發(fā)布時(shí)間：2017-12-13 18:24

  本文關(guān)鍵詞：多成分環(huán)境下P-gp對(duì)甘草次酸吸收的影響研究

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【摘要】：目的:自生物藥劑學(xué)分類(lèi)系統(tǒng)(biopharmaceutics classification system)提出以來(lái),生物藥劑學(xué)分類(lèi)系統(tǒng)已被廣泛使用,應(yīng)用于早期化合物篩選,制劑處方設(shè)計(jì),仿制藥的生物等效性評(píng)價(jià),臨床過(guò)程中的各個(gè)環(huán)節(jié)和階段的重要研究等。在借鑒化學(xué)藥品的生物藥劑學(xué)分類(lèi)系統(tǒng)的理念上,本課題組提出了中藥生物藥劑學(xué)分類(lèi)系統(tǒng)的科學(xué)框架,目的是將其應(yīng)用在中藥當(dāng)中,更好的為中藥服務(wù)。藥物的水溶解度和腸滲透性是生物藥劑學(xué)分類(lèi)系統(tǒng)研究的關(guān)鍵指標(biāo)。腸滲透性是重要的指標(biāo)之一,然而藥物透過(guò)腸膜是一個(gè)動(dòng)態(tài)的多樣化的過(guò)程。包括腸道菌、酶對(duì)藥物的代謝以及轉(zhuǎn)運(yùn)體等對(duì)藥物的轉(zhuǎn)運(yùn)。腸道內(nèi)的轉(zhuǎn)運(yùn)體對(duì)藥物的吸收影響較大,且藥物間的相互作用也多經(jīng)此途徑發(fā)生。藥物的轉(zhuǎn)運(yùn)包括被動(dòng)轉(zhuǎn)運(yùn)、主動(dòng)轉(zhuǎn)運(yùn)和其他轉(zhuǎn)運(yùn)方式。然而主動(dòng)轉(zhuǎn)運(yùn)中的藥物外排轉(zhuǎn)運(yùn)器能依賴ATP分解釋放的能量,將底物逆向泵出細(xì)胞,降低底物在細(xì)胞內(nèi)的濃度,從而影響吸收。藥物外排轉(zhuǎn)運(yùn)器如P-糖蛋白、多藥耐藥相關(guān)蛋白、乳腺癌耐藥蛋白等。其中P-糖蛋白是目前研究最多的外排蛋白,基于P-gp的藥物相互作用是熱點(diǎn)問(wèn)題。甘草被稱(chēng)之為國(guó)老,不僅僅因?yàn)樗亲畛Ｓ玫闹兴?它也是具有高活性,廣藥效的中藥。因此,本文以甘草中主要高含量成分甘草酸的代謝物甘草次酸為研究對(duì)象,研究多成分環(huán)境下P-糖蛋白對(duì)的甘草次酸吸收的影響以及甘草次酸對(duì)P-糖蛋白的影響。以吸收參數(shù)有效滲透系數(shù)Peff、吸收速率常數(shù)Ka、吸收分?jǐn)?shù)Fa為指標(biāo),檢測(cè)與不同成分配伍以及加入P-gp抑制劑后甘草次酸滲透性的變化,比較結(jié)果之間差異。第一,得出甘草次酸是否為P-gp的底物,第二,成分配伍對(duì)其影響,第三,配伍影響是否通過(guò)影響P-gp起的作用,第四,甘草次酸對(duì)P-gp的抑制或誘導(dǎo)。本文將甘草次酸放在多成分環(huán)境中,通過(guò)生物藥劑學(xué)分類(lèi)系統(tǒng)中滲透性的變化,分析了影響甘草次酸吸收的因素,為甘草次酸與其他藥物的合用提供依據(jù),同時(shí)也為中藥生物藥劑學(xué)分類(lèi)系統(tǒng)(Chineses Medicine Material biopharmaceutics classification system,CMMBCS)的研究積累了數(shù)據(jù),為藥物的正確分類(lèi)提供方法。方法:建立地高辛、酚紅含量測(cè)定的分析方法,采用低滲透藥物酚紅和FDA中標(biāo)準(zhǔn)藥熒光素、美托洛爾、地高辛對(duì)在體單向腸灌流模型進(jìn)行驗(yàn)證,確保研究模型的可行性;建立甘草次酸含量測(cè)定的分析方法;從單一成分到兩成分再到多成分的方式進(jìn)行配伍,研究配伍對(duì)甘草次酸的滲透性影響;加入P-gp抑制劑維拉帕米,確定甘草次酸是否為p-gp抑制劑;以地高辛為底物,研究加入成分對(duì)甘草次酸的影響是否通過(guò)p-gp起作用,以地高辛為底物,給予甘草次酸,研究甘草次酸對(duì)p-gp的作用。結(jié)果:1.在體單向腸灌流模型的驗(yàn)證。給予酚紅,酚紅的有效滲透系數(shù)Peff為(1.09±0.62)×1(r6cm/s,從實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知,酚紅為低滲透性藥物,與文獻(xiàn)相符[1-2]。給予熒光素,熒光素的有效滲透系數(shù)Peff為(0.21±0.14)×10-6cm/s,給予美托洛爾,美托洛爾的有效滲透系數(shù)為(5.09±1.21)× 10-5-5cm/s,從實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知,熒光素接近零滲透,美托洛爾為高滲,與文獻(xiàn)相符[3]。給予P-gp底物地高辛,比較加入抑制劑維拉帕米前后,地高辛有效滲透系數(shù)變化,實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,加入抑制劑維拉帕米后,地高辛滲透系數(shù)由(1.07±0.59)×10-5cm/s升高到(3.28±1.0)×10-5cm/s,地高辛的滲透性隨著抑制劑加入濃度的升高,有效滲透系數(shù)增大。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,小腸上皮細(xì)胞保持完整,連接緊密,P-gp表達(dá)完整,模型具有可行性。2.成分配伍對(duì)甘草次酸吸收影響。①通過(guò)單因素考察結(jié)合完全析因試驗(yàn)設(shè)計(jì),研究結(jié)果發(fā)現(xiàn),黃芩苷對(duì)甘草次酸的吸收作用最明顯,使甘草次酸的有效滲透系數(shù)由(4.05±0.78)×10-5cm/s降低到(2.18±0.63)×10-5cm/s,減少甘草次酸的滲透。而葛根素、小檗堿對(duì)甘草次酸滲透性無(wú)明顯影響。甘草次酸與葛根素、小檗堿配伍,滲透系數(shù)未發(fā)生改變,甘草次酸與葛根素、黃芩苷配伍滲透系數(shù)發(fā)生改變,但變化不明顯,甘草次酸與黃芩苷、小檗堿配伍,滲透性降低,由(4.05±0.78)×10-5cm/s到(1.35±0.69)×10-5cm/S,與完全析因分析結(jié)果一致,黃芩苷對(duì)甘草次酸影響最明顯,黃芩苷與葛根素和小檗堿分別存在交互作用。②通過(guò)給予高濃度(100μmol/L)P-gp抑制劑維拉帕米,發(fā)現(xiàn)甘草次酸的有效滲透系數(shù) peff由(4.05±0.78)×10-5cm/s 到(5.82±0.70)×10-5cm/s,t檢驗(yàn),實(shí)驗(yàn)結(jié)果具有顯著性差異,說(shuō)明甘草次酸受P-gp抑制劑維拉帕米的影響,說(shuō)明甘草次酸可能為P-gp的底物。③以地高辛為底物給予質(zhì)量濃度為200μg/ml、100μpg/ml的黃芩苷,結(jié)果顯示,隨著黃芩苷濃度的增加,地高辛滲透系數(shù)逐漸減小,由(6.07±2.94)×10-5cm/s 到(4.81±0.56)×10-5cm/s 再到(2.68±0.52)×10-5cm/s,這個(gè)結(jié)果表明黃芩苷對(duì)P-gp為誘導(dǎo)作用。此結(jié)果與文獻(xiàn)相符[4],佐證了甘草次酸為P-gp的底物。3.甘草次酸對(duì)P-gp的影響。以地高辛為底物給予不同濃度(20、50、100μg/ml)的甘草次酸,檢測(cè)地高辛有效滲透系數(shù)peff分別為(7.99±1.79)×10-5cm/s、(17.4±1.72)×10-5cm/s、(3.65±0.06)×10-5cm/s,實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,甘草次酸對(duì)p-gp在低濃度時(shí)抑制,高濃度時(shí)存在輕度誘導(dǎo)作用。結(jié)論:甘草次酸為P-gp的底物,且甘草次酸在低濃度時(shí)為P-gp的抑制劑,在高濃度時(shí)存在輕度誘導(dǎo)作用。黃芩苷能通過(guò)誘導(dǎo)P-gp的表達(dá),降低甘草次酸的滲透性,說(shuō)明黃芩苷為P-gp的誘導(dǎo)劑,多成分環(huán)境對(duì)甘草次酸的吸收存在影響;甘草次酸的有效滲透系數(shù)Peff為(4.05±0.78)×10-5cm/s,高滲透性成分。本文的研究特色及創(chuàng)新點(diǎn):1.首次建立基于P-gp模型研究多成分環(huán)境對(duì)藥物滲透性的影響。2.通過(guò)FDA標(biāo)準(zhǔn)藥物對(duì)在體單灌流模型進(jìn)行驗(yàn)證體現(xiàn)了研究方法的科學(xué)性。3.首次證明甘草次酸為P-gp的底物及黃芩苷作為誘導(dǎo)劑對(duì)甘草次酸的滲透性影響極其顯著。
【學(xué)位授予單位】：北京中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類(lèi)號(hào)】：R283.6

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本文編號(hào)：1286147