本文關(guān)鍵詞： 食管癌 放化療敏感性 MGMT Survivin　出處：《安徽醫(yī)科大學(xué)》2017年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：目的比較KYSE-450、KYSE-70、TE-1食管鱗癌細(xì)胞株對(duì)放射線和化療藥物(氟尿嘧啶和順鉑)的敏感性,并檢測(cè)O^6-甲基鳥嘌呤-DNA甲基轉(zhuǎn)移酶(MGMT)和生存蛋白(Survivin)在其中的表達(dá)情況。方法1.MTT實(shí)驗(yàn)檢測(cè)KYSE-450、KYSE-70、TE-1食管鱗癌細(xì)胞株在不同濃度順鉑和氟尿嘧啶藥物中的存活分?jǐn)?shù),并利用半數(shù)抑制濃度(IC50)值評(píng)估細(xì)胞株對(duì)化療藥物的耐受性;2.克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)KYSE-450、KYSE-70、TE-1食管鱗癌細(xì)胞株在不同劑量照射后的存活分?jǐn)?shù),并利用單擊多靶模型擬合劑量存活曲線計(jì)算放射生物學(xué)參數(shù)D0、Dq、N、SF2以評(píng)價(jià)3株細(xì)胞系對(duì)放射線的敏感性;3.Western blot和q RT-PCR檢測(cè)KYSE-450、KYSE-70、TE-1食管鱗癌細(xì)胞株中MGMT和Survivin的表達(dá)情況。結(jié)果1.KYSE-450、KYSE-70、TE-1細(xì)胞照射劑量存活曲線及其生物學(xué)參數(shù):采用Graph Pad Prism 5.0進(jìn)行細(xì)胞生存曲線的擬合,結(jié)果顯示,隨著照射劑量的增加,KYSE-450、KYSE-70、TE-1食管鱗癌細(xì)胞株的細(xì)胞存活分?jǐn)?shù)都相應(yīng)減少。上述結(jié)果表明,KYSE-70對(duì)放射線較為敏感,TE-1和KYSE-450對(duì)放射線均較為耐受。2.KYSE-450、KYSE-70、TE-1細(xì)胞在不同濃度DDP和5-FU中的劑量存活曲線及其IC50值:DDP和5-FU作用48 h,食管鱗癌細(xì)胞株KYSE-450、KYSE-70、TE-1在不同濃度化療藥物中細(xì)胞存活率具有明顯差異,說明其對(duì)不同濃度化療藥物的耐受能力具有明顯不同,而根據(jù)IC50計(jì)算軟件計(jì)算出不同細(xì)胞株相對(duì)不同化療藥物的IC50值,也證實(shí)了食管鱗癌細(xì)胞株TE-1對(duì)化療藥物DDP(TE-1細(xì)胞對(duì)DDP的IC50值約是KYSE-70的9倍)和5-FU(TE-1細(xì)胞對(duì)5-FU的IC50值約是KYSE-70的133倍)較為耐受。與TE-1細(xì)胞的IC50值比較,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=199.9、157.9,P0.05)。3.MGMT和Survivin蛋白在KYSE-450、KYSE-70、TE-1細(xì)胞系中的表達(dá):TE-1細(xì)胞MGMT蛋白和Survivin蛋白表達(dá)最高,其次是KYSE-70、KYSE-450。與TE-1細(xì)胞MGMT蛋白和Survivin蛋白表達(dá)水平比較,差異均統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=367.7、213.5,P0.05)。4.實(shí)時(shí)熒光定量PCR驗(yàn)證:針對(duì)MGMT和Survivin在TE-1(耐受細(xì)胞株)和KYSE-70(敏感細(xì)胞株)中的表達(dá)情況,β-actin作為內(nèi)參對(duì)照,使用實(shí)時(shí)熒光定量PCR對(duì)其表達(dá)差異進(jìn)行驗(yàn)證。MGMT在TE-1細(xì)胞中,與KYSE-70相比表達(dá)高(5.47±0.32)倍;Survivin在TE-1細(xì)胞中,與KYSE-70相比表達(dá)高(2.73±0.26)倍,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=24.63、6.84,P0.05)。MGMT和Survivin的表達(dá)在TE-1中均高于KYSE-70,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論1.在用MTT實(shí)驗(yàn)檢測(cè)TE-1和KYSE-70化療敏感性的實(shí)驗(yàn)中,TE-1在順鉑和氟尿嘧啶中的IC50值高于KYSE-70(P0.05),表明在化療藥物順鉑和氟尿嘧啶中,KYSE-70對(duì)其較為敏感,TE-1則較為耐受。2.在用克隆形成實(shí)驗(yàn)比較TE-1和KYSE-70對(duì)放射線的敏感性實(shí)驗(yàn)中,細(xì)胞生存曲線及各項(xiàng)參數(shù)均顯示TE-1較KYSE-70對(duì)放射線耐受(P0.05)。3.在用蛋白質(zhì)免疫印記(Western blot)檢測(cè)MGMT和Survivin在TE-1和KYSE-70的表達(dá)水平,結(jié)果顯示TE-1細(xì)胞MGMT蛋白和Survivin蛋白表達(dá)最高,其次是KYSE-70、KYSE-450。4.在用實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)MGMT和Survivin在TE-1(耐受細(xì)胞株)和KYSE-70(敏感細(xì)胞株)中的表達(dá)情況,結(jié)果顯示MGMT在TE-1細(xì)胞中,與KYSE-70相比表達(dá)高;Survivin在TE-1細(xì)胞中,與KYSE-70相比表達(dá)高。5.MGMT和Survivin在對(duì)化療藥物和放射線耐受的細(xì)胞株中表達(dá)水平較高,在對(duì)化療藥物和放射線敏感的細(xì)胞株中表達(dá)較低,這為更好地研究食管癌放化療耐受機(jī)制提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
[Abstract]:The survival fraction of KYSE - 450 , KYSE - 70 , TE - 1 esophageal squamous cell carcinoma cell line in different concentrations of DDP and 5 - FU was measured by MTT assay . Compared with KYSE - 70 , the expression of MGMT and Survivin in TE - 1 cells was higher than that of KYSE - 70 .

【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R735.1

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1451519