本文關(guān)鍵詞：CD20和PD-L1雙靶向納米免疫體系的構(gòu)建及其抗淋巴瘤協(xié)同效應(yīng)機(jī)制研究　出處：《聊城大學(xué)》2017年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

  更多相關(guān)文章： 抗CD20抗體 抗PD-L1抗體 抗體團(tuán)簇 藥物介導(dǎo)的細(xì)胞毒性作用 細(xì)胞凋亡

【摘要】：利妥昔單抗(Rituximab)于1997年被FDA批準(zhǔn)用于醫(yī)療使用,它是全球第一個(gè)被批準(zhǔn)用于臨床進(jìn)行非霍奇金淋巴瘤(NHL)治療的IgG1單克隆抗體。盡管Rituximab在前期腫瘤治療方面取得了一定的療效,但是,臨床治療中發(fā)現(xiàn),抗CD20抗體在體內(nèi)的半衰期短,作用效果溫和,并且多次用藥后容易產(chǎn)生耐藥性。此外,由于免疫檢查點(diǎn)的存在,腫瘤細(xì)胞容易發(fā)生免疫逃逸。因此,從抗體作用機(jī)制和腫瘤微環(huán)境出發(fā),構(gòu)建多功能抗體提高其療效是臨床抗體靶向治療亟待解決的問(wèn)題。近年來(lái),隨著納米技術(shù)和材料科學(xué)的發(fā)展,基于納米載體技術(shù)的遞送系統(tǒng)為解決上述問(wèn)題提供了完美的解決方案。本課題中,我們選用支化陽(yáng)離子高分子聚乙烯亞胺(PEI,分子量為750 kDa),在其側(cè)基NH2上修飾可與抗體反應(yīng)的橋聯(lián)鍵MAL-PEG-SCM分子,并大量偶聯(lián)抗CD20和PD-L1抗體,構(gòu)建CD20和PD-L1分子雙靶向納米抗體團(tuán)簇體系(縮寫簡(jiǎn)稱PEI-RTX-AZL)。動(dòng)靜態(tài)光散射儀(Dynamic Laser Light Scattering,DLLS),透射電子顯微鏡(TEM),馬爾文zeta電位儀等的測(cè)試結(jié)果證明了抗體團(tuán)簇合成成功,其抗體的偶聯(lián)效率為63%,具有橢球拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)�？贵w團(tuán)簇與Daudi細(xì)胞的結(jié)合能力和解離能力的分析顯示,與Rituximab相比,其具有相似的結(jié)合能力,但是對(duì)CD20分子的解離能力明顯降低,也就是說(shuō)抗體團(tuán)簇可以更長(zhǎng)時(shí)間的結(jié)合在靶細(xì)胞表面,持續(xù)作用時(shí)間更持久,這為進(jìn)一步提升抗體療效打下了基礎(chǔ)。接下來(lái),在體外抗腫瘤活性研究中,本課題驚喜的發(fā)現(xiàn):抗體團(tuán)簇PEI-RTX-AZL對(duì)Daudi細(xì)胞除了具有增殖抑制和細(xì)胞毒性作用外,還具有的抗體依賴細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性作用(ADCC)和程序性細(xì)胞死亡(PCD)作用。本課題進(jìn)一步的對(duì)抗體團(tuán)簇的抗腫瘤作用機(jī)制進(jìn)行了探索。相比游離的母代抗體,抗體團(tuán)簇誘導(dǎo)Daudi細(xì)胞發(fā)生凋亡的過(guò)程可以概括為以下兩方面:一方面,抗CD20抗體的Fab段特異性靶向CD20陽(yáng)性的Daudi細(xì)胞,通過(guò)抗體Fc段與NK細(xì)胞等效應(yīng)細(xì)胞的FcgR結(jié)合,啟動(dòng)ADCC作用,效應(yīng)細(xì)胞攻擊靶細(xì)胞,使其裂解;并將抗PD-L1抗體遞送至腫瘤細(xì)胞表面,通過(guò)抗PD-L1抗體來(lái)阻斷PD-1/PD-L1信號(hào)通路,恢復(fù)CTL細(xì)胞的抗腫瘤活性,兩種抗體協(xié)同發(fā)揮抗腫瘤作用;另一方面,750 kDa的支狀長(zhǎng)鏈PEI在Rituximab抗體的靶向作用下,與CD20分子結(jié)合,使抗原發(fā)生交聯(lián)或抗原受限,誘導(dǎo)靶細(xì)胞內(nèi)的溶酶體破裂或分布彌散,釋放溶酶體組織蛋白酶B(Cathepsin B)進(jìn)入胞漿,Cathepsin B作用于線粒體,致使線粒體膜的通透性增大,從而釋放前凋亡分子(細(xì)胞色素C)進(jìn)入細(xì)胞漿,激活凋亡信號(hào)通路(如Caspase),誘導(dǎo)細(xì)胞發(fā)生凋亡級(jí)聯(lián)反應(yīng)。本課題還對(duì)抗體團(tuán)簇的體內(nèi)抗腫瘤效應(yīng)開(kāi)展了研究。為了更加直觀地觀察抗體團(tuán)簇在動(dòng)物水平的抗腫瘤作用,我們構(gòu)建了Balb/c裸鼠的皮下實(shí)體腫瘤模型,并對(duì)抗體團(tuán)簇PEI-RTX-AZL和單克隆抗體Rituximab的抑瘤效應(yīng)進(jìn)行了觀察和分析。研究表明,抗體團(tuán)簇組比單抗組具有更強(qiáng)的抗腫瘤效果,減輕腫瘤負(fù)荷。綜上所述,抗體團(tuán)簇通過(guò)抗CD20抗體特異性靶向腫瘤細(xì)胞,抗PD-L1抗體阻斷PD-1/PD-L1信號(hào)通路,恢復(fù)CTL細(xì)胞的抗腫瘤活性,兩種抗體協(xié)同發(fā)揮抗腫瘤作用,進(jìn)一步增強(qiáng)增殖抑制、ADCC和PCD作用,從而充分發(fā)揮療效。本課題通過(guò)系統(tǒng)的載體設(shè)計(jì)、抗體偶聯(lián)、體外抗腫瘤機(jī)制和體內(nèi)抑瘤效果等研究,為今后設(shè)計(jì)更加有效的能夠臨床應(yīng)用的靶向治療藥物提供方法指導(dǎo)和理論依據(jù)。
[Abstract]:Anti - CD20 antibody has been approved by FDA in 1997 for medical use . It is the first IgG1 monoclonal antibody to be approved for clinical use in non - Hodgkin ' s lymphoma ( NHL ) . In order to observe the anti - tumor effect of anti - CD20 antibody , the anti - PD - L1 antibody block PD - 1 / PD - L1 signaling pathway , and the anti - tumor effect of anti - PD - L1 antibody against PD - 1 / PD - L1 was observed .

【學(xué)位授予單位】：聊城大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R733.1

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 楊錫強(qiáng);;牛奶和大豆制品喂養(yǎng)兒的抗體反應(yīng)[J];國(guó)外醫(yī)學(xué)(兒科學(xué)分冊(cè));1983年02期

2 凌育;鳥類抗體的特點(diǎn)及其應(yīng)用前景[J];廣東畜牧獸醫(yī)科技;1995年04期

3 周慶申;預(yù)溫后抗體反應(yīng)減弱或者喪失[J];國(guó)外醫(yī)學(xué).輸血及血液學(xué)分冊(cè);2004年01期

4 Kadin SB ,Otternesss IG ,潘啟超;抗體作為藥物的載體與毒性逆轉(zhuǎn)劑[J];國(guó)外醫(yī)學(xué).藥學(xué)分冊(cè);1982年01期

5 喬春霞;沈倍奮;;重組多克隆抗體——一類新的治療制劑[J];中國(guó)免疫學(xué)雜志;2009年01期

6 黃永安;葛錫銳;;淋巴結(jié)細(xì)胞體外產(chǎn)生抗體的研究[J];實(shí)驗(yàn)生物學(xué)報(bào);1963年03期

7 史英輝;丙型肝炎病毒感染的抗體反應(yīng)與疾病的聯(lián)系[J];預(yù)防醫(yī)學(xué)文獻(xiàn)信息;1996年03期

8 施桂英;周亞非;黃次波;黃烽;虞瑞堯;方彬;劉萬(wàn)銀;;黑龍江省Lyme病的臨床表現(xiàn)及血清抗體反應(yīng)[J];中國(guó)人民解放軍軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院學(xué)報(bào);1991年03期

9 張遠(yuǎn)惠;;鏈球菌抗體與風(fēng)濕熱的早期診斷[J];四川醫(yī)學(xué);1983年02期

10 童貽剛,王海濤;重組完整抗體研究進(jìn)展[J];生物技術(shù)通訊;2001年03期

相關(guān)會(huì)議論文 前6條

1 向軍儉;;抗體技術(shù)及其在傳染病研究中的應(yīng)用[A];新發(fā)和再發(fā)傳染病防治熱點(diǎn)研討會(huì)論文集[C];2010年

2 向軍儉;;抗體技術(shù)研究和應(yīng)用[A];新發(fā)和再發(fā)傳染病防治熱點(diǎn)研討會(huì)論文集[C];2011年

3 孫小林;楊倩;姜穎;周飛;;食蟹猴T細(xì)胞依賴性抗體反應(yīng)實(shí)驗(yàn)中用于檢測(cè)KLH抗體濃度的ELISA方法的開(kāi)發(fā)和驗(yàn)證[A];2013年（第三屆）中國(guó)藥物毒理學(xué)年會(huì)暨藥物非臨床安全性評(píng)價(jià)研究論壇論文摘要[C];2013年

4 孫小林;楊倩;姜穎;周飛;;食蟹猴T細(xì)胞依賴性抗體反應(yīng)實(shí)驗(yàn)中用于檢測(cè)KLH抗體濃度的ELISA方法的開(kāi)發(fā)和驗(yàn)證[A];中國(guó)藥理學(xué)與毒理學(xué)雜志(2013年6月第27卷第3期)[C];2013年

5 任克吉;韓松勇;;氫化可的松琥珀酸鈉在急癥臨床的應(yīng)用[A];第六屆全國(guó)危重病學(xué)術(shù)交流大會(huì)論文匯編[C];2005年

6 任克吉;韓松勇;;氫化可的松琥珀酸鈉在急癥臨床的應(yīng)用[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)急診醫(yī)學(xué)分會(huì)全國(guó)第11屆創(chuàng)傷復(fù)蘇中毒學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2005年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前6條

1 劉霞;兩種廣譜抗體可強(qiáng)效中和艾滋病病毒[N];科技日?qǐng)?bào);2009年

2 常麗君;17種新型強(qiáng)效廣譜HIV抗體閃亮登場(chǎng)[N];科技日?qǐng)?bào);2011年

3 記者 黃磊　周芳;“要知道能成功,還叫什么探索呢”[N];湖北日?qǐng)?bào);2010年

4 張樂(lè);青壯年易染“非典”探因[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2003年

5 謝蜀生;一個(gè)神秘器官的發(fā)現(xiàn)[N];大眾科技報(bào);2011年

6 陸志城;為AD疫苗研發(fā)帶來(lái)新希望[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2002年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 王貞;基于抗體多維數(shù)據(jù)的解析探討丙型肝炎病毒抗體親和力在病程中的動(dòng)力學(xué)變化及與HLA多態(tài)性的關(guān)聯(lián)[D];大連醫(yī)科大學(xué);2016年

2 張艷;一系列靶向gp120的抗體中和HIV-1病毒機(jī)制的分子動(dòng)力學(xué)模擬研究[D];蘭州大學(xué);2016年

3 陳冠杰;聚乙二醇修飾的抗體的理化性質(zhì)及生物學(xué)活性[D];中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué);1985年

4 耿樹生;抗CD20抗體的改造及其生物活性研究[D];河北大學(xué);2007年

5 劉銀星;嵌合抗CD20抗體突變體的表達(dá)及其作用機(jī)理的研究[D];中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2003年

6 趙向東;CD34抗體表面修飾去細(xì)胞光氧化牛頸靜脈再內(nèi)皮化的研究[D];中南大學(xué);2008年

7 孟佳子;人源HIV-1廣譜中和Fab抗體的鑒定[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2013年

8 楊向民;全人抗體高效真核表達(dá)載體的構(gòu)建與表面重塑抗體rCAb1[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2008年

9 張春秀;基于抗原/抗體反應(yīng)的生物檢測(cè)技術(shù)及其應(yīng)用研究[D];東南大學(xué);2003年

10 于俊巖;抗HBV多聚酶TP區(qū)細(xì)胞內(nèi)VH抗體體外抑制HBV復(fù)制的實(shí)驗(yàn)研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2006年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 谷偉紅;豬CD16及其介導(dǎo)PRRSV抗體依賴性增強(qiáng)作用研究[D];中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2015年

2 黃世維;檢測(cè)鴨源沙門氏菌抗體間接ELISA方法的建立與應(yīng)用[D];四川農(nóng)業(yè)大學(xué);2014年

3 冉葦;人源抗人IgE工程抗體Fab片段的功能研究[D];復(fù)旦大學(xué);2014年

4 張萌;兩種四溴雙酚A類化合物抗體的制備及其生物分析方法的建立[D];江蘇大學(xué);2016年

5 王潔;CD20和PD-L1雙靶向納米免疫體系的構(gòu)建及其抗淋巴瘤協(xié)同效應(yīng)機(jī)制研究[D];聊城大學(xué);2017年

6 楊啟修;抗抗生素類藥物抗體的檢測(cè)與研究和稀有血型分子生物學(xué)篩查[D];華東師范大學(xué);2010年

7 孟凡軍;抗沙門氏菌IgY抗體的制備及其特性分析[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2010年

8 張曙儉;勞森氏胞內(nèi)菌的PCR檢測(cè)方法及其抗體間接ELISA檢測(cè)方法的建立與應(yīng)用[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2012年

9 張海譜;抗人糖原磷酸化酶BB抗體的制備臨床應(yīng)用[D];河北醫(yī)科大學(xué);2003年

10 金海燕;重金屬汞多克隆抗體的制備及間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA方法的研究[D];遼寧師范大學(xué);2009年

，

本文編號(hào)：1371534