發(fā)布時(shí)間：2018-02-12 14:22

  本文關(guān)鍵詞： miR-31 miR-222 腫瘤干細(xì)胞 上皮性卵巢癌 TCGA　出處：《河北醫(yī)科大學(xué)》2017年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：目的:上皮性卵巢癌是致死率最高的婦科惡性腫瘤,大多數(shù)病人診斷時(shí)即為晚期。手術(shù)+紫杉醇/鉑類聯(lián)合化療是卵巢癌的標(biāo)準(zhǔn)治療方法。大多數(shù)患者最初對治療起反應(yīng),幾乎都會出現(xiàn)復(fù)發(fā)耐藥,晚期卵巢癌病人的5年生存率約30%。一些實(shí)驗(yàn)證據(jù)支持卵巢癌中具有干細(xì)胞特征的細(xì)胞亞群存在。腫瘤干細(xì)胞被認(rèn)為是腫瘤進(jìn)展、耐藥和復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的根源。miRNA是非編碼的小RNA分子,通過蛋白翻譯抑制或m RNA降解負(fù)向調(diào)控基因表達(dá)。據(jù)報(bào)道m(xù)iRNA對腫瘤干細(xì)胞的自我更新和分化起調(diào)控作用。本研究擬探索miR-31、miR-222在上皮性卵巢癌耐藥中的作用和分子機(jī)制,以期為卵巢癌預(yù)后判斷、治療分子靶標(biāo)的研究提供線索。方法:1卵巢癌細(xì)胞在干性培養(yǎng)基(無血清DMEM/F12/甲基纖維素,加入EGF、FGFb和B27)培養(yǎng)14天能聚集成球,通過連續(xù)球體形成實(shí)驗(yàn)建立SKOV3/self、ES-2/self細(xì)胞系;2用CCK-8的方法驗(yàn)證SKOV3/self細(xì)胞和COC1/DDP細(xì)胞對順鉑的耐藥性;3應(yīng)用熒光定量PCR技術(shù)篩選SKOV3和SKOV3/self細(xì)胞對、COC1和COC1/DDP細(xì)胞對中差異表達(dá)的miRNAs;4慢病毒感染SKOV3細(xì)胞,構(gòu)建穩(wěn)定過表達(dá)miR-31、miR-222的卵巢癌細(xì)胞系;5用CCK-8的方法檢測SKOV3-miR31、SKOV3-miR222細(xì)胞對順鉑的IC50;6 CCK-8和平板克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測細(xì)胞的增殖能力;7球體形成實(shí)驗(yàn)檢測細(xì)胞的球體形成能力;8劃痕及transwell實(shí)驗(yàn)檢測細(xì)胞的遷移和侵襲能力;9在miRWalk網(wǎng)站預(yù)測miR-31、miR-222的靶基因;10用TCGA和GEO數(shù)據(jù)庫分析卵巢癌樣本中miRNA和靶基因的關(guān)系以及與卵巢癌臨床病理特征和預(yù)后的關(guān)系�？偵嫫�(overall survival,OS)和無病生存期(disease free survival,DFS)的比較用Kaplan-Meier生存曲線log-rank檢驗(yàn);多因素COX比例風(fēng)險(xiǎn)回歸模型用來確定影響預(yù)后的獨(dú)立因素;11 GSEA是設(shè)計(jì)用來檢測預(yù)先定義的功能相關(guān)的基因集表達(dá)上的一致性差異。用TCGA RNA-seq數(shù)據(jù)通過GSEA分析靶基因相關(guān)的基因中富集的通路。結(jié)果:1 SKOV3/self細(xì)胞對順鉑的IC50(23.63μM)是SKOV3細(xì)胞(IC50=1.596μM)的14.8倍,COC1/DDP細(xì)胞對順鉑的IC50(7.482μM)是COC1細(xì)胞(IC50=2.566μM)的2.9倍。SKOV3/self細(xì)胞和COC1/DDP細(xì)胞對順鉑更耐藥。2 miR-31、miR-222在SKOV3/self細(xì)胞中分別上調(diào)2.7倍和3倍;miR-31、miR-222在ES-2/self細(xì)胞中分別上調(diào)2.353倍和1.846倍。3 SKOV3-miR31細(xì)胞和SKOV3-miR222細(xì)胞對順鉑的IC50、生長速度、遷移和侵襲能力沒有變化。4在0.1μM順鉑作用下,與對照SKOV3-TR細(xì)胞克隆形成率(5.15%)相比,SKOV3-miR31細(xì)胞(9.3%)和SKOV3-miR222細(xì)胞(8.6%)的克隆形成率明顯升高(P0.05)。間接反映了SKOV3-miR31和SKOV3-miR222細(xì)胞對順鉑的抵抗性。5 SKOV3-miR31細(xì)胞的2次成球率(54%)和SKOV3-miR222細(xì)胞的2次成球率(45%)高于SKOV3-TR細(xì)胞(16.8%)的2次成球率(P0.05)。表明miR-31和miR-222過表達(dá)增強(qiáng)卵巢癌細(xì)胞的干性。6 miR-222與卵巢癌預(yù)后負(fù)相關(guān),有淋巴管浸潤的患者miR-222表達(dá)量較高,提示miR-222可能與卵巢癌轉(zhuǎn)移有關(guān)。7 miR-31表達(dá)水平與腫瘤分級正相關(guān),提示miR-31可能與卵巢癌的分化程度相關(guān)。8 PBX2、CCNC、JARID2和SALL2與miR-31負(fù)相關(guān),DNMT3B和ALDH1A1與miR-222負(fù)相關(guān)。9 miR-31、miR-222的靶基因與卵巢癌腫瘤分期、分級和血管、淋巴管浸潤相關(guān),與預(yù)后正相關(guān)。10靶基因調(diào)節(jié)Wnt/β-catenin通路和Notch通路。說明與卵巢癌干細(xì)胞的干性相關(guān)。結(jié)論:miR-31、miR-222在SKOV3/self和ES-2/self細(xì)胞中表達(dá)上調(diào);miR-222與預(yù)后負(fù)相關(guān),且與淋巴管浸潤有關(guān),miR-31表達(dá)水平與腫瘤分級正相關(guān)。miR-31、miR-222可能通過對靶基因的抑制作用,進(jìn)而保持卵巢癌細(xì)胞的“干性”,促進(jìn)耐藥。
[Abstract]:Objective : To investigate the effect and molecular mechanism of miR - 31 and miR - 222 on ovarian cancer by using CCK - 8 method . The expression level of miR - 31 and miR - 222 was negatively correlated with the prognosis of ovarian cancer .

【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R737.31

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 ;γ-Secretase Inhibitor, DAPT Inhibits Self-renewal and Stemness Maintenance of Ovarian Cancer Stem-like Cells In Vitro[J];Chinese Journal of Cancer Research;2011年02期

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本文編號：1505836