miR-145對乳腺癌細胞及miR-100對卵巢癌細胞生物學特性的影響
本文關(guān)鍵詞: 乳腺癌 miR-145 miR-100 遷移 TGF-β1 STAT3 出處:《江蘇大學》2017年碩士論文 論文類型:學位論文
【摘要】:研究目的:微小RNA(mi RNA)是一種內(nèi)源性的不能編碼蛋白質(zhì)的RNA。研究發(fā)現(xiàn)多種mi RNAs可以參與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展進程并調(diào)節(jié)細胞生長、增殖、分化和凋亡。此外,報道發(fā)現(xiàn)miRNA的異常表達與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移有關(guān)。miR-145和mi R-100都是比較常見的mi RNAs,在多種腫瘤中異常表達,表現(xiàn)為促進或抑制腫瘤的進展。定量PCR檢測發(fā)現(xiàn)miR-145在乳腺癌組織中的表達比在對應(yīng)的癌旁組織中低,然后用miR-145 mimics和miR-145 inhibitor轉(zhuǎn)染乳腺癌細胞,檢測細胞在生長、遷移、增殖等方面的變化和對相關(guān)基因表達的影響,研究miR-145對乳腺癌細胞特性的影響,研究miR-145對乳腺癌的診斷或治療的影響。此外,用miR-100 mimics和miR-100inhibitor轉(zhuǎn)染卵巢癌細胞SKOV3,研究細胞生長、增殖以及遷移能力的變化,通過western blot實驗檢測miR-100處理后細胞的相關(guān)基因在蛋白水平表達的變化,研究miR-100對卵巢癌的診斷或治療的影響。研究方法:(1)用定量PCR技術(shù),檢測在乳腺癌組織及對應(yīng)的癌旁組織中mi R-145的表達水平,用軟件分析miR-145在兩種組織中的表達水平;(2)用順轉(zhuǎn)的方法將mir-145mimics和mir-145inhibitor轉(zhuǎn)染到乳腺癌細胞中,觀察細胞mcf-7和mda-mb-231在生長、遷移、增殖等方面的變化;并在卵巢癌細胞skov3中轉(zhuǎn)染mir-100mimics和mir-100inhibitor,研究細胞生長、增殖及遷移能力的變化;(3)通過westernblot實驗以及定量pcr實驗檢測mir-145處理后細胞的相關(guān)基因(轉(zhuǎn)化生長因子,transforminggrowthfactor-β1,tgf-β1)在蛋白水平和mrna水平表達的變化;通過westernblot實驗檢測mir-100處理后細胞的相關(guān)基因(信號傳導與轉(zhuǎn)錄激活因3,signaltransducerandactivatoroftranscription3,stat3)在蛋白水平表達的變化。研究結(jié)果:(1)通過定量pcr實驗,發(fā)現(xiàn)mir-145在乳腺癌組織中的表達下降,經(jīng)統(tǒng)計分析有統(tǒng)計學意義;(2)mir-145mimics抑制乳腺癌細胞的生長、遷移、增殖等能力,而mir-145inhibitor促進乳腺癌細胞的生長、遷移和增殖;(3)mir-100mimics抑制卵巢癌細胞skov3的生長、遷移、增殖等能力,而mir-100inhibitor促進卵巢癌細胞skov3的生長、遷移和增殖;(4)通過westernblot實驗以及定量pcr實驗檢測mir-145處理后細胞的相關(guān)基因TGF-β1在蛋白水平和mRNA水平表達的變化,發(fā)現(xiàn)miR-145處理細胞后TGF-β1的表達在mRNA水平?jīng)]有明顯變化,在蛋白水平的表達降低;western blot實驗檢測miR-100處理后細胞SKOV3相關(guān)基因STAT3蛋白水平表達的變化,發(fā)現(xiàn)miR-100處理細胞后STAT3在蛋白水平的表達降低。結(jié)論:(1)miR-145在乳腺癌組織中低表達,miR-145表達降低的現(xiàn)象有希望成為乳腺癌診斷的新標準;(2)miR-145負向調(diào)控乳腺癌細胞的遷移和增殖,通過恢復病人mi R-145的表達,將有可能為乳腺癌的治療提供幫助;(3)miR-100負向調(diào)控卵巢癌細胞的遷移和增殖,通過恢復病人mi R-100的表達,將有可能為卵巢癌的治療提供幫助。
[Abstract]:Objective: small RNA(mi RNAs are endogenous RNAs that can not encode proteins. Many kinds of mi RNAs have been found to be involved in tumorigenesis. Development and regulation of cell growth, proliferation, differentiation and apoptosis. In addition, abnormal expression of miRNA and tumorigenesis have been reported. Development and metastasis related to. MiR-145 and miR-100 are more common in the expression of mi RNAs. they are abnormal in many kinds of tumors. Quantitative PCR analysis showed that the expression of miR-145 in breast cancer tissues was lower than that in corresponding paracancerous tissues. Then the breast cancer cells were transfected with miR-145 mimics and miR-145 inhibitor, and the growth and migration of the cells were detected. The effects of miR-145 on the characteristics of breast cancer cells and the effects of miR-145 on the diagnosis or treatment of breast cancer were studied. Ovarian cancer cell line SKOV3 was transfected with miR-100 mimics and miR-100inhibitor to study the changes of cell growth, proliferation and migration ability. Western blot assay was used to detect the expression of related genes in the cells treated with miR-100 at the protein level. To study the effect of miR-100 on the diagnosis or treatment of ovarian cancer. The expression of miR-145 was detected in breast cancer tissues and adjacent tissues, and the expression level of miR-145 was analyzed by software. (2) transfection of mir-145mimics and mir-145inhibitor into breast cancer cells by transposition. The changes of mcf-7 and mda-mb-231 in growth, migration and proliferation were observed. Mir-100mimics and mir-100 inhibitors were transfected into ovarian cancer skov3 to study the changes of cell growth, proliferation and migration ability. The related genes (transforming growth factor) of cells treated with mir-145 were detected by westernblot assay and quantitative pcr assay. The expression of transforming growth factor- 尾 1tgf- 尾 1 at protein level and mrna level; The related genes (signal transduction and transcriptional activation factor 3) of the cells treated with mir-100 were detected by westernblot assay. Signaltransducerandactivatoroftranscription3. The expression of stat3) at protein level. The results showed that the expression of mir-145 in breast cancer tissues was decreased by quantitative pcr assay, and there was statistical significance by statistical analysis. Mir-145inhibitor inhibited the growth, migration and proliferation of breast cancer cells, while mir-145inhibitor promoted the growth, migration and proliferation of breast cancer cells. The ability of growth, migration and proliferation of ovarian cancer cell line skov3 was inhibited by Mil 100 mimics. Mir-100inhibitor promoted the growth, migration and proliferation of ovarian cancer cell line skov3. (4) the expression of TGF- 尾 1 was detected by westernblot assay and quantitative pcr assay. The expression of TGF- 尾 1 was detected at the protein level and mRNA level after mir-145 treatment. It was found that the expression of TGF- 尾 1 did not change at the level of mRNA, but decreased at the level of protein after miR-145 treatment. Western blot assay was used to detect the expression of SKOV3 related gene STAT3 protein after miR-100 treatment. It was found that the expression of STAT3 in the cells treated with miR-100 was lower than that in the control group. Conclusion the expression of STAT3 is low in breast cancer. The low expression of miR-145 may become a new standard for the diagnosis of breast cancer. MiR-145 negatively regulates the migration and proliferation of breast cancer cells, which may be helpful for the treatment of breast cancer by restoring the expression of miR-145 in patients. MiR-100 negatively regulates the migration and proliferation of ovarian cancer cells, which may be helpful for the treatment of ovarian cancer by restoring the expression of miR-100 in patients.
【學位授予單位】:江蘇大學
【學位級別】:碩士
【學位授予年份】:2017
【分類號】:R73-3
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