發(fā)布時(shí)間：2017-07-08 00:16

  本文關(guān)鍵詞：S100鈣離子結(jié)合蛋白A8在小鼠原始卵泡形成過(guò)程中的作用

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【摘要】：在哺乳動(dòng)物卵巢中,卵泡是構(gòu)成卵巢的基本結(jié)構(gòu)和功能單位。原始卵泡是卵泡的第一個(gè)發(fā)育階段,也是成熟卵泡唯一的來(lái)源。所以原始卵泡庫(kù)中原始卵泡的數(shù)量和數(shù)量的維持決定了雌性動(dòng)物一生的生育能力。原始卵泡由單個(gè)的卵母細(xì)胞和包裹著它的單層的扁平前顆粒細(xì)胞構(gòu)成。然而關(guān)于這兩類細(xì)胞是如何組裝形成原始卵泡的機(jī)制還不十分清楚。本研究采用原始卵泡大量形成前的19.0日胎齡(19.0 dpc)小鼠胚胎卵巢作為主要實(shí)驗(yàn)材料,通過(guò)對(duì)胚胎卵巢中細(xì)胞的遷移行為進(jìn)行研究,對(duì)原始卵泡形成時(shí)期,卵母細(xì)胞與前顆粒細(xì)胞間相互作用的機(jī)制進(jìn)行研究。首先,利用胚胎卵巢細(xì)胞體外重構(gòu)卵泡模型,發(fā)現(xiàn)19.0 dpc卵巢組織經(jīng)胰蛋白酶消化分離成單個(gè)卵母細(xì)胞和卵巢體細(xì)胞后,在體外經(jīng)不同細(xì)胞密度培養(yǎng)的條件下,單個(gè)的卵母細(xì)胞和卵巢體細(xì)胞可以克服細(xì)胞間的空間距離,重新聚合形成原始卵泡樣的細(xì)胞團(tuán)塊。證實(shí)了處于原始卵泡發(fā)生期的卵巢細(xì)胞具有可以移動(dòng)的能力。之后,利用細(xì)胞遷移檢測(cè)裝置,發(fā)現(xiàn)19.0 dpc胚胎卵巢體細(xì)胞組分在胎牛血清處理?xiàng)l件下發(fā)生定向遷移；相反,同時(shí)期的卵母細(xì)胞組分則沒(méi)有這種反應(yīng)。進(jìn)一步研究證實(shí),該發(fā)育時(shí)期的卵母細(xì)胞具有與胎牛血清類似的吸引胚胎期卵巢體細(xì)胞遷移的功能,提示該發(fā)育時(shí)期的卵母細(xì)胞能夠產(chǎn)生一種能夠使OSCs定向遷移的物質(zhì)。經(jīng)小鼠胚胎卵巢不同發(fā)育階段的趨化相關(guān)基因差異表達(dá)分析,發(fā)現(xiàn)S100鈣離子結(jié)合蛋白A8(S100A8)可能是發(fā)揮此功能的物質(zhì)。該基因?qū)儆阝}離子結(jié)合蛋白超家族的趨化分子。經(jīng)檢測(cè),Sl00a8特異表達(dá)于以生殖細(xì)胞合胞體形式存在的卵母細(xì)胞中。同時(shí),經(jīng)細(xì)胞遷移檢測(cè)實(shí)驗(yàn)證明,S100A8能顯著促進(jìn)OSCs的遷移,特別是最終將構(gòu)成原始卵泡的FOXL2陽(yáng)性的前顆粒細(xì)胞的遷移。另一方面,利用胚胎卵巢細(xì)胞體外重構(gòu)卵泡模型研究發(fā)現(xiàn),S100A8特異性抗體可以劑量依賴性地抑制卵泡樣細(xì)胞團(tuán)塊的形成。同時(shí),通過(guò)向完整的17.5dpc卵巢中注射S1OOa8特異性干擾RNA,對(duì)S100a8的表達(dá)實(shí)現(xiàn)顯著抑制的同時(shí),也對(duì)原始卵泡的形成造成顯著影響。綜上所述,S100A8可能是一種由合胞體卵母細(xì)胞特異性表達(dá)并分泌到細(xì)胞外,募集具有形成原始卵泡能力的前顆粒細(xì)胞,前顆粒細(xì)胞繼而與卵母細(xì)胞互作形成原始卵泡。本研究為原始卵泡形成過(guò)程中,卵母細(xì)胞與卵巢體細(xì)胞的互作機(jī)制研究提供了一個(gè)新的視角。
【關(guān)鍵詞】：卵巢 原始卵泡 細(xì)胞遷移 S100a8
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：Q954.4
【目錄】：

• 摘要3-4
• Abstract4-7
• 第一章 引言7-39
• 前言7-8
• 1.1 性腺的起源及早期發(fā)育8-15
• 1.1.1 生殖細(xì)胞的起源8-10
• 1.1.2 生殖嵴的發(fā)生10-12
• 1.1.3 原始生殖細(xì)胞的遷移與增殖12-15
• 1.2 性別的分化15-20
• 1.2.1 性別決定與分化15-18
• 1.2.2 生殖細(xì)胞的減數(shù)分裂18-20
• 1.3 原始卵泡的形成20-33
• 1.3.1 生殖細(xì)胞合胞體與第一次減數(shù)分裂前期的生殖細(xì)胞20-21
• 1.3.2 原始卵泡的形成21-23
• 1.3.3 原始卵泡形成過(guò)程中的卵母細(xì)胞凋亡23-26
• 1.3.4 原始卵泡形成的調(diào)控機(jī)制26-31
• 1.3.5 原始卵泡形成過(guò)程中的卵巢體細(xì)胞31-33
• 1.4 S100蛋白家族33-39
• 1.4.1 鈣離子結(jié)合蛋白33
• 1.4.2 S100蛋白的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)33-35
• 1.4.3 S100a8的表達(dá)調(diào)控35-36
• 1.4.4 S100a8的功能36-38
• 1.4.5 S100蛋白與生殖38-39
• 第二章 研究正文39-73
• 2.1 材料與方法39-48
• 2.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物、儀器與試劑39-42
• 2.1.2 實(shí)驗(yàn)操作與統(tǒng)計(jì)方法42-48
• 2.2 結(jié)果48-69
• 2.2.1 卵巢細(xì)胞的遷移能力48-50
• 2.2.2 胚胎卵母細(xì)胞吸引OSCs發(fā)生定向遷移50-52
• 2.2.3 S100a8在胚胎及新生小鼠卵巢中的表達(dá)及定位52-56
• 2.2.4 S100a8對(duì)胚胎OSCs遷移行為的影響56-57
• 2.2.5 S100a8對(duì)卵泡形成的影響57-62
• 2.2.6 S100a9對(duì)胚胎卵巢發(fā)育可能的影響62-64
• 2.2.7 S100a8不通過(guò)T1r4和Ager發(fā)揮調(diào)控作用64-69
• 2.3 討論69-73
• 2.3.1 梯度細(xì)胞密度實(shí)驗(yàn)的意義69-70
• 2.3.2 卵巢細(xì)胞的遷移行為70
• 2.3.3 S100a8的作用70-71
• 2.3.4 S100a9功能的空白71-72
• 2.3.5 S100蛋白受體72
• 2.3.6 展望72-73
• 第三章 結(jié)論73-75
• 參考文獻(xiàn)75-89
• 附件1 間隙連接在原始卵泡形成過(guò)程中的作用相關(guān)工作89-126
• 附件2 qRT-PCR反應(yīng)數(shù)據(jù)126-127
• 致謝127-129
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷129-131
• 博士研究生學(xué)習(xí)期間已發(fā)表文章131

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本文編號(hào)：532393