本文關鍵詞：曲古抑菌素A對新生大鼠缺血缺氧性腦損傷的保護作用及其機制研究　出處：《鄭州大學》2017年碩士論文　論文類型：學位論文

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【摘要】：目的考察組蛋白去乙酰化酶的高效抑制劑曲古抑菌素A(TSA)對新生大鼠缺血缺氧性腦損傷的保護作用,并對其相關機制進行初步探討,為臨床治療新生兒缺血缺氧性腦損傷提供理論依據(jù)。方法1.取7日齡新生的SD(Sprague-Dawley)大鼠,11-18g,雄雌不限,隨機分為三組,即假手術組(Sham)、缺血缺氧組(HIBD)、干預組(TSA)。參照經(jīng)典的Rice法并稍作改進建立新生大鼠缺血缺氧性腦損傷模型;2.采取TTC染色法檢測各組新生大鼠的腦組織梗死體積;3.采取自主活動實驗檢測各組新生大鼠的自主活動能力;4.采取Morris水迷宮實驗檢測各組新生大鼠遠期的空間學習記憶能力;5.通過RT-PCR實驗檢測在新生大鼠HIBD后三個不同時間點KCC2 m RNA的表達變化;同時檢測Neu N和KCC2 m RNA在腦損傷后的下降比例;檢測各組新生大鼠REST、Co REST、HDAC1、KCC2的m RNA表達變化;6.采用Western blot法、免疫組織熒光法考察TSA發(fā)揮腦保護作用的相關機制。結(jié)果1.缺血以后,新生大鼠皮膚顏色變淺,呈現(xiàn)蒼白色,但在短時間內(nèi)皮膚顏色即可恢復正常;在缺氧過程中,新生大鼠皮膚顏色加深,焦躁不安并伴隨有抽搐現(xiàn)象;在HIBD模型建立后,大鼠走路不穩(wěn)并向左側(cè)旋轉(zhuǎn),對外界的刺激反應遲鈍。2.TTC染色結(jié)果顯示:與假手術組對比,HIBD組腦組織具有非常明顯的蒼白色區(qū)域,表明建造的新生大鼠HIBD模型是成功的。TSA干預組的腦組織顯示的蒼白色區(qū)域與HIBD組相比明顯減小,表明TSA對新生大鼠缺血缺氧性腦損傷具有一定的近期保護作用。3.自主活動實驗結(jié)果顯示:與假手術組相比,測得的HIBD組大鼠的自主活動次數(shù)明顯減少,而TSA干預組新生大鼠的自主活動次數(shù)與HIBD組相比明顯增多,表明TSA能提高新生大鼠HIBD的中樞興奮性。4.Morris水迷宮實驗結(jié)果顯示:(1)定位航行實驗結(jié)果顯示:各組動物的平均逃避潛伏期在第一天時基本相同,第三天開始出現(xiàn)明顯差異,到第五天時則表現(xiàn)出顯著地統(tǒng)計學差異,統(tǒng)計結(jié)果為HIBD組TSA組sham組。(2)空間探索實驗結(jié)果顯示:與假手術組相比,缺血缺氧組大鼠測得的穿越站臺的平均次數(shù)和在目標象限停留的平均時間百分比都明顯降低,而給予TSA干預后,測得的兩者的數(shù)值則均有一定的提高,表明缺血缺氧性腦損傷可嚴重影響新生大鼠的空間學習記憶能力,給予TSA干預則能明顯的改善腦損傷大鼠遠期的空間學習記憶能力。5.RT-PCR結(jié)果:(1)首先,檢測新生大鼠HIBD后三個不同時間點KCC2 m RNA的表達變化,結(jié)果顯示在缺血缺氧性腦損傷后第三天時KCC2m RNA的表達變化最為明顯,因此在以后的分子學實驗中選擇這個時間點進行相關實驗操作。(2)在新生大鼠HIBD后第三天時同時檢測Neu N和KCC2 m RNA的表達變化,結(jié)果顯示KCC2表達下降比例明顯高于Neu N,表明KCC2 m RNA在新生大鼠缺血缺氧性腦損傷中的表達下降主要是由神經(jīng)元的損傷引起的,而不是神經(jīng)元的死亡造成的。6.分別檢測三組新生大鼠REST、Co REST、HDAC1、KCC2 m RNA的表達變化,結(jié)果顯示與假手術組相比,缺血缺氧組REST、Co REST、HDAC1 m RNA表達明顯升高,KCC2 m RNA表達則顯著下降。給予TSA干預,抑制REST、Co REST、HDAC1 m RNA表達,阻止了KCC2 m RNA表達的下調(diào)。7.Western blot實驗結(jié)果顯示:與假手術組相比,HIBD后REST、Co REST、HDAC1蛋白的表達明顯升高,而KCC2蛋白的表達則顯著下降。給予TSA干預,抑制REST、Co REST、HDAC1蛋白的表達,阻止了KCC2蛋白的表達下調(diào)。免疫組織熒光實驗的測得的結(jié)果與Western blot一致。結(jié)論本課題研究發(fā)現(xiàn)TSA對新生大鼠HIBD有一定的近遠期腦保護作用,其藥物作用機制是抑制轉(zhuǎn)錄復合物REST/Co REST/HDAC1,通過表觀遺傳學調(diào)控阻止腦缺血缺氧后KCC2的下調(diào),維持了神經(jīng)元內(nèi)Cl-的穩(wěn)態(tài),進而發(fā)揮腦保護作用。
【學位授予單位】：鄭州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R742

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