本文關(guān)鍵詞：調(diào)節(jié)性T細胞在不可分型流感嗜血桿菌誘導(dǎo)的慢性阻塞性肺疾病急性加重中的作用研究　出處：《吉林大學(xué)》2017年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：慢性阻塞性肺疾病(Chronic obstructive pulmonary disease,COPD)是一種氣道慢性炎癥性疾病,以不完全可逆、進行性加重的氣流受限和炎癥為特征。目前認為COPD將是全球第三大死因,但其發(fā)病機制尚未有明確的報道。研究表明,香煙煙霧(Cigarette Smoke,CS)是誘導(dǎo)COPD發(fā)生的主要原因。目前研究發(fā)現(xiàn)可能的機制主要是:CS中的有害顆粒導(dǎo)致炎性細胞的浸潤和聚集,使肺部對其產(chǎn)生異常免疫反應(yīng);CS可以激活氣道上皮細胞免疫反應(yīng);減弱纖毛的運動能力;降低粘液的修復(fù)作用;CS能夠持續(xù)激活肺泡巨噬細胞,從而進一步加重氣道炎癥反應(yīng)。COPD急性加重性發(fā)作(Acute exacerbation of chronic obstructive pulmonary disease,AECOPD)是導(dǎo)致COPD高致殘率和高致死率的主要原因。研究表明,不可分型流感嗜血桿菌(Non-typeable Haemophilus influenzae NTHi)是誘發(fā)AECOPD的最主要原因,但其機制尚未得到完全闡釋。隨著對NTHi與調(diào)節(jié)性T細胞(Regulatory T cells,Tregs)相關(guān)性研究的不斷深入,現(xiàn)已證實NTHi感染導(dǎo)致AECOPD與Tregs介導(dǎo)的適應(yīng)性免疫應(yīng)答密切相關(guān),但機制尚需進一步研究。因此,以Tregs為研究對象,闡釋NTHi感染誘導(dǎo)的AECOPD的免疫學(xué)機制,對解釋COPD及AECOPD的發(fā)生機制有重要的意義。本研究首先采用被動煙霧刺激的方法對BALB/c小鼠進行全身暴露,建立COPD模型,實驗動物分為正常對照組(正常飼養(yǎng)17周,以下稱NC組),煙霧組(煙熏17周,以下稱CS組),NTHi組(正常飼養(yǎng)16周后,氣管滴注NTHi 1周,以下稱NTHi組),NTHi-CS混合組(煙熏16周后,氣管滴注NTHi繼續(xù)CS刺激1周,以下稱NTHi+CS組)。細菌感染濃度為1×107CFU/ml,感染劑量為30μl,CS組以PBS進行相同處理。造模結(jié)束后,肺功能儀(BUXCO,PFT Controller)檢測小鼠肺功能。各組小鼠肺功能結(jié)束后,取小鼠肺組織,經(jīng)固定后進行HE染色,觀察病理損傷;取小鼠外周血血清,以酶聯(lián)免疫吸附法(Enzyme-linked immuno sorbent assay,ELISA)檢測血清中TGF-β1和IL-17的含量;收集脾臟,制備脾細胞懸液,以流式細胞術(shù)(Flow cytometry FCM)檢測脾臟中Tregs的變化;小鼠肺組織,經(jīng)固定后以免疫組化法檢測Foxp3、RORγt和IL-17蛋白的表達,并以Real-time PCR法對Foxp3和RORγt m RNA進行檢測。肺功能檢測結(jié)果顯示:CS全身暴露法對小鼠建立COPD模型成功,與NC組相比,其他各實驗組(CS組,NTHi組和NTHi+CS組)第0.1秒呼出的氣體(Forced Expiratory Volume in 100ms,FEV 0.1)均有所降低,其中CS組和NTHi+CS組顯著降低(p0.001,p0.001);實驗組肺功能殘氣量(Functional Residual Capacity,FRC)均顯著增加,其中CS組和NTHi+CS組增加更為顯著(p0.001,p0.001),CS組和NTHi+CS組肺阻力(RI)顯著增加(p0.001,p0.001)。HE結(jié)果顯示:與NC組相比,實驗組肺組織出現(xiàn)不同程度的病理改變,CS組和NTHi組出現(xiàn)炎性細胞浸潤,肺組織各級支氣管上皮細胞輕度缺失、脫落等現(xiàn)象;NTHi+CS組中大量出現(xiàn)炎性細胞浸潤,肺組織各級支氣管上皮細胞嚴重缺失、脫落,肺泡腔擴大、融合成肺大泡等現(xiàn)象。FCM結(jié)果顯示:與NC組比,CS組、NTHi組和NTHi+CS組脾細胞懸液CD4+CD25+Foxp3+Tregs比例明顯降低(p0.001),但細胞數(shù)量在NTHi+CS組相對是增加的,細胞總數(shù)(Total cells,Tc)與NC組比較無顯著性差異(p0.05)。ELISA結(jié)果顯示:與NC組比較,CS組和NTHi+CS組中TGF-β1、IL-17表達均顯著升高(p0.05,p0.01);NTHi組中IL-17表達顯著升高(p0.001);TGF-β1表達未見顯著升高(p0.05)。免疫組化和Real-time PCR結(jié)果顯示:與NC組相比,CS組和NTHi組中Foxp3在蛋白水平和m RNA水平表達無明顯差異(p0.05),在NTHi+CS組中表達顯著降低(p0.05),RORγt和IL-17在各實驗組中表達均顯著增加(p0.001)。綜上所述,通過以上研究可初步認為:CS可以引起COPD的發(fā)生,COPD的炎癥反應(yīng)與CS激活Tregs并分泌TGF-β1密切相關(guān);NTHi感染穩(wěn)定期COPD后,可以通過下調(diào)Foxp3,上調(diào)RORγt,導(dǎo)致AECOPD。
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R563.9

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本文編號：1311742