本文關(guān)鍵詞：曲古抑菌素A對(duì)新生大鼠缺血缺氧性腦損傷的保護(hù)作用及其機(jī)制研究　出處：《鄭州大學(xué)》2017年碩士論文　論文類(lèi)型：學(xué)位論文

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【摘要】：目的考察組蛋白去乙酰化酶的高效抑制劑曲古抑菌素A(TSA)對(duì)新生大鼠缺血缺氧性腦損傷的保護(hù)作用,并對(duì)其相關(guān)機(jī)制進(jìn)行初步探討,為臨床治療新生兒缺血缺氧性腦損傷提供理論依據(jù)。方法1.取7日齡新生的SD(Sprague-Dawley)大鼠,11-18g,雄雌不限,隨機(jī)分為三組,即假手術(shù)組(Sham)、缺血缺氧組(HIBD)、干預(yù)組(TSA)。參照經(jīng)典的Rice法并稍作改進(jìn)建立新生大鼠缺血缺氧性腦損傷模型;2.采取TTC染色法檢測(cè)各組新生大鼠的腦組織梗死體積;3.采取自主活動(dòng)實(shí)驗(yàn)檢測(cè)各組新生大鼠的自主活動(dòng)能力;4.采取Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)檢測(cè)各組新生大鼠遠(yuǎn)期的空間學(xué)習(xí)記憶能力;5.通過(guò)RT-PCR實(shí)驗(yàn)檢測(cè)在新生大鼠HIBD后三個(gè)不同時(shí)間點(diǎn)KCC2 m RNA的表達(dá)變化;同時(shí)檢測(cè)Neu N和KCC2 m RNA在腦損傷后的下降比例;檢測(cè)各組新生大鼠REST、Co REST、HDAC1、KCC2的m RNA表達(dá)變化;6.采用Western blot法、免疫組織熒光法考察TSA發(fā)揮腦保護(hù)作用的相關(guān)機(jī)制。結(jié)果1.缺血以后,新生大鼠皮膚顏色變淺,呈現(xiàn)蒼白色,但在短時(shí)間內(nèi)皮膚顏色即可恢復(fù)正常;在缺氧過(guò)程中,新生大鼠皮膚顏色加深,焦躁不安并伴隨有抽搐現(xiàn)象;在HIBD模型建立后,大鼠走路不穩(wěn)并向左側(cè)旋轉(zhuǎn),對(duì)外界的刺激反應(yīng)遲鈍。2.TTC染色結(jié)果顯示:與假手術(shù)組對(duì)比,HIBD組腦組織具有非常明顯的蒼白色區(qū)域,表明建造的新生大鼠HIBD模型是成功的。TSA干預(yù)組的腦組織顯示的蒼白色區(qū)域與HIBD組相比明顯減小,表明TSA對(duì)新生大鼠缺血缺氧性腦損傷具有一定的近期保護(hù)作用。3.自主活動(dòng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:與假手術(shù)組相比,測(cè)得的HIBD組大鼠的自主活動(dòng)次數(shù)明顯減少,而TSA干預(yù)組新生大鼠的自主活動(dòng)次數(shù)與HIBD組相比明顯增多,表明TSA能提高新生大鼠HIBD的中樞興奮性。4.Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:(1)定位航行實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:各組動(dòng)物的平均逃避潛伏期在第一天時(shí)基本相同,第三天開(kāi)始出現(xiàn)明顯差異,到第五天時(shí)則表現(xiàn)出顯著地統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,統(tǒng)計(jì)結(jié)果為HIBD組TSA組sham組。(2)空間探索實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:與假手術(shù)組相比,缺血缺氧組大鼠測(cè)得的穿越站臺(tái)的平均次數(shù)和在目標(biāo)象限停留的平均時(shí)間百分比都明顯降低,而給予TSA干預(yù)后,測(cè)得的兩者的數(shù)值則均有一定的提高,表明缺血缺氧性腦損傷可嚴(yán)重影響新生大鼠的空間學(xué)習(xí)記憶能力,給予TSA干預(yù)則能明顯的改善腦損傷大鼠遠(yuǎn)期的空間學(xué)習(xí)記憶能力。5.RT-PCR結(jié)果:(1)首先,檢測(cè)新生大鼠HIBD后三個(gè)不同時(shí)間點(diǎn)KCC2 m RNA的表達(dá)變化,結(jié)果顯示在缺血缺氧性腦損傷后第三天時(shí)KCC2m RNA的表達(dá)變化最為明顯,因此在以后的分子學(xué)實(shí)驗(yàn)中選擇這個(gè)時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行相關(guān)實(shí)驗(yàn)操作。(2)在新生大鼠HIBD后第三天時(shí)同時(shí)檢測(cè)Neu N和KCC2 m RNA的表達(dá)變化,結(jié)果顯示KCC2表達(dá)下降比例明顯高于Neu N,表明KCC2 m RNA在新生大鼠缺血缺氧性腦損傷中的表達(dá)下降主要是由神經(jīng)元的損傷引起的,而不是神經(jīng)元的死亡造成的。6.分別檢測(cè)三組新生大鼠REST、Co REST、HDAC1、KCC2 m RNA的表達(dá)變化,結(jié)果顯示與假手術(shù)組相比,缺血缺氧組REST、Co REST、HDAC1 m RNA表達(dá)明顯升高,KCC2 m RNA表達(dá)則顯著下降。給予TSA干預(yù),抑制REST、Co REST、HDAC1 m RNA表達(dá),阻止了KCC2 m RNA表達(dá)的下調(diào)。7.Western blot實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:與假手術(shù)組相比,HIBD后REST、Co REST、HDAC1蛋白的表達(dá)明顯升高,而KCC2蛋白的表達(dá)則顯著下降。給予TSA干預(yù),抑制REST、Co REST、HDAC1蛋白的表達(dá),阻止了KCC2蛋白的表達(dá)下調(diào)。免疫組織熒光實(shí)驗(yàn)的測(cè)得的結(jié)果與Western blot一致。結(jié)論本課題研究發(fā)現(xiàn)TSA對(duì)新生大鼠HIBD有一定的近遠(yuǎn)期腦保護(hù)作用,其藥物作用機(jī)制是抑制轉(zhuǎn)錄復(fù)合物REST/Co REST/HDAC1,通過(guò)表觀遺傳學(xué)調(diào)控阻止腦缺血缺氧后KCC2的下調(diào),維持了神經(jīng)元內(nèi)Cl-的穩(wěn)態(tài),進(jìn)而發(fā)揮腦保護(hù)作用。
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類(lèi)號(hào)】：R742

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