本文關(guān)鍵詞：乳腺腫瘤小鼠模型建立及脾臟MDSC細(xì)胞亞型分析

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【摘要】：骨髓來(lái)源的抑制性細(xì)胞(Myeloid-derived suppressor cells,MDSCs)是機(jī)體重要的免疫抑制細(xì)胞,其本質(zhì)上是一群未成熟、生物學(xué)功能復(fù)雜的細(xì)胞,它們具有顯著的抑制機(jī)體進(jìn)行免疫應(yīng)答促進(jìn)腫瘤細(xì)胞免疫逃逸的能力。鑒于MDSCs與腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞(Tumor-associated macrophage,TAM)、腫瘤相關(guān)中性粒細(xì)胞(Tumor-associated neutrophils,TAN)及M1型、M2型巨噬細(xì)胞及單核細(xì)胞、粒細(xì)胞、樹突細(xì)胞等多種不同髓系來(lái)源的細(xì)胞具有相互交織的表型特點(diǎn),導(dǎo)致了至今對(duì)其功能與明確表型間的關(guān)系不能明確,從而限制了對(duì)其發(fā)揮作用的分子機(jī)制的進(jìn)一步研究。目的:本研究旨在利用小鼠乳腺癌4T1細(xì)胞系移植重建小鼠乳腺癌動(dòng)物模型來(lái)研究在腫瘤重建過(guò)程中小鼠脾臟趨化因子受體與Toll樣受體(Toll-like receptor.TLR)在小鼠經(jīng)典MDSCs表型Gr-1和CD11b雙陽(yáng)性細(xì)胞中的表達(dá),從而建立小鼠脾臟MDSCs趨化因子受體與Toll樣受體表達(dá)譜,為進(jìn)一步分析MDSCs各亞型的功能及分子機(jī)制奠定基礎(chǔ)。方法:(1)利用原位移植腫瘤的方法構(gòu)建4T1移植小鼠模型。(2)流式細(xì)胞術(shù)建立小鼠乳腺癌細(xì)胞系4T1趨化因子受體與Toll樣受體表達(dá)譜。(3)細(xì)胞分離與流式細(xì)胞術(shù)分析脾臟粒細(xì)胞表面趨化因子受體和Toll樣受體,建立小鼠脾臟粒細(xì)胞趨化因子受體與Toll樣受體表達(dá)譜,多色流式細(xì)胞術(shù)分析脾臟MDSCs亞型,比較帶瘤小鼠與健康對(duì)照小鼠脾臟MDSCs不同亞型的差異,確定帶瘤小鼠的優(yōu)勢(shì)亞群。結(jié)果:(1)小鼠移植腫瘤細(xì)胞約1周后長(zhǎng)出了米粒大小的腫瘤塊,2周后,處死部分小鼠,計(jì)算脾指數(shù),正常組小鼠脾指數(shù)為:6.47±3.06,4T1組小鼠脾指數(shù)為:33.1±1.14,t檢驗(yàn)分析檢驗(yàn)兩組數(shù)據(jù)間的差異性得出:P值為2.24E-70.05。根據(jù)4周內(nèi)的測(cè)量數(shù)據(jù)結(jié)果,得出腫瘤體積呈S型生長(zhǎng)曲線。6周后,解剖小鼠,腫瘤細(xì)胞已經(jīng)轉(zhuǎn)移至肝臟和肺臟。(2)流式細(xì)胞結(jié)果顯示:小鼠乳腺腫瘤4T1細(xì)胞系中TLR2、TLR8、CCR5、CCR7、CXCR7陽(yáng)性細(xì)胞所占比率大于50%,其他趨化因子受體和Toll樣受體陽(yáng)性細(xì)胞所占比率很低、甚至沒(méi)有陽(yáng)性。(3)根據(jù)脾臟粒細(xì)胞初步分析結(jié)果、挑選出了:CCR1、CCR2、CCR6、CCR7、CXCR2、CXCR4、CXCR6、CX3CR1 對(duì)脾臟細(xì)胞進(jìn)行多色流式細(xì)胞分析.鑒定出帶瘤小鼠中CD45+Lin-CD11b+ly6G+ly6C-B7-Hx-CCR1+等28種不同MDSCs亞型。結(jié)論:利用原位移植4T1細(xì)胞系的方法,成功建立了向肝和肺轉(zhuǎn)移的小鼠乳腺癌模型;利用流式細(xì)胞分析術(shù)對(duì)4T1細(xì)胞系表面趨化因子受體和Toll樣受體表達(dá)進(jìn)行了鑒定;成功對(duì)小鼠脾臟粒細(xì)胞表面的趨化因子受體和Toll樣受體進(jìn)行了分析并對(duì)脾臟MDSCs亞型進(jìn)行了初步分型,這一系列實(shí)驗(yàn)可以為臨床上乳腺腫瘤治療靶點(diǎn)的選擇提供參考。
【學(xué)位授予單位】：沈陽(yáng)農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R737.9;R-332

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本文編號(hào)：1277066