢復(fù)但仍低于同期對(duì)照組和其他給藥組。何首烏水提物雄性組每只攝食量均高于對(duì)照組和醇提物組。(3)長(zhǎng)期毒性動(dòng)物實(shí)驗(yàn):連續(xù)給藥60 ds及90 ds后,給藥組小鼠體重明顯下降(P0.01和P0.05)。60 d和90 d時(shí),小鼠肝臟指數(shù)與對(duì)照組相比均明顯下降(P0.01)。90 d時(shí)給藥組小鼠腎臟指數(shù)與對(duì)照組相比有顯著下降(P0.01)。60 d時(shí)制何首烏高劑量組小鼠肺臟指數(shù)呈顯著性上升(P0.01)其他組別雖有上升但無(wú)顯著性(P0.05)。血液生化指標(biāo)結(jié)果ALT、AST:60 d時(shí),何首烏高劑量組小鼠ALT與同期對(duì)照組相比均有明顯差異(P0.05),其余組別均下降趨勢(shì)但無(wú)明顯差異(P0.05),AST則均與同期對(duì)照組無(wú)差異。90 d時(shí),給藥組小鼠ALT與同期對(duì)照組相比呈下降趨勢(shì),其中制何首烏低劑量組有顯著性差異(P0.01)。AST則何首烏高劑量組雖有上升趨勢(shì)但無(wú)明顯差異(P0.05)其余組別與對(duì)照組無(wú)差異。MPO、MDA:60 d和90 d時(shí),何首烏的高劑量組小鼠的MPO和MDA均有明顯差異(P0.01和P0.05)其余組別與對(duì)照組雖有上升但無(wú)顯著性(P0.05)。TBA:60 d時(shí)制何首烏低劑量組與生何首烏高劑量組小鼠的TBA與對(duì)照組均有明顯差異(P0.05)其余組別雖有上升但無(wú)顯著性(P0.05)。BUN、CREA:60 d時(shí),給藥組小鼠BUN與對(duì)照組呈顯著增高趨勢(shì)(P0.01),給藥組CREA均呈上升趨勢(shì),其中何首烏低劑量組有明顯差異(P0.05)。90 d時(shí),給藥組小鼠BUN和CREA呈顯著下降趨勢(shì)(P0.01)。LDH:60 d時(shí)制何首烏低劑量組小鼠的LDH明顯上升趨勢(shì)(P0.01)其他組別雖有上升但無(wú)顯著性(P0.05)。TP:60 d時(shí),制何首烏組的TP呈明顯上升趨勢(shì)(P0.05)。ALB:60 d時(shí),制何首烏組與生何首烏高劑量組小鼠ALB與對(duì)照組呈明顯上升趨勢(shì)(P0.05)。蘇木精-伊紅染色結(jié)果:60 d時(shí),生何首烏高劑量組小鼠肝臟表面上有部分炎癥細(xì)胞聚集,制何首烏組上有細(xì)胞核溶解現(xiàn)象。90 d時(shí),全部給藥組小鼠肝臟表面有炎癥細(xì)胞聚集,部分給藥組呈現(xiàn)炎癥細(xì)胞趨集成團(tuán)現(xiàn)象。結(jié)論:何首烏中的蒽醌類主要成分大黃素和大黃酸具有明顯肝細(xì)胞毒性,可能是導(dǎo)致肝臟損傷的毒性物質(zhì)基礎(chǔ)。長(zhǎng)期使用生何首烏、制何首烏會(huì)造成肝功能輕微的紊亂,對(duì)腎和肺也有一定影響,其中肺臟隨著時(shí)間增長(zhǎng)可恢復(fù)。
[Abstract]:Objective: This paper respectively through the two part of the main components of Polygonum multiflorum and its effect on liver toxicity at the cellular level and animal level, material basis of toxicity damage evaluation system and to explore the liver and toxicity of Polygonum multiflorum Thunb. Methods: (1) cell level: select ten known mainly in Polygonum multiflorum monomer (two stilbene glucoside, polydatin, aloe emodin, Rhaponticin, emodin, chrysophanol, rhein, emodin, Hyperoside, gallic acid) at 100? M concentration in HL7702 cells on cell proliferation inhibition (MTT) evaluation experiment, get the each monomer and the inhibition of cell proliferation based on the selection of monomers inhibited, with different drug concentrations (1? M, 10? M, 25? M, 50? M, 100? M) on inhibition of cell proliferation. (2) acute toxicity evaluation of animal experiments: 50 SPF level ICR mice, male and female each 25鍙，

本文編號(hào)：1626820