本文關(guān)鍵詞： 呼吸機相關(guān)性肺損傷(VILI) ras相關(guān)C3相關(guān)肉毒素底物1(Rac1) 細胞外信號調(diào)節(jié)激酶(ERK) 肌動蛋白纖維(F-actin)細胞骨架　出處：《廣西醫(yī)科大學(xué)》2017年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：目的:探討Rac1蛋白在呼吸機相關(guān)性肺損傷發(fā)病機制中的作用。方法:將30只健康潔凈級SD大鼠(雌雄各半)隨機分為自主呼吸組(A組)、正常潮氣量(VT)組(B組,VT=6ml·kg-1)和大VT組(C組,VT=40ml·kg-1),每組10只。各組大鼠經(jīng)腹腔注射麻醉后行氣管切開插管術(shù)。其中A組保持大鼠自主呼吸,B組按6ml·kg-1的潮氣量行機械通氣,C組則按40ml·kg-1的潮氣量給予機械通氣,240min后經(jīng)心臟穿刺放血處死大鼠。分別收集各組大鼠的血清、支氣管肺泡灌洗液(BALF)及肺組織標本,利用微量電子秤測定肺組織的濕干比重(W/D);通過透射電子顯微鏡(TEM)觀察肺泡上皮細胞的超微結(jié)構(gòu);采用蘇木精-伊紅染色(HE)及光學(xué)顯微鏡觀察大鼠肺組織病理變化;使用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)測定BALF與血清中白介素-1β(IL-1β)、白介素-6(IL-6)、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、髓過氧化物酶(MPO)及巨噬細胞炎性蛋白-2(MIP-2)含量變化;通過免疫組織化學(xué)法檢測Rac1、磷酸化細胞外信號調(diào)節(jié)激酶(p-ERK)及肌動蛋白(F-actin)在肺組織中的表達;采用蛋白質(zhì)免疫印跡法(Western Blot)檢測Rac1、p-ERK及F-actin在各組大鼠肺組織中的表達差異;利用免疫熒光技術(shù)(IFT)在共聚焦顯微鏡下觀察肺組織中Rac1及F-actin的表達情況;應(yīng)用實時熒光定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(q RT-PCR)檢測Rac1、ERK及F-actin的基因m RNA的表達水平。結(jié)果:與A組及B組比較,C組大鼠肺組織的W/D比值有顯著增高(6.64±0.88比1.79±0.36、4.76±0.73,P0.05)。光學(xué)顯微鏡觀察HE染色顯示,A組肺組織無明顯病理學(xué)改變;B組肺組織有輕微水腫及少量炎性細胞浸潤;C組肺組織明顯水腫,肺間隔增寬,肺泡充血,伴有大量炎性細胞浸潤,肺泡結(jié)構(gòu)紊亂。C組肺組織病理學(xué)評分明顯高于A組和B組(評分比:12.00±2.00比6.00±1.51、8.50±0.53,均P0.05)。TEM檢測結(jié)果提示,A組肺泡上皮細胞超微結(jié)構(gòu)無明顯改變;B組肺泡上皮細胞中板層小體等細胞器減少,細胞膜絨毛分布欠均勻;C組肺泡上皮細胞形態(tài)不規(guī)則,核固縮明顯,胞質(zhì)中板層小體及線粒體等細胞器數(shù)量明顯減少且分布不均。ELISA結(jié)果顯示,與A組及B組比較,C組大鼠血清及BALF中IL-1β、IL-6、TNF-α、MPO、MIP-2均有明顯升高[BALF中IL-1β(ng/L):121.51±25.62比24.03±7.46、63.8±18.10,IL-6(ng/L):136.65±32.65比31.35±10.51、52.23±6.95,TNF-α(ng/L):97.96±14.75比10.12±2.58、46.45±16.89,MPO(ng/L):0.80±0.31比0.08±0.04、0.24±0.09,MIP-2(ng/L):144.41±28.86比41.22±20.65、79.23±8.85;血清中IL-1β(ng/L):104.18±15.10比20.31±8.25、57.35±15.97,IL-6(ng/L):46.57±11.52比22.65±7.49、44.20±13.27,TNF-α(ng/L):39.41±6.53比5.37±1.87、19.25±4.55,MPO(ng/L):0.66±0.24比0.06±0.03、0.23±0.07,MIP-2(ng/L):109.20±25.78比22.77±8.37、57.32±24.51],組間比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。免疫組織化學(xué)法檢測顯示,A組大鼠肺組織僅有極少量的p-ERK、Rac1和F-actin表達陽性;B組陽性表達有所增加;C組中p-ERK、Rac1和F-actin的蛋白陽性表達均有明顯增加。Western Blot結(jié)果亦提示:C組大鼠肺組織中p-ERK、Rac1和F-actin的蛋白表達明顯高于A組和B組(p-ERK蛋白灰度值比:1.15±0.36比0.61±0.23、0.88±0.22,Rac1蛋白灰度值比:0.91±0.16比0.48±0.11、0.55±0.10,F-actin蛋白灰度值比:0.70±0.09比0.49±0.08、0.55±0.04,組間比較P0.05)。共聚焦顯微鏡下IFT顯示,C組肺組織中Rac1和F-actin蛋白廣泛分布于細胞膜骨架及細胞質(zhì)中,較A組和B組更為顯著。而q RT-PCR檢測ERK和Rac1的m RNA水平顯示,C組較A組及B組的比值亦更高[ERK m RNA(2-ΔΔCt):8.23±2.83比1、3.02±1.38,Rac1 m RNA(2-ΔΔCt):4.45±2.26比1、1.22±0.39,均P0.05]。結(jié)論:Rac1蛋白可能通過激活Rac1/MAPK/ERK信號通路引起大鼠肺組織中F-actin表達上調(diào),導(dǎo)致肺泡上皮細胞骨架重構(gòu)及細胞膜通透性改變從而介導(dǎo)或加重VILI。
[Abstract]:Objective : To investigate the role of Rac1 protein in the pathogenesis of ventilator - related lung injury . The expression of Rac1 , p - ERK and F - actin in lung tissues was measured by means of Western Blot . The levels of Rac1 and F - actin in lung tissues of group C were significantly higher than those in group A and group B .

【學(xué)位授予單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R614

【參考文獻】

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本文編號：1476363