本文關(guān)鍵詞：�；撬釋σ掖颊T導(dǎo)大鼠肝細胞損傷的保護作用研究　出處：《沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)》2017年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

  更多相關(guān)文章： �；撬� 酒精性肝病 凋亡 防治作用 肝細胞

【摘要】：隨著經(jīng)濟的增長,人們飲食習(xí)慣的改變,酒精的攝入量逐漸遞增,而長期大量的酒精攝入可以引發(fā)肝臟損傷,導(dǎo)致酒精性肝病(Alcoholic Liver Disease,ALD)。目前,對于ALD的治療,醫(yī)學(xué)臨床上并沒有高效滿意的治療方法。因此,尋找安全、高效的治療藥物是ALD治療中亟待解決的問題。�；撬嶙鳛橐环N天然的游離氨基酸,大量存在于動物體內(nèi),具有多種生物學(xué)效應(yīng),且對機體無毒副作用。本研究通過體外試驗,制備乙醇損傷肝細胞模型,檢測�；撬釋σ掖紦p傷的原代大鼠肝細胞活性、肝細胞功能及肝細胞凋亡的作用,為應(yīng)用�；撬岱乐尉凭珜�(dǎo)致的肝損傷提供理論依據(jù)。試驗選取體重為200±20g的雄性Wistar大鼠,采用Seglen原位二步灌注法與機械消化法相結(jié)合的方法分離培養(yǎng)出原代大鼠肝細胞,經(jīng)糖原染色鑒定肝細胞后,使用第3-5代處于對數(shù)生長期的肝細胞進行試驗。分組如下:正常對照組(C),正常培養(yǎng):模型組(M),培養(yǎng)基中添加75mmol/L乙醇;�；撬岣深A(yù)組(M+T),培養(yǎng)基中添加75mmol/L乙醇和10mmol/L�；撬�;�；撬釋φ战M(T),培養(yǎng)基中添加10mmol/L�；撬�。培養(yǎng)48 h后,采用MTT法檢測細胞抑制率,以及培養(yǎng)基中谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、谷氨酰轉(zhuǎn)移酶(GGT)的含量。使用AO-EB染色法檢測肝細胞凋亡率,提取肝細胞總RNA及總蛋白,qRT-PCR法及Westerm-blot法檢測細胞凋亡相關(guān)因子mRNA和蛋白表達量。結(jié)果顯示:以75mmol/L的乙醇作用48h可使肝細胞損傷達50%,成功誘導(dǎo)原代大鼠肝細胞凋亡模型。對肝細胞抑制率的檢測發(fā)現(xiàn),1Ommol/L濃度的�；撬崮苊黠@減輕乙醇對肝細胞的生長抑制作用。與正常對照組相比,模型組肝細胞培養(yǎng)液中ALT、AST、GGT含量顯著升高,�；撬岣深A(yù)組較模型組肝細胞培養(yǎng)液中ALT、AST、GGT水平顯著下降,說明�；撬崮苡行У臏p輕乙醇對肝細胞的損傷。通過油紅染色觀察發(fā)現(xiàn),乙醇能導(dǎo)致脂肪在肝細胞內(nèi)沉積,而牛磺酸能明顯改善肝細胞內(nèi)脂肪沉積情況。免疫細胞化學(xué)染色結(jié)果表明,模型組肝細胞凋亡率較對照組顯著升高,�；撬岣深A(yù)組較模型組極顯著降低(0.01)。模型組肝細胞Fas、FasL、Caspase-3、Caspase-9、Bax的mRNA及蛋白表達水平較對照組有極顯著升高(0.01),Bcl-2 mRNA及蛋白表達水平極顯著降低(0.01),�；撬岣深A(yù)組Fas、FasL、Caspase-3、Caspase-9、Bax的mRNA及蛋白表達水平較模型組有極顯著降低(0.01),Bcl-2 mRNA及蛋白表達水平極顯著升高(0.01)。本試驗結(jié)果表明,牛磺酸對乙醇誘導(dǎo)的肝細胞損傷具有保護作用,其機制可能是保護肝細胞膜,減少肝細胞脂肪沉積,并通過調(diào)控細胞內(nèi)源性及外源性凋亡通路而抑制乙醇導(dǎo)致的肝細胞異常調(diào)亡。
[Abstract]:Along with the economic growth, people's diet habits change, the alcohol intake gradually increases, and the long-term large amount of alcohol intake can lead to liver damage. There is no effective and satisfactory medical treatment for the treatment of ALD, which results in Alcoholic Liver Disease1. Therefore, there are no effective and satisfactory methods for the treatment of ALD. It is an urgent problem to find safe and effective therapeutic drugs in the treatment of ALD. Taurine, as a kind of natural free amino acid, is abundant in animals and has a variety of biological effects. In this study, ethanol induced hepatocyte injury model was established in vitro to detect the hepatocyte activity, hepatocyte function and hepatocyte apoptosis of rats with ethanol injury. In order to provide theoretical basis for taurine to prevent and cure liver injury induced by alcohol, male Wistar rats weighing 200 鹵20g were selected. Primary rat hepatocytes were isolated and cultured by Seglen in situ two-step perfusion method and mechanical digestion method. The hepatocytes were identified by glycogen staining. The experiment was carried out by using the hepatocytes in the logarithmic growth phase of passage 3-5. The cells were divided as follows: normal control group, normal culture group: model group, 75 mmol / L ethanol was added to the culture medium; In taurine intervention group, 75 mmol / L ethanol and 10 mmol / L taurine were added to the medium. Taurine was added to the culture medium with 10 mmol / L taurine. After 48 hours of culture, the inhibition rate of cells was detected by MTT assay, and the alanine aminotransferase (alt) in the medium was measured. AO-EB staining method was used to detect the apoptosis rate of hepatocytes and extract the total RNA and total protein of hepatocytes. The expression of apoptosis-related factor mRNA and protein was detected by qRT-PCR and Westerm-blot. The results showed that:. Exposure to 75 mmol / L ethanol for 48 hours resulted in 50% damage to hepatocytes. The primary rat hepatocyte apoptosis model was successfully induced. 1the concentration of ommol / L taurine significantly alleviated the inhibitory effect of ethanol on the growth of hepatocytes. Compared with the normal control group, the GGT content in the hepatocyte culture medium of the model group was significantly higher than that of the control group. Compared with the model group, the level of alt ASTT GGT in the cultured medium of taurine intervention group was significantly lower than that in the model group, which indicated that taurine could effectively reduce the damage of ethanol to hepatocytes, and it was found by oil red staining. Ethanol could induce fat deposition in hepatocytes, while taurine could significantly improve lipid deposition in hepatocytes. The results of immunocytochemical staining showed that the apoptosis rate of hepatocytes in the model group was significantly higher than that in the control group. Compared with the model group, the taurine intervention group significantly decreased the level of caspase-3 and caspase-9 in the hepatocytes of the model group. The expression level of mRNA and protein in Bax was significantly higher than that in control group. The expression of Bcl-2 mRNA and protein in Bax was significantly lower than that in control group (P < 0.01). The expression level of mRNA and protein of Fas-FasL- Caspase-3, Caspase-9 and Bax in taurine intervention group was significantly lower than that in model group (P < 0.01). The expression level of Bcl-2 mRNA and protein increased significantly. The results showed that taurine had a protective effect on ethanol-induced hepatocyte injury. The mechanism may be to protect the liver cell membrane, reduce the fat deposition of the liver cell, and inhibit the abnormal apoptosis induced by ethanol by regulating the endogenous and exogenous apoptosis pathway.
【學(xué)位授予單位】：沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R575

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本文編號：1368290