本文關(guān)鍵詞：基于Nrf2信號通道研究芹菜素對氧化損傷小鼠視網(wǎng)膜的保護(hù)作用　出處：《南京中醫(yī)藥大學(xué)》2017年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：目的:以C57BL/6小鼠為研究對象,研究芹菜素對氧化損傷小鼠視網(wǎng)膜的保護(hù)作用;通過比較小鼠視網(wǎng)膜氧化損傷程度的差異以及藥物干預(yù)前后Nrf2及相關(guān)下游靶基因酶的研究,探明Nrf2信號通道在干性AM)發(fā)病過程中起的作用以及芹菜素防治干性AMD的作用機制。方法:將C57BL/6小鼠隨機分成五組:正常對照組、模型對照組、給藥組;模型對照組..高脂飲食+氫醌造模,通過造成小鼠視網(wǎng)膜氧化損傷,模擬干出干性AMD的動物模型;給藥組芹菜素的劑量為:芹菜素低劑量組l00mg/kg/d,中劑量組200mg/kg/d,高劑量組400mg/kg/d;采取電鏡掃描方式,觀察RPE下沉積物厚度和寬度、Bruch膜厚度,評價造模情況及芹菜素對氧化損傷小鼠視網(wǎng)膜的保護(hù)作用;利用比色法測定出小鼠血清SOD、GSH-Px、CAT活性和ROS、MDA含量;利用熒光定量PCR、western blot檢測芹菜素對正常動物、模型動物干預(yù)后視網(wǎng)膜Nrf2、HO-1、NQO-1、GCL的轉(zhuǎn)錄及表達(dá)。結(jié)果:電鏡下觀察實驗小鼠視網(wǎng)膜RPE發(fā)生改變,RPE層下可見大量脂性堆積物,Bruch膜明顯增厚,出現(xiàn)與AMD相類似的典型病理改變,表明造模成功。小鼠經(jīng)過芹菜素哥劑量灌胃后,與模型對照組相比,低、中、高劑量組小鼠血清中總ROS水平均明顯降低(低、中、高劑量組均P0.01),血清中MDA含量亦顯著降低(低、中、高劑量組均P0.01),濃度越高降低越明顯,呈劑量依賴關(guān)系。說明芹菜素可以降低血清中總ROS和MDA的含量,可以改善模型小鼠視網(wǎng)膜的氧化應(yīng)激狀態(tài),減少活性氧及各種氧自由基對小鼠視網(wǎng)膜的損傷。Western Blot結(jié)果顯示,經(jīng)高脂飲食+氫醌造成氧化應(yīng)激后,細(xì)胞質(zhì)內(nèi)的Nrf2蛋白表達(dá)明顯減少,而細(xì)胞核內(nèi)Nrf2蛋白表達(dá)明顯增高,證實了在受到氧化應(yīng)激時,Nrf2會在核內(nèi)發(fā)生轉(zhuǎn)移,使自身處于氧化應(yīng)激狀態(tài)。并且PCR檢測Nrf2、HO-1、NQO-1、GCL mRNA表達(dá)水平結(jié)果顯示:與正常對照組相比,模型組Nrf2、HO-1、NQO-1、GCLmRNA表達(dá)水平明顯升高(P0.01),說明高脂飲食+氫醌造模使小鼠機體處于氧化應(yīng)激狀態(tài),從而激活Nrf2通道,激發(fā)自身釋放Ⅱ相酶發(fā)揮抗氧化作用;經(jīng)芹菜素治療后,與模型對照組相比,給藥組的Nrf2、HO-1、NQO-1、GCL mRNA表達(dá)水平均有所下降,提示這可能與模型組受到氧化刺激后,體內(nèi)產(chǎn)生了強烈的氧化應(yīng)激狀態(tài),為了是自身處于穩(wěn)定狀態(tài),保護(hù)視網(wǎng)膜免受氧化損傷有關(guān)。結(jié)論:高脂飲食+氫醌喂養(yǎng),可以成功制造氧化損傷小鼠視網(wǎng)膜模型,通過觀察RPE的改變、RPE下沉積物及Bruch膜厚度情況,證明該造模方法可以成功模擬干性AMD的動物模型;芹菜素可以提高氧化損傷小鼠血清中抗氧化酶的活性,降低血清總活性氧(R0S)及丙二醛(MDA)的含量,從而發(fā)揮抗氧化應(yīng)激作用,而且呈現(xiàn)劑量依賴性;芹菜素治療后,與模型對照組相比,給藥組的Nrf2、HO-1、NQO-1、GCLmRNA表達(dá)水平均有所下降,可能是芹菜素對于模型小鼠體內(nèi)氧化/抗氧化失平衡的狀態(tài),代償性的減少了 Nrf2等蛋白的表達(dá)以增加機體的抗氧化能力,進(jìn)而調(diào)節(jié)小鼠體內(nèi)環(huán)境平衡,減少氧化應(yīng)激所致的損傷。經(jīng)過芹菜素治療后,小鼠血清中總ROS水平均明顯降低,血清中自由基代謝產(chǎn)物MDA含量亦顯著降低,SOD、GSH-Px、CAT的活性明顯提高,說明芹菜素具有清除機體自由基的能力,顯示機體的抗氧化能力明顯的提高,這為防治干性AMD提供了有效的契機。
[Abstract]:Objective : To study the protective effects of apigenin on the retina of mice with oxidative damage induced by oxidative damage in C57BL / 6 mice . The mechanism of Nrf2 signal pathway in the pathogenesis of dry AM was studied by comparing the degree of retinal oxidative damage and the study of Nrf2 and related downstream target genes . Methods : C57BL / 6 mice were randomly divided into five groups : normal control group , model control group , administration group , model control group . The contents of serum SOD , GSH - Px , CAT activity and ROS and MDA in mice were observed under electron microscope . The results showed that the contents of SOD , GSH - Px , CAT activity and ROS and MDA in serum of mice were significantly lower than those in the control group . Conclusion : Compared with the control group , the expression level of Nrf2 , HO - 1 , NQO - 1 and GCL mRNA in the model group decreased significantly ( P0.01 ) . The MDA content of free radical metabolites in serum was significantly decreased , and the activities of SOD , GSH - Px and CAT increased significantly , indicating that apigenin had the ability to scavenge free radicals of organism , and showed that the anti - oxidation ability of the organism was obviously improved , which provided an effective opportunity for the prevention and treatment of dry AMD .

【學(xué)位授予單位】：南京中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R774

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：1417549