本文關(guān)鍵詞：大黃附子加味方緩解急性胰腺炎的機(jī)制研究

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【摘要】：背景:急性胰腺炎(Acute pancreatitis,AP)是多種病因?qū)е乱让冈谝认賰?nèi)異常激活,引起胰腺組織自身消化、水腫、出血甚至壞死的炎癥反應(yīng)。臨床出現(xiàn)急性上腹痛、惡心、嘔吐、發(fā)熱和血胰酶增高等。病變程度輕重不等,輕者以胰腺水腫為主,稱為輕癥急性胰腺炎;少數(shù)重者胰腺出血壞死,稱為重癥急性胰腺炎(Severe acute pancreatitis,SAP)。AP作為臨床上常見的急腹癥,20%～30%會(huì)發(fā)展為SAP,SAP病情極為兇險(xiǎn),且發(fā)病機(jī)制復(fù)雜,通常伴隨全身炎癥反應(yīng)綜合征(SIRS)及全身多器官功能不全(MODS),臨床現(xiàn)階段尚無有效的治療此病的方法。因此,深入研究AP的發(fā)病機(jī)制及相關(guān)調(diào)節(jié)機(jī)制,為該病尋求新的有效的診斷及治療靶點(diǎn),成為現(xiàn)階段的研究熱點(diǎn)。大黃附子細(xì)辛湯(大黃附子湯)出自《金匱要略》,具有溫散寒凝以開閉結(jié),通下積滯以暢腸胃之效;現(xiàn)代研究表明,大黃附子湯能有效阻滯消化酶及各種炎癥因子從腺泡細(xì)胞釋放,從而腺泡細(xì)胞得到保護(hù),中醫(yī)學(xué)上常用該方來治療SAP等急危重癥。本研究旨在探求急性胰腺炎可能的發(fā)病機(jī)制,同時(shí)也為治療(重癥)急性胰腺炎提供新的思路及新的干預(yù)靶點(diǎn)。目的:探討CCN1對急性胰腺炎小鼠病情發(fā)展的影響及其調(diào)控靶點(diǎn);探求大黃附子加味方(DahuangFuziJia Wei Decoction,DHFZD)對重癥急性胰腺炎小鼠的保護(hù)作用及其相關(guān)作用機(jī)制;方法:腹腔注射雨蛙肽構(gòu)造小鼠AP模型;腹腔注射雨蛙肽+脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)構(gòu)造小鼠SAP模型;眼眶靜脈注射腺病毒構(gòu)造過表達(dá)CCN1基因小鼠模型;用灌胃法給小鼠灌注大黃附子加味方湯劑;生化方法分別測定各組小鼠血清淀粉酶值;觀察評判并統(tǒng)計(jì)各組小鼠胰腺組織的病理情況;采用實(shí)時(shí)定量PCR儀(Real time quantitative PCR,RT-PCR)檢測各組小鼠胰腺組織及肝臟組織CCN1及相關(guān)炎癥基因的表達(dá)情況;通過Western Blot法檢測小鼠胰腺組織及肝臟組織中CCN1蛋白的表達(dá)量:通過免疫組化法觀察統(tǒng)計(jì)胰腺組織中性粒細(xì)胞及巨噬細(xì)胞的滲出情況,并觀察CCN1蛋白的表達(dá)部位;結(jié)果:1.AP組小鼠血清淀粉酶值較對照組小鼠相比明顯升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05):AP組小鼠胰腺組織病理改變(水腫、腺泡壞死、炎癥浸潤及空泡形成)較對照組而言明顯加重,差異均具統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);過表達(dá)組小鼠血清淀粉酶值較空載體組小鼠相比降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);過表達(dá)組相比較空載體組而言,病理改變(水腫、腺泡壞死、炎癥浸潤)減輕,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);AP組小鼠較對照組小鼠相比,胰腺中CCN1基因及蛋白的表達(dá)量顯著降低,且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);過表達(dá)組小鼠肝臟組織、胰腺組織中CCN1基因表達(dá)量顯著高于空載體組,胰腺組織中CCN1蛋白表達(dá)量也顯著高于空載體組,且差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);CCN1蛋白主要表達(dá)于小鼠胰腺腺泡細(xì)胞的胞漿內(nèi);與空載體組相比,過表達(dá)組小鼠胰腺組織炎癥的減輕表現(xiàn)在中性粒細(xì)胞滲出的減少,而非巨噬細(xì)胞。2.DHFZD組小鼠血清淀粉酶值較SAP組小鼠相當(dāng),差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.8486);DHFZD組小鼠胰腺組織的病理改變(水腫、腺泡壞死、炎癥浸潤、空泡形成情況)均較SAP組小鼠好轉(zhuǎn),差異均具統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),而出血情況則無明顯改善;DHFZD組小鼠胰腺內(nèi)CCN1基因及蛋白的表達(dá)量較SAP組明顯升高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);DHFZD組小鼠胰腺組織的IL-1β mRNA、TNF-a mRNA表達(dá)量較SAP組降低,而IL-10mRNA表達(dá)量較SAP組升高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);與SAP組相比,DHFZD組小鼠胰腺組織炎癥的減輕表現(xiàn)在中性粒細(xì)胞滲出的減少,而非巨噬細(xì)胞。結(jié)論:CCN1可以通過減少中性粒細(xì)胞的浸潤進(jìn)而減輕小鼠胰腺組織的炎癥反應(yīng),這可能是減輕其炎癥反應(yīng)的機(jī)制之一,有望為臨床治療急性胰腺炎提供新的視野和思路;大黃附子加味方也會(huì)通過減輕小鼠胰腺組織內(nèi)的炎癥反應(yīng)來發(fā)揮對小鼠的保護(hù)作用,而這種保護(hù)作用很可能與大黃附子加味方升高了小鼠胰腺組織內(nèi)的CCN1表達(dá)量有關(guān)。
【學(xué)位授予單位】：南京中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R285.5

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：1256419