本文關(guān)鍵詞：高氧通過CHOP介導(dǎo)的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激途徑參與AECⅡ凋亡

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【摘要】：目的多種危險(xiǎn)因素包括高氧作用于早產(chǎn)兒,特別小早產(chǎn)兒不成熟的肺組織可導(dǎo)致支氣管肺發(fā)育不良(BPD)的發(fā)生。肺泡II型上皮細(xì)胞(AECⅡ)形態(tài)及功能變化在肺發(fā)育和BPD發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮重要作用,內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激(ERS)凋亡途徑參與多種疾病病理過程,其中CCAAT/增強(qiáng)子結(jié)合蛋白同源蛋白(CHOP)是ERS重要下游信號通路。本研究擬利用原代培養(yǎng)AECⅡ探討CHOP介導(dǎo)ERS途徑對高氧暴露誘導(dǎo)的AECⅡ凋亡的影響。方法SD雌雄大鼠交配,雌鼠孕19~20 d時剖腹取胎鼠,取胎鼠肺組織培養(yǎng)AECⅡ原代細(xì)胞用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。原代AECⅡ隨機(jī)分為空氣組、高氧組,細(xì)胞培養(yǎng)24、48及72 h后收集兩組細(xì)胞,其中高氧組經(jīng)過95%高氧處理,而空氣組直接暴露于空氣中,兩組細(xì)胞分別經(jīng)倒置相差顯微鏡觀察形態(tài)學(xué)改變,Annexin V/PI雙染流式細(xì)胞術(shù)檢測AECⅡ凋亡,qRT-PCR及Western blot分別檢測葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白78(GRP78)、活化轉(zhuǎn)錄因子4(ATF4)、需肌醇酶1(IRE1)、活化轉(zhuǎn)錄因子6(ATF6)、X盒結(jié)合蛋白1(XBP1)、激酶R樣內(nèi)質(zhì)網(wǎng)激酶(PERK)及C/EBP同源蛋白(CHOP)等mRNA及蛋白質(zhì)表達(dá)情況,及免疫熒光法觀察CHOP定位及表達(dá)。結(jié)果(1)AECⅡ原代培養(yǎng):成功利用胎肺組織培育出原代AECⅡ細(xì)胞。(2)AECⅡ高氧損傷模型建立:高氧暴露后,AECⅡ透光度減少,細(xì)胞逐漸伸展,形態(tài)表現(xiàn)不規(guī)則,細(xì)胞內(nèi)點(diǎn)狀顆粒聚集,呈空泡化改變的細(xì)胞增多,且呈漂浮狀態(tài)的死細(xì)胞增多。(3)AECⅡ細(xì)胞凋亡:在各時間點(diǎn),空氣組AECⅡ凋亡不明顯,同時間點(diǎn)高氧組AECⅡ凋亡率則顯著增加,且給氧時間越長AECⅡ凋亡率越高(P均0.05)。(4)qRT-PCR檢測GRP78、CHOP、PERK、IRE1、ATF6、XBP1和ATF4 mRNA的表達(dá):各時間點(diǎn),GRP78、CHOP、PERK、IRE1、ATF6、XBP1和ATF4 mRNA在高氧暴露組AECⅡ中表達(dá)較同時間點(diǎn)空氣組均明顯增加,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均0.05)。且經(jīng)高氧處理時間延長,各待檢測因子mRNA表達(dá)水平漸增加(P均0.05)。(6)Western blot檢測GRP78、CHOP、PERK、IRE1、ATF6、XBP1和ATF4的表達(dá):與同時間點(diǎn)空氣組相比,高氧暴露組各時間點(diǎn)AECⅡ中GRP78、CHOP、PERK、IRE1、ATF6、XBP1和ATF4蛋白表達(dá)顯著增加,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均0.05)。且高氧組各因子蛋白表達(dá)含量隨著給氧時間加長呈逐漸上升趨勢(P均0.05)。(7)免疫熒光檢測CHOP表達(dá):結(jié)果示在各個時間點(diǎn),高氧組熒光強(qiáng)度明顯強(qiáng)于空氣組,提示氧暴露后CHOP表達(dá)量較前增多,而空氣組CHOP表達(dá)均不明顯熒光強(qiáng)度弱(P均0.05)。結(jié)論(1)高氧暴露可增加原代培養(yǎng)AECⅡ細(xì)胞凋亡率。(2)高氧暴露可啟動ERS參與原代培養(yǎng)AECⅡ凋亡。(3)CHOP介導(dǎo)的ERS途徑可能參與高氧暴露后AECⅡ凋亡發(fā)生。(4)這三條信號通路,包括PERK、IRE1及ATF6,可能均在CHOP介導(dǎo)的AECⅡ凋亡中發(fā)揮著重要作用。
【學(xué)位授予單位】：江蘇大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R722.6

【參考文獻(xiàn)】

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1 早產(chǎn)兒支氣管肺發(fā)育不良調(diào)查協(xié)作組;容志惠;常立文;傅萬海;張U，

本文編號：1302644