本文關鍵詞：CD20和PD-L1雙靶向納米免疫體系的構建及其抗淋巴瘤協(xié)同效應機制研究　出處：《聊城大學》2017年碩士論文　論文類型：學位論文

  更多相關文章： 抗CD20抗體 抗PD-L1抗體 抗體團簇 藥物介導的細胞毒性作用 細胞凋亡

【摘要】：利妥昔單抗(Rituximab)于1997年被FDA批準用于醫(yī)療使用,它是全球第一個被批準用于臨床進行非霍奇金淋巴瘤(NHL)治療的IgG1單克隆抗體。盡管Rituximab在前期腫瘤治療方面取得了一定的療效,但是,臨床治療中發(fā)現(xiàn),抗CD20抗體在體內(nèi)的半衰期短,作用效果溫和,并且多次用藥后容易產(chǎn)生耐藥性。此外,由于免疫檢查點的存在,腫瘤細胞容易發(fā)生免疫逃逸。因此,從抗體作用機制和腫瘤微環(huán)境出發(fā),構建多功能抗體提高其療效是臨床抗體靶向治療亟待解決的問題。近年來,隨著納米技術和材料科學的發(fā)展,基于納米載體技術的遞送系統(tǒng)為解決上述問題提供了完美的解決方案。本課題中,我們選用支化陽離子高分子聚乙烯亞胺(PEI,分子量為750 kDa),在其側基NH2上修飾可與抗體反應的橋聯(lián)鍵MAL-PEG-SCM分子,并大量偶聯(lián)抗CD20和PD-L1抗體,構建CD20和PD-L1分子雙靶向納米抗體團簇體系(縮寫簡稱PEI-RTX-AZL)。動靜態(tài)光散射儀(Dynamic Laser Light Scattering,DLLS),透射電子顯微鏡(TEM),馬爾文zeta電位儀等的測試結果證明了抗體團簇合成成功,其抗體的偶聯(lián)效率為63%,具有橢球拓撲結構�？贵w團簇與Daudi細胞的結合能力和解離能力的分析顯示,與Rituximab相比,其具有相似的結合能力,但是對CD20分子的解離能力明顯降低,也就是說抗體團簇可以更長時間的結合在靶細胞表面,持續(xù)作用時間更持久,這為進一步提升抗體療效打下了基礎。接下來,在體外抗腫瘤活性研究中,本課題驚喜的發(fā)現(xiàn):抗體團簇PEI-RTX-AZL對Daudi細胞除了具有增殖抑制和細胞毒性作用外,還具有的抗體依賴細胞介導的細胞毒性作用(ADCC)和程序性細胞死亡(PCD)作用。本課題進一步的對抗體團簇的抗腫瘤作用機制進行了探索。相比游離的母代抗體,抗體團簇誘導Daudi細胞發(fā)生凋亡的過程可以概括為以下兩方面:一方面,抗CD20抗體的Fab段特異性靶向CD20陽性的Daudi細胞,通過抗體Fc段與NK細胞等效應細胞的FcgR結合,啟動ADCC作用,效應細胞攻擊靶細胞,使其裂解;并將抗PD-L1抗體遞送至腫瘤細胞表面,通過抗PD-L1抗體來阻斷PD-1/PD-L1信號通路,恢復CTL細胞的抗腫瘤活性,兩種抗體協(xié)同發(fā)揮抗腫瘤作用;另一方面,750 kDa的支狀長鏈PEI在Rituximab抗體的靶向作用下,與CD20分子結合,使抗原發(fā)生交聯(lián)或抗原受限,誘導靶細胞內(nèi)的溶酶體破裂或分布彌散,釋放溶酶體組織蛋白酶B(Cathepsin B)進入胞漿,Cathepsin B作用于線粒體,致使線粒體膜的通透性增大,從而釋放前凋亡分子(細胞色素C)進入細胞漿,激活凋亡信號通路(如Caspase),誘導細胞發(fā)生凋亡級聯(lián)反應。本課題還對抗體團簇的體內(nèi)抗腫瘤效應開展了研究。為了更加直觀地觀察抗體團簇在動物水平的抗腫瘤作用,我們構建了Balb/c裸鼠的皮下實體腫瘤模型,并對抗體團簇PEI-RTX-AZL和單克隆抗體Rituximab的抑瘤效應進行了觀察和分析。研究表明,抗體團簇組比單抗組具有更強的抗腫瘤效果,減輕腫瘤負荷。綜上所述,抗體團簇通過抗CD20抗體特異性靶向腫瘤細胞,抗PD-L1抗體阻斷PD-1/PD-L1信號通路,恢復CTL細胞的抗腫瘤活性,兩種抗體協(xié)同發(fā)揮抗腫瘤作用,進一步增強增殖抑制、ADCC和PCD作用,從而充分發(fā)揮療效。本課題通過系統(tǒng)的載體設計、抗體偶聯(lián)、體外抗腫瘤機制和體內(nèi)抑瘤效果等研究,為今后設計更加有效的能夠臨床應用的靶向治療藥物提供方法指導和理論依據(jù)。
[Abstract]:Anti - CD20 antibody has been approved by FDA in 1997 for medical use . It is the first IgG1 monoclonal antibody to be approved for clinical use in non - Hodgkin ' s lymphoma ( NHL ) . In order to observe the anti - tumor effect of anti - CD20 antibody , the anti - PD - L1 antibody block PD - 1 / PD - L1 signaling pathway , and the anti - tumor effect of anti - PD - L1 antibody against PD - 1 / PD - L1 was observed .

【學位授予單位】：聊城大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R733.1

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