本文選題：3-溴丙酮酸　切入點(diǎn)：檸檬酸鈉　出處：《廣西醫(yī)科大學(xué)》2017年碩士論文　論文類(lèi)型：學(xué)位論文

【摘要】：【目的】:探討糖酵解抑制劑3-溴丙酮酸(3-Bromopyruvate,BP)和檸檬酸鈉(Sodium citrate,SCT)抑制胃癌細(xì)胞MGC-803生長(zhǎng)和增殖的作用及其機(jī)制,為3-溴丙酮酸和檸檬酸鈉進(jìn)行臨床試驗(yàn)和進(jìn)一步胃癌治療提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)�！痉椒ā颗囵B(yǎng)低分化人胃癌細(xì)胞株MGC-803,并隨機(jī)分為8組,即3-溴丙酮酸低、中、高濃度組(4、6、8ug/ml),檸檬酸鈉低、中、高濃度組(5、10、20mmol/L),陽(yáng)性對(duì)照5-Fu組(0.5mmol/L)以及空白對(duì)照組(Control)。經(jīng)過(guò)不同濃度的BP和SCT作用后,用MTT法檢測(cè)細(xì)胞對(duì)BP和SCT的敏感性;流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)BP和SCT對(duì)細(xì)胞凋亡率以及細(xì)胞周期分布的影響,酶聯(lián)免疫法檢測(cè)糖酵解途徑關(guān)鍵酶己糖激酶(Hexokinase,HK)和磷酸果糖激酶-1(Phosphofructokinase-1,PFK-1)的活性、乳酸含量和三磷酸腺苷(ATP)水平的變化,實(shí)時(shí)熒光定量PCR(q RT-PCR)檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)Bcl-2、bax、Cyt-C和Suvivin等基因的mRNA相對(duì)表達(dá)量,蛋白印跡法(Western blot)檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)Bcl-2、Bax、Cyt-C和Suvivin等蛋白相對(duì)表達(dá)量�！窘Y(jié)果】1.BP和SCT分別對(duì)胃癌細(xì)胞MGC-803分別作用后,細(xì)胞的增殖抑制率均隨著B(niǎo)P和SCT作用濃度的增大呈增高的趨勢(shì),且隨藥物作用時(shí)間的增大呈增高的趨勢(shì)。BP和SCT對(duì)胃癌細(xì)胞MGC-803作用48h的IC50分別為5.73±0.75ug/ml和10.08±0.87mmol/L。鏡下觀察每個(gè)視野內(nèi),BP和SCT各濃度組和5-fu組細(xì)胞總數(shù)比空白對(duì)照組少,而形態(tài)變圓、出現(xiàn)核固縮的細(xì)胞比空白對(duì)照組多,且呈濃度依賴(lài)的趨勢(shì)。2.流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)結(jié)果顯示,不同濃度的bp分別對(duì)胃癌細(xì)胞mgc-803作用24h、48h后,其凋亡率從10.67%增加到76.19%,與空白對(duì)照組相比,具有顯著性差異(p0.05)。同時(shí),不同濃度的sct分別對(duì)胃癌細(xì)胞mgc-803作用24h、48h后,其凋亡率從15.61%增加到83.10%,與空白對(duì)照組相比,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。5-fu組24h、48h的凋亡率分別為50.52%和86.06%,與空白對(duì)照組相比,均具有顯著性差異(p0.05);此外,bp對(duì)胃癌細(xì)胞mgc-803作用24h后,隨著bp濃度的增大,其細(xì)胞周期阻滯在g2/m期的細(xì)胞比例從14.49%增加到39.39%,而sct對(duì)胃癌細(xì)胞mgc-803作用24h后,隨著sct濃度的增大,其細(xì)胞周期阻滯在g2/m期的細(xì)胞比例從13.51%增加到41.24%,與空白對(duì)照組相比,均具有顯著性差異(p0.05)。5-fu組細(xì)胞周期阻滯在g2/m期的細(xì)胞比例為21.93%,與空白對(duì)照組相比,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。3.bp和sct均能有效地降低胃癌細(xì)胞mgc-803內(nèi)atp和乳酸的生成。不同濃度的bp分別對(duì)胃癌細(xì)胞mgc-803作用4h、8h后,細(xì)胞內(nèi)atp含量從30.79umol/gprot減少到7.31umol/gprot,與空白對(duì)照組相比,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05);而不同濃度的sct分別對(duì)胃癌細(xì)胞mgc-803作用4h、8h后,細(xì)胞內(nèi)atp含量從28.24umol/gprot減少到6.76umol/gprot,與空白對(duì)照組相比,具有顯著性差異(p0.05)。5-fu組4h、8h細(xì)胞內(nèi)atp含量分別為20.21umol/gprot和10.34umol/gprot,均比空白對(duì)照組顯著降低(p0.05)。此外,不同濃度的bp分別對(duì)胃癌細(xì)胞mgc-803作用24h、48h后,細(xì)胞內(nèi)乳酸含量從84.91umol/gprot減少到18.92umol/gprot,與空白對(duì)照組相比,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05);而不同濃度的sct分別對(duì)胃癌細(xì)胞mgc-803作用24h、48h后,細(xì)胞內(nèi)乳酸含量從78.87umol/gprot減少到11.44umol/gprot,與空白對(duì)照組相比,具有顯著性差異(p0.05)。5-fu組24h、48h細(xì)胞內(nèi)乳酸含量分別為106.45umol/gprot和113.98umol/gprot,與空白對(duì)照組無(wú)顯著性差異(p0.05)。4.bp和sct能夠分別選擇地抑制胃癌細(xì)胞mgc-803內(nèi)hk和pfk-1的活性。不同濃度的bp分別對(duì)胃癌細(xì)胞mgc-803作用24h、48h后,細(xì)胞內(nèi)hk的活性從8.67u/gprot降低到1.98u/gprot,與空白對(duì)照組相比,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05);而不同濃度的sct分別對(duì)胃癌細(xì)胞mgc-803作用24h、48h后,細(xì)胞內(nèi)hk活性均無(wú)明顯變化,與空白對(duì)照組相比,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。5-fu組24h、48h的細(xì)胞內(nèi)hk活性分別為11.45u/gprot和10.99u/gprot,與空白對(duì)照組無(wú)顯著性差異(p0.05)。此外,不同濃度的sct分別對(duì)胃癌細(xì)胞mgc-803作用24h、48h后,細(xì)胞內(nèi)pfk-1的活性從19.01u/gprot降低到2.51u/gprot,與空白對(duì)照組相比,具有顯著性差異(p0.05),而不同濃度的bp分別對(duì)胃癌細(xì)胞mgc-803作用24h、48h后,細(xì)胞內(nèi)pfk-1的活性均無(wú)明顯變化,與空白對(duì)照組相比,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。5-fu組24h、48h的細(xì)胞內(nèi)pfk-1活性分別為25.31u/gprot和27.79u/gprot,與空白對(duì)照組無(wú)顯著性差異(p0.05)。5.bp和sct均能抑制胃癌細(xì)胞mgc-803內(nèi)bcl-2和survivin基因的mrna和蛋白的表達(dá),其相對(duì)表達(dá)量均隨著bp和sct作用濃度的增大呈降低的趨勢(shì)。此外,bp和sct均能呈濃度依賴(lài)性地促進(jìn)胃癌細(xì)胞mgc-803內(nèi)bax和cyt-c基因的mrna和蛋白的表達(dá)。5-fu也能有效地抑制胃癌細(xì)胞mgc-803內(nèi)bcl-2和survivin基因的mrna和蛋白的表達(dá),促進(jìn)bax和cyt-c基因的mrna和蛋白的表達(dá),與空白對(duì)照組相比,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p0.05)�！窘Y(jié)論】bp和sct對(duì)人胃癌細(xì)胞mgc-803的生長(zhǎng)和增殖均有較強(qiáng)的抑制作用�？赡苁莃p和sct分別通過(guò)選性地抑制胃癌細(xì)胞mgc-803內(nèi)hk和pfk-1的活性從而抑制糖酵解的效率,使得細(xì)胞內(nèi)atp含量生成減少,同時(shí)bp和SCT均下調(diào)抗凋亡基因Bcl-2和Suvivin的表達(dá),而上調(diào)促凋亡基因Bax表達(dá),激活線粒體通路,促進(jìn)Cyt-C的釋放增加,從而抑制胃癌細(xì)胞的生長(zhǎng)和增殖、誘導(dǎo)胃癌細(xì)胞發(fā)生凋亡。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類(lèi)號(hào)】：R735.2

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1563475