本文關(guān)鍵詞：益腎蠲痹丸對(duì)膠原誘導(dǎo)性關(guān)節(jié)炎大鼠骨代謝及免疫調(diào)節(jié)的影響　出處：《北京中醫(yī)藥大學(xué)》2017年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：1研究背景類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(Rheumatoid arthritis,RA)是一種炎癥介導(dǎo)的慢性自身免疫性疾病,以關(guān)節(jié)滑膜炎癥、血管翳形成及軟骨和骨質(zhì)破壞為主要病理表現(xiàn),臨床常表現(xiàn)為關(guān)節(jié)痛與壓痛、僵直,進(jìn)展常伴骨質(zhì)疏松,漸出現(xiàn)關(guān)節(jié)不可逆的損傷,后期乃至出現(xiàn)關(guān)節(jié)活動(dòng)障礙、關(guān)節(jié)畸形。其發(fā)病原因及發(fā)病機(jī)制尚未闡明。多認(rèn)為免疫調(diào)節(jié)紊亂是RA發(fā)病的主要機(jī)制及重要環(huán)節(jié),免疫抑制劑能夠起到治療RA的作用。調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(RegulatoryT cells,Tregs)對(duì)于改善RA的病情進(jìn)展及骨質(zhì)破壞起重要作用。骨代謝指破骨細(xì)胞(Osteoclast,OC)與成骨細(xì)胞(Osteoblast,OB)之間保持動(dòng)態(tài)平衡,使骨組織不斷地得到更新。OC與OB的代謝受免疫系統(tǒng)的調(diào)節(jié),前期實(shí)驗(yàn)證實(shí)Treg可以通過釋放IL-10、TGF-β增強(qiáng)其對(duì)OC分化的抑制作用。益腎蠲痹丸(YSJB)是中醫(yī)治療痹癥臨床效果顯著的中成藥,具有溫補(bǔ)腎陽(yáng)、益腎壯督、搜風(fēng)剔邪、蠲痹通絡(luò)之功效。臨床及實(shí)驗(yàn)研究表明YSJB能緩解關(guān)節(jié)疼痛,延緩RA進(jìn)程,前期實(shí)驗(yàn)研究表明YSJB對(duì)膠原誘導(dǎo)性關(guān)節(jié)炎(Collagen-inducedarthritis,CIA)模型大鼠骨質(zhì)破壞的進(jìn)展有抑制作用,但其機(jī)制未見研究。本研究旨在探討YSJB對(duì)CIA模型大鼠骨破壞發(fā)生中骨代謝及免疫調(diào)節(jié)的影響。2研究目的從Tregs調(diào)控OC分化與成熟的角度探討YSJB對(duì)CIA大鼠骨破壞的影響。3研究?jī)?nèi)容與方法3.1益腎蠲痹丸對(duì)CIA大鼠Treg/Th17平衡及骨破壞的影響雄性SD大鼠40只隨機(jī)分為4組,空白對(duì)照組、CIA模型組、來氟米特(LEF)組和益腎蠲痹丸(YSJB)組。除空白對(duì)照組外,其余組大鼠造CIA模型,LEF組和YSJB組分別灌胃給藥28d。觀察YSJB對(duì)CIA大鼠關(guān)節(jié)炎指數(shù)的影響,HE染色評(píng)價(jià)踝關(guān)節(jié)病理學(xué)改變;流式細(xì)胞術(shù)(FCM)檢測(cè)大鼠PLNLs中Treg、Th17、Th1免疫細(xì)胞的比例;酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法(ELISA)檢測(cè)血清中骨代謝指標(biāo)的活性;采用micro CT的方法分析踝關(guān)節(jié)局部骨微觀結(jié)構(gòu)的變化。3.2益腎蠲痹丸含藥血清對(duì)OC單獨(dú)培養(yǎng)及OC-Tregs共培養(yǎng)體系中破骨細(xì)胞分化及骨吸收功能的影響無菌分離C57BL/6小鼠雙側(cè)股骨、脛骨的骨髓造血干細(xì)胞及脾臟,骨髓造血干細(xì)胞經(jīng)M-CSF誘導(dǎo)為破骨前體細(xì)胞,加入RANKL誘導(dǎo)其向OC分化;脾臟制備成單細(xì)胞懸液,經(jīng)免疫磁珠分選方法獲得CD4+CD25+Tregs。OC+Tregs共培養(yǎng)組按照OC:Tregs=25:1的比例接種于Transwell細(xì)胞培養(yǎng)板;組別設(shè)置為:OC+正常血清組、OC+CIA模型血清組、OC+LEF血清組、OC+YSJB血清組;OC+Tregs+正常血清組、OC+Tregs+CIA模型血清組、OC+Tregs+LEF血清組、OC+Tregs+YSJB血清組。各培養(yǎng)體系中均預(yù)置蓋玻片或牛骨片。同時(shí)加入不同組別大鼠含藥血清;培養(yǎng)7d后抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色觀察OC細(xì)胞形態(tài)并計(jì)算其數(shù)量;比色法測(cè)定不同組別大鼠含藥血清對(duì)OC標(biāo)志物抗酒石酸酸性磷酸酶活性的影響;骨片培養(yǎng)至第10d,經(jīng)甲苯胺藍(lán)染色,觀察OC在其表面形成的骨吸收陷窩的形態(tài),并用Leica Qwin圖像分析軟件計(jì)算骨吸收陷窩面積。4研究結(jié)果4.1益腎蠲痹丸對(duì)CIA大鼠Treg/Th17平衡及骨破壞的影響免疫后15d大鼠關(guān)節(jié)炎指數(shù)顯著增加(P0.01)。與空白對(duì)照組比較,造模后大鼠病理積分明顯增加(P0.01),踝關(guān)節(jié)局部骨破壞明顯,踝關(guān)節(jié)表而積BS與BS/BV顯著增加(P0.01);反映骨形成的指標(biāo)BGP、BALP、PICP、PINP明顯下降(P0.01),反映骨吸收的指標(biāo)TRACP、NTX、CTX明顯升高(P0.01,P0.05);Th1細(xì)胞、Th17細(xì)胞明顯升高(P0.01,P0.05),Treg細(xì)胞明顯下降(P0.05)。與模型組比較,經(jīng)YSJB治療后,大鼠關(guān)節(jié)炎指數(shù)有降低趨勢(shì),關(guān)節(jié)病理積分明顯降低(P0.05),大鼠骨量明顯增加(P0.01),踝關(guān)節(jié)表面積BS與BS/BV明顯下降(P0.01,P0.05);經(jīng)YSJB治療后,PINP明顯上升(P0.05),BGP、PICP有升高的趨勢(shì),但沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,TRACP、CTX、NTX明顯下降(P0.01,P0.05);Th1、Th17細(xì)胞明顯下降(P0.01,P0.05),Treg細(xì)胞明顯升高(P0.05)。YSJB能夠降低CIA大鼠關(guān)節(jié)炎指數(shù),減輕關(guān)節(jié)的病理?yè)p傷,改善骨微觀結(jié)構(gòu),同時(shí)能調(diào)節(jié)骨形成和骨吸收指標(biāo)和PLNLs中Treg、Th17、Th1免疫細(xì)胞比例。4.2益腎蠲痹丸含藥血清對(duì)OC-Tregs共培養(yǎng)體系中OC分化及骨吸收功能的影響與OC+正常血清組相比,OC+Tregs+正常血清組OC分化較小,數(shù)目較少,TRAP活性降低,骨吸收面積減少(P0.05),提示Treg有抑制OC分化的作用。與OC+正常血清組相比,OC+CIA模型血清組OC分化體積大、數(shù)量多,TRAP活性顯著增高,骨吸收陷窩面積增大(P0.01)。與OC+CIA模型血清組相比,OC+YSJB血清組OC分化數(shù)目減少,TRAP活性降低,骨陷窩形成面積明顯降低(P0.01),YSJB對(duì)OC分化有抑制作用。與OC+Tregs+CIA模型血清組相比,OC+Tregs+YSJB血清組OC分化數(shù)量明顯減少,形成的骨陷窩面積小(p0.01)。提示在Treg介導(dǎo)的共培養(yǎng)環(huán)境中,YSJB對(duì)OC分化的抑制作用,除直接作用于OC外,還可能通過Treg對(duì)OC發(fā)揮抑制作用。5結(jié)論CIA大鼠關(guān)節(jié)炎指數(shù)升高,關(guān)節(jié)病理?yè)p傷加重,骨微觀結(jié)構(gòu)破壞,骨代謝失常,PLNLs中Treg比例下降、Th1和Th17細(xì)胞升高,Treg可抑制OC分化及骨吸收功能。益腎蠲痹丸能夠降低CIA大鼠關(guān)節(jié)炎指數(shù),減輕關(guān)節(jié)的病理?yè)p傷,改善骨微觀結(jié)構(gòu),其作用機(jī)制之一是通過升高Treg細(xì)胞比例,促進(jìn)Treg抑制OC分化及骨吸收功能。
【學(xué)位授予單位】：北京中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R285.5

【參考文獻(xiàn)】

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1 李文艷;徐玉善;李紅;;免疫調(diào)節(jié)在骨質(zhì)疏松癥中的研究進(jìn)展[J];醫(yī)學(xué)綜述;2015年02期

2 肖誠(chéng);趙宏艷;王燕;劉梅潔;王少君;潘靜華;呂誠(chéng);呂愛平;鞠大宏;;益腎蠲痹丸對(duì)腎虛證與脾虛證膠原誘導(dǎo)性關(guān)節(jié)炎大鼠的療效比較[J];中日友好醫(yī)院學(xué)報(bào);2014年02期

3 趙宏艷;王燕;于崢;劉梅潔;劉紅;李艷;呂誠(chéng);譚勇;肖誠(chéng);鞠大宏;;益腎蠲痹丸對(duì)腎虛證與脾虛證CIA大鼠免疫因子的調(diào)節(jié)作用研究[J];中國(guó)中醫(yī)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)雜志;2013年03期

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本文編號(hào)：1325005