本文關(guān)鍵詞：查爾酮衍生物cc-85調(diào)節(jié)活性氧誘導(dǎo)食管癌細(xì)胞凋亡的作用機制研究　出處：《鄭州大學(xué)》2017年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

  更多相關(guān)文章： 凋亡 線粒體 死亡受體 caspase ROS Nrf2 查爾酮類衍生物cc-85

【摘要】：目的主要研究新型查爾酮類衍生物cc-85對食管癌細(xì)胞系的體外作用機制。以Nrf2為靶點,通過死亡受體途徑和線粒體途徑,研究cc-85的抗腫瘤作用機理,為腫瘤藥物的開發(fā)提供理論依據(jù)。方法通過一系列藥理學(xué)及分子生物學(xué)實驗方法研究課題內(nèi)容,主要包括MTT法檢測細(xì)胞活力、流式細(xì)胞術(shù)檢測活性氧水平和線粒體膜電位、蛋白免疫印跡法檢測蛋白表達水平、DAPI法檢測細(xì)胞核形態(tài)和免疫熒光法檢測蛋白定位等。結(jié)果Cc-85抑制食管癌細(xì)胞株EC109,KYSE750和EC-1的細(xì)胞生存率,結(jié)果表明cc-85對正常的食管上皮細(xì)胞毒性相對較小,而對EC109和KYSE750較為敏感,抑制率顯著;cc-85能夠誘導(dǎo)EC109和KYSE750細(xì)胞的凋亡;DAPI染色表明EC109細(xì)胞核形態(tài)變小、染色加深并且出現(xiàn)凋亡小體;cc-85明顯上調(diào)EC109細(xì)胞核KYSE750細(xì)胞內(nèi)外源性受體DR4和DR5的表達;cc-85可以誘導(dǎo)線粒體膜電位下降,細(xì)胞內(nèi)抗凋亡蛋白和促凋亡蛋白表達水平的變化;caspase-3,8,9可以被cc-85誘導(dǎo)活化,caspase的全酶抑制劑z-VAD-fmk可以部分阻斷化合物cc-85誘導(dǎo)EC109的凋亡;ROS抑制劑NAC可以逆轉(zhuǎn)cc-85誘導(dǎo)的EC109和KYSE750細(xì)胞的凋亡;NAC可以逆轉(zhuǎn)cc-85誘導(dǎo)的EC109細(xì)胞的線粒體膜電位水平;NAC可以逆轉(zhuǎn)cc-85誘導(dǎo)的EC109細(xì)胞的抗凋亡蛋白和促凋亡蛋白的表達水平;NAC可以逆轉(zhuǎn)cc-85誘導(dǎo)的EC109細(xì)胞的caspase家族的蛋白表達;cc-85可以誘導(dǎo)Nrf2定位于細(xì)胞核。結(jié)論以上結(jié)果說明查爾酮衍生物cc-85可以誘導(dǎo)食管癌細(xì)胞的凋亡。Cc-85可以通過Nrf2的入核轉(zhuǎn)錄、死亡受體DR4和DR5的增高、線粒體膜電位的下降、抗凋亡蛋白和促凋亡蛋白的調(diào)節(jié)等一系列信號誘導(dǎo)凋亡,可以作為抗腫瘤藥物開發(fā)的重要理論依據(jù)。
[Abstract]:Objective to study the mechanism of action of cc-85, a novel chalcone derivative, on esophageal cancer cell line in vitro. Nrf2 was used as the target, through death receptor pathway and mitochondrial pathway. To study the anti-tumor mechanism of cc-85 and to provide theoretical basis for the development of tumor drugs. Methods A series of pharmacological and molecular biological experimental methods were used to study the subject. MTT assay was used to detect cell viability, flow cytometry to detect reactive oxygen species (Ros) and mitochondrial membrane potential (MMP), and Western blot to detect protein expression. Results Cc-85 inhibited the survival rate of esophageal cancer cell line EC109 KYSE750 and EC-1. The results showed that the toxicity of cc-85 to normal esophageal epithelial cells was relatively small, but sensitive to EC109 and KYSE750, and the inhibition rate was significant. Cc-85 could induce apoptosis of EC109 and KYSE750 cells. DAPI staining showed that the nuclear morphology of EC109 became smaller, the staining deepened and apoptotic bodies appeared. Cc-85 upregulated the expression of DR4 and DR5 in EC109 nuclear KYSE750 cells. Cc-85 could induce the decrease of mitochondrial membrane potential and the expression of anti-apoptotic protein and pro-apoptotic protein. Caspase-3, caspase-3 and caspase-8 can be activated by cc-85. Z-VAD-fmk, a holoenzyme inhibitor of caspase, partially blocked the apoptosis of EC109 induced by cc-85. ROS inhibitor NAC could reverse the apoptosis of EC109 and KYSE750 cells induced by cc-85. NAC could reverse the mitochondrial membrane potential level of EC109 cells induced by cc-85. NAC could reverse the expression of anti-apoptotic protein and pro-apoptotic protein in EC109 cells induced by cc-85. NAC could reverse the protein expression of caspase family in EC109 cells induced by cc-85. Conclusion the above results suggest that cc-85 can induce apoptosis of esophageal carcinoma cells. Cc-85 can be transcripted by Nrf2. . The increase of death receptor DR4 and DR5, the decrease of mitochondrial membrane potential, the regulation of anti-apoptotic protein and pro-apoptotic protein signal induce apoptosis, which can be used as an important theoretical basis for the development of anti-tumor drugs.
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R285

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本文編號：1357852