本文選題：Twist　切入點(diǎn)：1　出處：《山東大學(xué)》2017年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：研究目的:流行病學(xué)研究表明,胰島素抵抗(IR)與糖尿病、高血壓、肥胖癥等多種代謝性疾病密切相關(guān),是疾病發(fā)生的"共同土壤"。本課題旨在探討轉(zhuǎn)錄因子Twist 1在脂肪細(xì)胞胰島素抵抗中的表達(dá)水平、對(duì)胰島素敏感性的影響以及其與過氧化物酶體增殖物活化受體γ(PPARγ)的調(diào)控關(guān)系,明確Twist 1基因在PPARγ介導(dǎo)的脂肪細(xì)胞胰島素抵抗中的作用,為胰島素抵抗相關(guān)疾病的預(yù)防和治療提供相應(yīng)靶點(diǎn)。研究方法:1.臨床標(biāo)本收集:選擇2016-2017年在山東省千佛山醫(yī)院進(jìn)行擇期手術(shù)的患者,按照體重指數(shù)(BMI)和胰島素抵抗指數(shù)(HOMA-IR)將研究對(duì)象分為對(duì)照組和肥胖型IR組。術(shù)中收取患者皮下脂肪組織,提取脂肪組織中的RNA,熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)技術(shù)分析轉(zhuǎn)錄因子TWIST 1和PPARγ的轉(zhuǎn)錄水平。提取皮下脂肪組織中的蛋白,Western blot檢測(cè)分析轉(zhuǎn)錄因子TWIST 1和PPARγ蛋白水平。2.脂肪細(xì)胞胰島素抵抗模型的建立及鑒定:體外培養(yǎng)3T3-L1脂肪前體細(xì)胞,一定方法誘導(dǎo)前體脂肪細(xì)胞分化為成熟脂肪細(xì)胞,通過油紅O染色鑒定脂滴。應(yīng)用高糖/高胰島素誘導(dǎo)法建立脂肪細(xì)胞的IR模型,通過葡萄糖消耗實(shí)驗(yàn)、葡萄糖攝取實(shí)驗(yàn)及葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白4(GLUT4)的免疫細(xì)胞化學(xué)染色實(shí)驗(yàn)鑒定IR模型。模型建立成功后提取脂肪細(xì)胞核蛋白,檢測(cè)Twist 1和PPARγ在脂肪細(xì)胞IR模型中的蛋白表達(dá)水平。3.轉(zhuǎn)錄因子Twist 1的表達(dá)對(duì)胰島素敏感性的影響:慢病毒顆粒轉(zhuǎn)染3T3-L1成熟脂肪細(xì)胞,分別以感染了陰性病毒顆粒NC-LV3和NC-LV5的脂肪細(xì)胞為對(duì)照,分析干擾和過表達(dá)轉(zhuǎn)錄因子Twist 1對(duì)脂肪細(xì)胞胰島素敏感性的影響。4.轉(zhuǎn)錄因子Twist 1的表達(dá)對(duì)脂肪細(xì)胞中PPARγ表達(dá)的影響:慢病毒顆粒轉(zhuǎn)染3T3-L1成熟脂肪細(xì)胞,分別以感染了陰性病毒顆粒NC-LV3和NC-LV5的脂肪細(xì)胞為對(duì)照,分析干擾和過表達(dá)Twist 1對(duì)PPARγ表達(dá)的影響。5.PPARγ表達(dá)變化對(duì)脂肪細(xì)胞中Twist 1的影響:PPARy激動(dòng)劑吡格列酮(0.1μmmol/L)和抑制劑T0070907(100 μmmol/L)作用于誘導(dǎo)分化的成熟脂肪細(xì)胞,檢測(cè)PPARγ表達(dá)變化對(duì)Twist 1表達(dá)的影響。研究結(jié)果:1.以對(duì)照組皮下脂肪組織中轉(zhuǎn)錄因子TWIST 1和PPARγ轉(zhuǎn)錄水平為100%,肥胖型IR組脂肪組織中TWIST 1和PPARγ的轉(zhuǎn)錄水平分別下調(diào)了 41%和28%,具備統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。2.以對(duì)照組患者的皮下脂肪組織中轉(zhuǎn)錄因子TWIST 1和PPARy的蛋白水平為100%,肥胖型IR組皮下脂肪組織中的TWIST 1和PPARγ表達(dá)水平均顯著下調(diào),半定量結(jié)果顯示TWIST 1和PPARγ蛋白表達(dá)水平分別下調(diào)了 26%和20%,下調(diào)水平有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。3.3T3-L1脂肪前體細(xì)胞誘導(dǎo)分化為成熟脂肪細(xì)胞后,油紅O染色顯示誘導(dǎo)分化成熟的脂肪細(xì)胞漿內(nèi)聚集大量呈橘紅色的脂滴,而未被誘導(dǎo)分化的前體細(xì)胞油紅O染色未著色。以胰島素未刺激狀態(tài)下葡萄糖消耗和攝取量為100%,對(duì)照組細(xì)胞的刺激組葡萄糖消耗是未刺激組的2倍,刺激組葡萄糖攝取量是未刺激組的3.1倍,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。高糖/高胰島素建立IR模型后,胰島素刺激組葡萄糖消耗是未刺激組的1.1倍,刺激組葡萄糖攝取量是未刺激組的1.3倍,沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。但胰島素刺激狀態(tài)下的對(duì)照組細(xì)胞和IR組相比較,IR組細(xì)胞的葡萄糖消耗和葡萄糖攝取較對(duì)照組下調(diào)了 46%和59%,存在顯著差異(P0.05)。低濃度胰島素刺激建立的胰島素抵抗細(xì)胞模型,IR組脂肪細(xì)胞膜上的GLUT 4免疫熒光強(qiáng)度明顯弱于對(duì)照組。提取脂肪細(xì)胞核蛋白,Western blot檢測(cè)發(fā)現(xiàn)在3T3-L1脂肪細(xì)胞IR模型組中的轉(zhuǎn)錄因子Twist 1和PPARy蛋白表達(dá)水平是對(duì)照組的2.2倍及1.6倍,存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。4.以感染了陰性病毒顆粒NC-LV3的脂肪細(xì)胞為對(duì)照,干擾Twist 1后其相應(yīng)蛋白表達(dá)水平顯著下調(diào)了 50%,半定量結(jié)果顯示下調(diào)水平具有明顯差異(P0.05)。慢病毒轉(zhuǎn)染成熟脂肪細(xì)胞后建立IR模型,胰島素作用下的Twist 1-/IR組脂肪細(xì)胞葡萄糖消耗和葡萄糖攝取分別上調(diào)到NC-LV3/IR組的1.5倍和2倍,有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05),免疫細(xì)胞化學(xué)染色也顯示Twist1-/IR組細(xì)胞膜上的GLUT 4分子數(shù)量較NC-LV3/IR組有增加。5.以感染了陰性病毒顆粒NC-LV5的脂肪細(xì)胞為對(duì)照,過表達(dá)Twist 1后其蛋白表達(dá)水平顯著上調(diào)了 40%,半定量結(jié)果顯示上調(diào)程度有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。慢病毒轉(zhuǎn)染成熟脂肪細(xì)胞后建立IR模型,與NC-LV5/IR組細(xì)胞相比,胰島素作用后的Twist 1+/IR組的葡萄糖消耗和葡萄糖攝取以及細(xì)胞膜上GLUT 4熒光均無顯著差異,無顯著的統(tǒng)計(jì)意義(P0.05)。6.分別以感染了陰性病毒顆粒NC-LV3和NC-LV5的脂肪細(xì)胞為對(duì)照,Twist 1-組的3T3-L1成熟脂肪細(xì)胞中PPARγ蛋白表達(dá)水平較對(duì)照組下調(diào)36%,半定量分析下調(diào)程度有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05),Twist 1+組PPARγ表達(dá)水平上調(diào)25%,半定量分析上調(diào)程度也有顯著差異(P0.05)。7.PPARγ激動(dòng)劑吡格列酮組與對(duì)照組比較,其Twist 1蛋白表達(dá)水平上調(diào),半定量顯示上調(diào)63%,上調(diào)程度有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05),而抑制劑T0070907組相較于對(duì)照組,Twist 1表達(dá)水平顯著下調(diào)了 77%,半定量分析有明顯差異(P0.05)。研究結(jié)論:轉(zhuǎn)錄因子Twist 1在胰島素抵抗中呈現(xiàn)高表達(dá),干擾Twist 1表達(dá)可明顯改善脂肪細(xì)胞胰島素抵抗水平,且Twist 1和PPARγ在胰島素抵抗中存在一定的正向調(diào)控關(guān)系。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R58

【參考文獻(xiàn)】

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