本文選題：Twist　切入點：1　出處：《山東大學(xué)》2017年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：研究目的:流行病學(xué)研究表明,胰島素抵抗(IR)與糖尿病、高血壓、肥胖癥等多種代謝性疾病密切相關(guān),是疾病發(fā)生的"共同土壤"。本課題旨在探討轉(zhuǎn)錄因子Twist 1在脂肪細胞胰島素抵抗中的表達水平、對胰島素敏感性的影響以及其與過氧化物酶體增殖物活化受體γ(PPARγ)的調(diào)控關(guān)系,明確Twist 1基因在PPARγ介導(dǎo)的脂肪細胞胰島素抵抗中的作用,為胰島素抵抗相關(guān)疾病的預(yù)防和治療提供相應(yīng)靶點。研究方法:1.臨床標本收集:選擇2016-2017年在山東省千佛山醫(yī)院進行擇期手術(shù)的患者,按照體重指數(shù)(BMI)和胰島素抵抗指數(shù)(HOMA-IR)將研究對象分為對照組和肥胖型IR組。術(shù)中收取患者皮下脂肪組織,提取脂肪組織中的RNA,熒光定量聚合酶鏈式反應(yīng)(PCR)技術(shù)分析轉(zhuǎn)錄因子TWIST 1和PPARγ的轉(zhuǎn)錄水平。提取皮下脂肪組織中的蛋白,Western blot檢測分析轉(zhuǎn)錄因子TWIST 1和PPARγ蛋白水平。2.脂肪細胞胰島素抵抗模型的建立及鑒定:體外培養(yǎng)3T3-L1脂肪前體細胞,一定方法誘導(dǎo)前體脂肪細胞分化為成熟脂肪細胞,通過油紅O染色鑒定脂滴。應(yīng)用高糖/高胰島素誘導(dǎo)法建立脂肪細胞的IR模型,通過葡萄糖消耗實驗、葡萄糖攝取實驗及葡萄糖轉(zhuǎn)運蛋白4(GLUT4)的免疫細胞化學(xué)染色實驗鑒定IR模型。模型建立成功后提取脂肪細胞核蛋白,檢測Twist 1和PPARγ在脂肪細胞IR模型中的蛋白表達水平。3.轉(zhuǎn)錄因子Twist 1的表達對胰島素敏感性的影響:慢病毒顆粒轉(zhuǎn)染3T3-L1成熟脂肪細胞,分別以感染了陰性病毒顆粒NC-LV3和NC-LV5的脂肪細胞為對照,分析干擾和過表達轉(zhuǎn)錄因子Twist 1對脂肪細胞胰島素敏感性的影響。4.轉(zhuǎn)錄因子Twist 1的表達對脂肪細胞中PPARγ表達的影響:慢病毒顆粒轉(zhuǎn)染3T3-L1成熟脂肪細胞,分別以感染了陰性病毒顆粒NC-LV3和NC-LV5的脂肪細胞為對照,分析干擾和過表達Twist 1對PPARγ表達的影響。5.PPARγ表達變化對脂肪細胞中Twist 1的影響:PPARy激動劑吡格列酮(0.1μmmol/L)和抑制劑T0070907(100 μmmol/L)作用于誘導(dǎo)分化的成熟脂肪細胞,檢測PPARγ表達變化對Twist 1表達的影響。研究結(jié)果:1.以對照組皮下脂肪組織中轉(zhuǎn)錄因子TWIST 1和PPARγ轉(zhuǎn)錄水平為100%,肥胖型IR組脂肪組織中TWIST 1和PPARγ的轉(zhuǎn)錄水平分別下調(diào)了 41%和28%,具備統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)。2.以對照組患者的皮下脂肪組織中轉(zhuǎn)錄因子TWIST 1和PPARy的蛋白水平為100%,肥胖型IR組皮下脂肪組織中的TWIST 1和PPARγ表達水平均顯著下調(diào),半定量結(jié)果顯示TWIST 1和PPARγ蛋白表達水平分別下調(diào)了 26%和20%,下調(diào)水平有統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)。3.3T3-L1脂肪前體細胞誘導(dǎo)分化為成熟脂肪細胞后,油紅O染色顯示誘導(dǎo)分化成熟的脂肪細胞漿內(nèi)聚集大量呈橘紅色的脂滴,而未被誘導(dǎo)分化的前體細胞油紅O染色未著色。以胰島素未刺激狀態(tài)下葡萄糖消耗和攝取量為100%,對照組細胞的刺激組葡萄糖消耗是未刺激組的2倍,刺激組葡萄糖攝取量是未刺激組的3.1倍,具有統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)。高糖/高胰島素建立IR模型后,胰島素刺激組葡萄糖消耗是未刺激組的1.1倍,刺激組葡萄糖攝取量是未刺激組的1.3倍,沒有統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)。但胰島素刺激狀態(tài)下的對照組細胞和IR組相比較,IR組細胞的葡萄糖消耗和葡萄糖攝取較對照組下調(diào)了 46%和59%,存在顯著差異(P0.05)。低濃度胰島素刺激建立的胰島素抵抗細胞模型,IR組脂肪細胞膜上的GLUT 4免疫熒光強度明顯弱于對照組。提取脂肪細胞核蛋白,Western blot檢測發(fā)現(xiàn)在3T3-L1脂肪細胞IR模型組中的轉(zhuǎn)錄因子Twist 1和PPARy蛋白表達水平是對照組的2.2倍及1.6倍,存在統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。4.以感染了陰性病毒顆粒NC-LV3的脂肪細胞為對照,干擾Twist 1后其相應(yīng)蛋白表達水平顯著下調(diào)了 50%,半定量結(jié)果顯示下調(diào)水平具有明顯差異(P0.05)。慢病毒轉(zhuǎn)染成熟脂肪細胞后建立IR模型,胰島素作用下的Twist 1-/IR組脂肪細胞葡萄糖消耗和葡萄糖攝取分別上調(diào)到NC-LV3/IR組的1.5倍和2倍,有統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05),免疫細胞化學(xué)染色也顯示Twist1-/IR組細胞膜上的GLUT 4分子數(shù)量較NC-LV3/IR組有增加。5.以感染了陰性病毒顆粒NC-LV5的脂肪細胞為對照,過表達Twist 1后其蛋白表達水平顯著上調(diào)了 40%,半定量結(jié)果顯示上調(diào)程度有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。慢病毒轉(zhuǎn)染成熟脂肪細胞后建立IR模型,與NC-LV5/IR組細胞相比,胰島素作用后的Twist 1+/IR組的葡萄糖消耗和葡萄糖攝取以及細胞膜上GLUT 4熒光均無顯著差異,無顯著的統(tǒng)計意義(P0.05)。6.分別以感染了陰性病毒顆粒NC-LV3和NC-LV5的脂肪細胞為對照,Twist 1-組的3T3-L1成熟脂肪細胞中PPARγ蛋白表達水平較對照組下調(diào)36%,半定量分析下調(diào)程度有統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05),Twist 1+組PPARγ表達水平上調(diào)25%,半定量分析上調(diào)程度也有顯著差異(P0.05)。7.PPARγ激動劑吡格列酮組與對照組比較,其Twist 1蛋白表達水平上調(diào),半定量顯示上調(diào)63%,上調(diào)程度有統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05),而抑制劑T0070907組相較于對照組,Twist 1表達水平顯著下調(diào)了 77%,半定量分析有明顯差異(P0.05)。研究結(jié)論:轉(zhuǎn)錄因子Twist 1在胰島素抵抗中呈現(xiàn)高表達,干擾Twist 1表達可明顯改善脂肪細胞胰島素抵抗水平,且Twist 1和PPARγ在胰島素抵抗中存在一定的正向調(diào)控關(guān)系。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R58

【參考文獻】

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本文編號：1622681