本文關(guān)鍵詞：幾種常見環(huán)境因素對(duì)小鼠海馬成體神經(jīng)發(fā)生與學(xué)習(xí)記憶的影響

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【摘要】：成體神經(jīng)發(fā)生(adult neurogenesis)是指成年動(dòng)物神經(jīng)系統(tǒng)某些特定部位存在神經(jīng)干細(xì)胞(neural stem cell),這些干細(xì)胞能終生不斷地產(chǎn)生新的神經(jīng)元和膠質(zhì)細(xì)胞,新產(chǎn)生的神經(jīng)元能發(fā)育分化成成熟的神經(jīng)元并與其它已經(jīng)存在的神經(jīng)元形成突觸聯(lián)系,融入到原有的神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)中。在哺乳類動(dòng)物中成體神經(jīng)干細(xì)胞主要局限于中樞神經(jīng)系統(tǒng)的兩個(gè)部位,第一個(gè)是側(cè)腦室壁的亞室?guī)?subventricular zone,SVZ),從這里產(chǎn)生的神經(jīng)元向嗅球和紋狀體遷移,然后大部分分化成中間神經(jīng)元。第二個(gè)是海馬中的齒狀回顆粒細(xì)胞下層(subgranular zone,SGZ),新產(chǎn)生的神經(jīng)元整合到齒狀回神經(jīng)環(huán)路中。起初,科學(xué)家認(rèn)為只有在胚胎發(fā)育階段,才有神經(jīng)干細(xì)胞的產(chǎn)生,但是現(xiàn)在研究表明,幾乎所有哺乳動(dòng)物存在成體神經(jīng)發(fā)生。另外成體神經(jīng)發(fā)生障礙與一些疾病相關(guān),例如老年癡呆、學(xué)習(xí)記憶能力下降,抑郁癥和精神分裂癥等。現(xiàn)在正在研究是否能通過促進(jìn)成體神經(jīng)發(fā)生,治療這些疾病。大腦缺血和其它實(shí)驗(yàn)損傷條件下成體神經(jīng)發(fā)生增強(qiáng),顯示成體神經(jīng)發(fā)生可能有利于大腦損傷后修復(fù)。學(xué)習(xí)記憶是大腦的高級(jí)功能,目前已成為生命科學(xué)研究的熱點(diǎn)之一。已研究表明,成體神經(jīng)發(fā)生與學(xué)習(xí)記憶關(guān)系密切。神經(jīng)發(fā)生的過程受到各種信號(hào)的調(diào)節(jié),比如受到神經(jīng)遞質(zhì)、生長(zhǎng)因子、神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子的調(diào)節(jié)以及各種環(huán)境因素的刺激等。這些因素有消極因素,比如應(yīng)激反應(yīng)。也有積極因素,如體育鍛煉、豐富多彩的生活環(huán)境以及學(xué)習(xí)行為都能促進(jìn)海馬成體神經(jīng)發(fā)生。那么成年新生神經(jīng)元是如何產(chǎn)生,發(fā)育以及整合到現(xiàn)有的神經(jīng)環(huán)路中,其分子調(diào)控的機(jī)制是什么,成體神經(jīng)發(fā)生對(duì)大腦的功能有哪些有利和不利的影響。為了回答以上問題,本試驗(yàn)從環(huán)境因素角度出發(fā),具體選用幾種目前常見的神經(jīng)相關(guān)藥物,包括苦馬豆素,重金屬鉛,氯化鋰和亞硝酸鹽。目的一:研究這些藥物單獨(dú)或結(jié)合對(duì)成體神經(jīng)發(fā)生和學(xué)習(xí)記憶的影響。目的二:通過這些神經(jīng)相關(guān)藥物研究成體神經(jīng)發(fā)生和學(xué)習(xí)記憶之間關(guān)系,目的三:通過這幾種神經(jīng)相關(guān)藥物探索影響神經(jīng)發(fā)生和學(xué)習(xí)記憶相關(guān)的分子機(jī)制。本試驗(yàn)運(yùn)用BrdU(新生細(xì)胞標(biāo)志物)活體注射、多重?zé)晒饷庖呓M織化學(xué)、激光共聚焦顯微鏡、Western blot、Morris水迷宮試驗(yàn)等先進(jìn)的形態(tài)學(xué)、分子生物學(xué)和行為學(xué)技術(shù)方法,研究成體神經(jīng)發(fā)生對(duì)大腦功能的影響。研究結(jié)果如下:1.苦馬豆素是瘋草主要的有毒成分,馬羊等家畜攝食瘋草后會(huì)出現(xiàn)神經(jīng)系統(tǒng)功能障礙,如步履蹣跚、行為異常,嚴(yán)重者導(dǎo)致動(dòng)物中毒死亡,給畜牧業(yè)造成了巨大經(jīng)濟(jì)損失。研究表明苦馬豆素能抑制α-甘露糖苷酶的活性,造成甘露糖積累,使糖蛋白合成受阻,導(dǎo)致神經(jīng)細(xì)胞空泡變性,誘導(dǎo)神經(jīng)元凋亡。結(jié)果表明,在體外細(xì)胞培養(yǎng)試驗(yàn)和在體試驗(yàn),苦馬豆素能抑制神經(jīng)前體細(xì)胞的增殖和存活。另外,苦馬豆素處理后,小鼠海馬中的蛋白雙皮質(zhì)素(DCX)和突觸小泡蛋白(SYP)表達(dá)量均顯著降低,但是凋亡蛋白(caspase3)和膠質(zhì)纖維素性酸性蛋白(GFAP)的表達(dá)量卻顯著升高。行為學(xué)試驗(yàn)表明,苦馬豆素處理后能損傷海馬依賴的學(xué)習(xí)和記憶。本研究的結(jié)果表明苦馬豆素能抑制成體神經(jīng)發(fā)生并能損傷學(xué)習(xí)記憶。2.鉛是我們?nèi)粘Ｉ钪薪?jīng)常接觸到的重金屬,也是影響神經(jīng)系統(tǒng)神經(jīng)毒藥之一。本試驗(yàn)不但研究鉛中毒對(duì)小鼠成體神經(jīng)發(fā)和學(xué)習(xí)記憶的影響,也研究了目前臨床上治療抑郁癥的藥物氯化鋰。本研究旨在探討鋰對(duì)小鼠鉛中毒引起損傷的保護(hù)作用。結(jié)果表明:鉛處理后能顯著的抑制成體神經(jīng)發(fā)生,而鋰處理能促進(jìn)成體神經(jīng)發(fā)生。有意思的是,預(yù)處理鋰能保護(hù)鉛對(duì)神經(jīng)干細(xì)胞的毒性。另外,本研究發(fā)現(xiàn)使用鋰可以有效的減輕鉛對(duì)小鼠認(rèn)知能力的損傷。鋰可以顯著的補(bǔ)償海馬中鉛導(dǎo)致的磷酸化的GSK-3β和microRNA-34c的損耗。此外,鋰的保護(hù)作用還體現(xiàn)在其他系統(tǒng)。鉛處理組的小鼠身體一些器官功能發(fā)生紊亂,比如脾臟、肝臟和腎臟腫脹或者壞死。而鋰和鉛共處理組小鼠這些病變的發(fā)生率明顯減少。本研究表明鋰可以減弱鉛中毒帶來的損傷,為以后的臨床治療鉛中毒提供理論依據(jù)。3.亞硝酸鹽是我們?nèi)粘Ｉ钪薪?jīng)常接觸到一種食品添加劑。但是,其對(duì)成體神經(jīng)發(fā)生方面還沒有報(bào)道。研究結(jié)果表明:亞硝酸鹽處理小鼠齒狀回顆粒層中的BrdU陽性細(xì)胞數(shù)量、存活率均極顯著低于對(duì)照組,表明亞硝酸鹽中毒對(duì)小鼠新生神經(jīng)干細(xì)胞的增殖和存活產(chǎn)生了影響。另外亞硝酸鹽處理組BrdU/NeuN雙陽性細(xì)胞的數(shù)量極顯著低于對(duì)照組。本研究的結(jié)果表明,亞硝酸鹽中毒能顯著抑制小鼠神經(jīng)干細(xì)胞增殖,降低新生細(xì)胞的存活。
【關(guān)鍵詞】：海馬 成體神經(jīng)發(fā)生 學(xué)習(xí)記憶 苦馬豆素 鉛 鋰 亞硝酸鹽
【學(xué)位授予單位】：西北農(nóng)林科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：Q42
【目錄】：

• 摘要6-8
• ABSTRACT8-14
• 第一章 成體神經(jīng)發(fā)生及突觸可塑性14-34
• 1.1 神經(jīng)源性和非神經(jīng)源性區(qū)域14-16
• 1.2 成體神經(jīng)發(fā)生是成年大腦神經(jīng)發(fā)育行為16-17
• 1.3 成體神經(jīng)發(fā)生起源于神經(jīng)干細(xì)胞17-18
• 1.4 海馬成體神經(jīng)發(fā)生過程18-22
• 1.4.1 神經(jīng)元發(fā)育的不同階段18-22
• 1.5 成年SVZ和嗅球中的神經(jīng)發(fā)生22-23
• 1.6 海馬中的纖維聯(lián)系23-24
• 1.6.1 突觸的傳入纖維23-24
• 1.6.2 突觸的傳出纖維24
• 1.7 成年嗅球上皮和外周神經(jīng)系統(tǒng)其他部分的神經(jīng)發(fā)生24-25
• 1.8 神經(jīng)發(fā)生的激活現(xiàn)象25-26
• 1.9 神經(jīng)發(fā)生的調(diào)控因素26-31
• 1.10 成體神經(jīng)發(fā)生的功能31
• 1.11 成體神經(jīng)發(fā)生的醫(yī)學(xué)價(jià)值31-32
• 1.12 成體神經(jīng)發(fā)生的未來展望32-34
• 第二章 苦馬豆素抑制成體神經(jīng)發(fā)生并且損傷學(xué)習(xí)記憶34-49
• 2.1 材料方法35-38
• 2.1.1 試劑和抗體35
• 2.1.2 細(xì)胞培養(yǎng)35
• 2.1.3 BrdU處理細(xì)胞35-36
• 2.1.4 PI處理細(xì)胞36
• 2.1.5 動(dòng)物試驗(yàn)設(shè)計(jì)36
• 2.1.6 動(dòng)物取材與切片36
• 2.1.7 齒狀回中干細(xì)胞數(shù)增殖數(shù)量統(tǒng)計(jì)36-37
• 2.1.8 齒狀回中新生神經(jīng)元數(shù)量統(tǒng)計(jì)37
• 2.1.9 細(xì)胞存活和分化37
• 2.1.10 免疫印跡雜交37-38
• 2.1.11 水迷宮試驗(yàn)38
• 2.1.12 數(shù)據(jù)分析38
• 2.2 結(jié)果38-47
• 2.2.1 苦馬豆素抑制細(xì)胞增殖并引起細(xì)胞凋亡38-39
• 2.2.2 苦馬豆素抑制海馬齒狀回中的神經(jīng)干細(xì)胞的增殖39-42
• 2.2.3 苦馬豆素影響新生細(xì)胞的存活和分化，但不影響其遷移42-44
• 2.2.4 苦馬豆素?fù)p傷小鼠海馬學(xué)習(xí)記憶功能44-45
• 2.2.5 苦馬豆素處理對(duì)大腦皮層神經(jīng)元增殖和遷移的影響45
• 2.2.6 苦馬豆素處理對(duì)海馬神經(jīng)元增殖和遷移的影響45-47
• 2.3 討論47-49
• 第三章 鋰、鉛和丙烯酰胺對(duì)小鼠成體神經(jīng)發(fā)生及學(xué)習(xí)記憶的影響49-68
• 3.1 材料方法50-54
• 3.1.1 試劑和抗體50
• 3.1.2 原代小鼠海馬細(xì)胞培養(yǎng)50
• 3.1.3 細(xì)胞活性檢測(cè)50
• 3.1.4 動(dòng)物試驗(yàn)設(shè)計(jì)50-51
• 3.1.5 動(dòng)物取材與切片51
• 3.1.6 病理組織學(xué)觀察（H&E染色）51-52
• 3.1.7 齒狀回中干細(xì)胞數(shù)增殖數(shù)量統(tǒng)計(jì)52
• 3.1.8 齒狀回中新生神經(jīng)元數(shù)量統(tǒng)計(jì)52
• 3.1.9 細(xì)胞存活和分化52
• 3.1.10 免疫印跡雜交52
• 3.1.11 水迷宮試驗(yàn)52
• 3.1.12 RT-PCR實(shí)時(shí)定量52-54
• 3.1.13 數(shù)據(jù)分析54
• 3.2 結(jié)果54-65
• 3.2.1 鋰預(yù)處理能顯著抑制鉛引起的體重降低和肝臟，，脾臟和腎臟的重量升高54
• 3.2.2 鋰能保護(hù)鉛對(duì)脾臟、肝臟和腎臟的毒性54-56
• 3.2.3 鋰能保護(hù)鉛對(duì)細(xì)胞的毒性56-57
• 3.2.4 鋰預(yù)處理能保護(hù)鉛對(duì)海馬干細(xì)胞和新生神經(jīng)元的毒性57-59
• 3.2.5 鋰預(yù)處理能抑制鉛對(duì)細(xì)胞的存活和分化的損傷59-61
• 3.2.6 鋰可以保護(hù)鉛引起的學(xué)習(xí)與記憶障礙61-62
• 3.2.7 鉛和鋰相互影響GSK-3β 的表達(dá)62
• 3.2.8 氯化鋰對(duì)丙烯酰胺引起小鼠運(yùn)動(dòng)行為障礙有一定的保護(hù)作用62-65
• 3.3 討論65-68
• 第四章 亞硝酸鹽抑制小鼠成體神經(jīng)發(fā)生68-76
• 4.1 材料方法68-70
• 4.1.1 主要試劑和儀器68
• 4.1.2 動(dòng)物分組與BrdU注射68-69
• 4.1.3 動(dòng)物取材與切片69
• 4.1.4 BrdU-DAB免疫組織化學(xué)染色69
• 4.1.5 BrdU/NeuN/GFAP三標(biāo)免疫熒光染色69
• 4.1.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析69-70
• 4.2 結(jié)果70-75
• 4.2.1 亞硝酸鹽對(duì)小鼠體重及各臟器重量無顯著影響70
• 4.2.2 亞硝酸鹽中毒抑制小鼠海馬中成體神經(jīng)干細(xì)胞的增殖70-71
• 4.2.3 亞硝酸鹽降低小鼠海馬新生細(xì)胞存活率71-72
• 4.2.4 亞硝酸鹽對(duì)小鼠海馬新生細(xì)胞分化和遷移方向的影響72-75
• 4.3 討論75-76
• 結(jié)論76-77
• 參考文獻(xiàn)77-89
• 常用縮略詞89-90
• 致謝90-91
• 作者簡(jiǎn)介91-92

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3 張卓;孕酮對(duì)成年神經(jīng)發(fā)生和腦缺血后神經(jīng)再生的影響及其分子機(jī)制[D];南京醫(yī)科大學(xué);2009年

4 范慶磊;自主跑輪運(yùn)動(dòng)對(duì)幼齡小鼠學(xué)習(xí)記憶、海馬神經(jīng)發(fā)生及相關(guān)因子的影響[D];華東師范大學(xué);2012年

5 邵虹;青海沙蜥成體神經(jīng)發(fā)生的特征描述[D];蘭州大學(xué);2012年

6 張學(xué)乾;豬與小鼠海馬成體神經(jīng)發(fā)生以及海馬結(jié)構(gòu)特征的對(duì)比分析[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2012年

7 孫藝學(xué);五味子素A、B對(duì)小鼠大腦腦室側(cè)區(qū)神經(jīng)發(fā)生的影響[D];吉林大學(xué);2014年

8 陸樂;自主運(yùn)動(dòng)對(duì)小鼠學(xué)習(xí)記憶及海馬神經(jīng)發(fā)生的影響[D];華東師范大學(xué);2013年

9 晉貞超;衰老過程中小鼠海馬神經(jīng)發(fā)生及微環(huán)境改變的初步研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2014年

10 朱瑩;1，25（OH）_2D_3缺乏對(duì)成年神經(jīng)發(fā)生的影響及其調(diào)控機(jī)制的研究[D];南京醫(yī)科大學(xué);2009年

本文編號(hào)：527892