本文關(guān)鍵詞： 納米粒子 大豆蛋白 葉酸 靶向　出處：《安徽大學(xué)》2017年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：近年來,癌癥的發(fā)病率一直居高不下,尤其惡性腫瘤嚴(yán)重危害人們的身心健康。然而,針對癌癥的治療一直沒能取得突破性的研究。新興的細(xì)胞療法、免疫療法又或者基因治療雖然取得一定成效,但目前的臨床治療手段仍以手術(shù)、放療以及用各種各樣的抗腫瘤藥物化療為主。其中,手術(shù)和放療在臨床上的適用性存在一定局限性,而藥物化療的治療方式具有多元化、適用范圍較廣的特點。然而,單純的藥物化療也存在一些缺陷,如利用效率較低、對機(jī)體正常組織也會造成一定的損傷。與傳統(tǒng)的小分子化療藥物相比,納米藥物傳遞系統(tǒng)能顯著延長藥物半衰期、靶向性在腫瘤部位富集、降低患者痛苦以及經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。因此,近幾十年來針對納米藥物載體的研究在全世界范圍內(nèi)興起。合格的納米藥物載體應(yīng)當(dāng)在生理環(huán)境下具有良好的穩(wěn)定性、對機(jī)體無毒副作用并且在體內(nèi)易被清除,同時對藥物具有高負(fù)載以及可控釋放的能力。通過調(diào)節(jié)載體的組成、尺寸、形貌、表面電荷等,可以制備多種具有不同結(jié)構(gòu)的納米藥物載體,如脂質(zhì)體、膠束、聚合物納米粒、納米凝膠等,從而實現(xiàn)藥物的有效負(fù)載。同時,針對腫瘤部位異常的生理環(huán)境如弱酸性、較高的溫度、較高的GSH濃度等而開發(fā)的一系列具有刺激響應(yīng)性的納米藥物載體在一定程度上能夠達(dá)到較好的藥物控釋作用。此外,大部分納米藥物輸送體系需要進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)部才能最終實現(xiàn)治療效果,而一系列功能化(葉酸、轉(zhuǎn)鐵蛋白、半乳糖)修飾的載體能更好的促進(jìn)納米載體的細(xì)胞攝取,提高藥物在胞內(nèi)的富集。本論文以天然產(chǎn)物大豆分離蛋白為原材料設(shè)計了一種尺寸均一、結(jié)構(gòu)穩(wěn)定的納米粒子作為藥物載體,并在其表面修飾腫瘤靶向小分子配體葉酸,以達(dá)到腫瘤靶向富集和pH依賴釋放藥物的目的,具體工作如下:(1)以酶法改性為主,探究出最優(yōu)條件降解大豆分離蛋白,再通過離心、透析等純化方法獲得具有良好水溶性的低分子量的大豆蛋白(SP)。通過正交試驗獲得了大豆分離蛋白的酶法改性的最佳條件。最佳反應(yīng)條件為:0.9%、酶濃度、酶解時間11h,加熱預(yù)處理15min,底物濃度7%。SDS-PAGE蛋白凝膠電泳顯示大豆蛋白分子量約為15～17KDa,分布相對集中。(2)以水溶性大豆蛋白為親水性的大分子材料,3-丙烯酰氨基苯硼酸為疏水性單體,通過自由基共聚的方法制備得到大豆蛋白納米粒子(SPNPs)。將葉酸(FA)修飾到大豆蛋白側(cè)鏈,用同樣的方法制備得到靶向大豆蛋白納米粒子(FA-SPNPs)。馬爾文納米粒度儀(DLS)檢測顯示兩種納米粒子均有很好的分散性,粒徑約在200 nm,且在生理環(huán)境下具有良好的穩(wěn)定性。透射電鏡和掃描電鏡顯示兩種粒子形貌規(guī)整,整體呈球形,分布均一。將抗腫瘤藥物阿霉素(DOX)負(fù)載到納米粒子上,得到的載藥納米粒子體外藥物釋放具有pH依賴性。(3)利用平面及三維細(xì)胞模型詳細(xì)研究了兩種載藥納米粒子的細(xì)胞攝取及抗腫瘤活性。激光共聚焦顯微鏡及流式細(xì)胞儀觀察結(jié)果證明兩種載藥納米粒子均能被平面細(xì)胞攝取,而葉酸修飾的納米粒子能更有效地進(jìn)入細(xì)胞;MTT細(xì)胞毒性實驗表明空白納米載體無毒性,有較好的生物相容性;載藥納米粒子殺傷細(xì)胞呈劑量依賴性;三維細(xì)胞模型實驗發(fā)現(xiàn)葉酸修飾的靶向載藥納米粒子能更有效地滲透到多細(xì)胞球體內(nèi)部從而抑制球體生長;構(gòu)建小鼠皮下異種移植瘤模型,并進(jìn)行藥物分布、抗腫瘤評估、組織學(xué)研究;結(jié)果表明,載藥納米粒子在體內(nèi)有更長久的循環(huán)并在腫瘤部位有更高的富集,靶向納米粒子有更顯著的抑瘤效果,抑制率達(dá)到70.39%;組織切片表明載藥納米粒子能降低阿霉素的心臟毒性并且對機(jī)體主要組織器官沒有顯現(xiàn)損傷。
[Abstract]:A series of nano - drug carriers with different structure , such as liposomes , micelles , polymer nanoparticles , nano - gels and the like , can be prepared into a series of nano - drug carriers with different structures , such as liposomes , micelles , polymer nanoparticles , nano - gels , etc . The optimal conditions for the enzymatic modification of soybean protein isolate were obtained by orthogonal experiments . The best reaction conditions were : 0.9 % , enzyme concentration , enzymatic hydrolysis time 11h , heating pretreatment 15min , substrate concentration 7 % .

【學(xué)位授予單位】：安徽大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R91

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