1型鴨甲肝病毒（Duck hepatitis A virus type 1,DHAV-1）屬于小RNA病毒科,禽肝病毒屬,主要引起1³周齡雛鴨發(fā)生鴨病毒性肝炎（Duck viral hepatitis,DVH）,致死率高達(dá)90%。DHAV-1感染雛鴨后引起多個(gè)臟器的細(xì)胞發(fā)生凋亡,特別是肝臟細(xì)胞的大量急性凋亡與特征性肝臟出血性壞死,給養(yǎng)鴨業(yè)帶來巨大的經(jīng)濟(jì)損失。內(nèi)質(zhì)網(wǎng)（endoplasmic reticulum,ER）是真核細(xì)胞的蛋白工廠,主要負(fù)責(zé)蛋白的正確折疊與加工,也是病毒復(fù)制的主要場所之一。在病毒復(fù)制過程中,會(huì)產(chǎn)生大量的病毒蛋白,當(dāng)它們不能被正確的折疊修飾和及時(shí)輸出時(shí),可啟動(dòng)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng)（ER stress response,ERSR）,進(jìn)而誘導(dǎo)未折疊蛋白反應(yīng)（unfolded protein response,UPR）,恢復(fù)其穩(wěn)態(tài)。自噬發(fā)揮類似ERS的補(bǔ)充機(jī)制,可降解細(xì)胞中的蛋白質(zhì)和廢物等,維持穩(wěn)態(tài)的細(xì)胞過程。ERS在許多病毒感染中發(fā)揮作用,不僅與病毒增殖和細(xì)胞凋亡有關(guān),而且還可以調(diào)控細(xì)胞自噬水平。本研究主要針對(duì)DHAV-1感染后誘導(dǎo)的ERS及其介導(dǎo)的自噬、... 

【文章來源】：山東農(nóng)業(yè)大學(xué)山東省

【文章頁數(shù)】：168 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

ER的3條應(yīng)激通路(Shenetal.,2004)

山東農(nóng)業(yè)大學(xué)博士學(xué)位論文17圖1-2UPR分支圖及其與自噬的關(guān)系(Jhengetal.,2014)。Figure1-2UPRbranchmapanditsrelationshipwithautophagy注：紅色虛線箭頭表示由病毒感染引起的激活途徑的最終結(jié)果，例如細(xì)胞凋亡和自噬；而紅色實(shí)心箭頭表示UPR路徑Note:Reddashedarrowsindicatetheendresultsofactivationpathwayscausedbyviralinfections,suchasapoptosisandautophagy,whereasredsolidarrowindicatesUPRpathways研究表明通過基孔肯雅病毒（Chikungunyavirus,CHIKV）感染誘導(dǎo)的完全自噬誘導(dǎo)是由內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和氧化應(yīng)激途徑的獨(dú)立誘導(dǎo)介導(dǎo)的；敲低IRE1或使用ROS抑制劑N乙�；�-1-半胱氨酸抑制處理細(xì)胞也抑制自噬體的形成以及LC3-I向LC3-II的轉(zhuǎn)化，證明經(jīng)IRE1mRNA沉默和用N-乙�；�-1-半胱氨酸處理的細(xì)胞會(huì)抑制自噬體的形成（Joubertetal.,2012）。研究證實(shí)許多與UPR相關(guān)的轉(zhuǎn)錄因子調(diào)控Atg表達(dá)，ATF4的靶蛋白有LC3、Sequestosome1（p62/SQSTM）和ULK1（B"Chiretal.,2013;Milanietal.,2009;Pikeetal.,2013;Rouschopetal.,2010）；CHOP的靶蛋白有ATF5、LC3和p62/SQSTM1（B"Chiretal.,2013;Rouschopetal.,2010;Wangetal.,2014a）；ATF6的靶蛋白有死亡相關(guān)蛋白激酶1（DeathassociatedproteinKinase1,DAPK1）（Gadeetal.,2012）；C/EBPβ的靶蛋白有DAPK1、ATG4B和ULK1（Gadeetal.,2008;Guoetal.,2013;Maetal.,2011）；膽固醇調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白（Sterolregulatoryelement-bindingproteins,SREBP2）對(duì)應(yīng)的靶蛋白

DHAV-1感染誘導(dǎo)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng)的信號(hào)通路研究30分離。（6）數(shù)據(jù)庫搜索：運(yùn)用Maxquant(v1.5.2.8)對(duì)二級(jí)質(zhì)譜數(shù)據(jù)進(jìn)行檢索。（7）生物信息學(xué)分析：GO分析、蛋白結(jié)構(gòu)域、KEGG通路分析、亞細(xì)胞定位等。圖2-1蛋白質(zhì)組測(cè)序流程Figure2-1Procedureofproteomicssequencing2.3.1樣品制備2.3.1.1細(xì)胞樣品的準(zhǔn)備隨機(jī)制備并培養(yǎng)3批次DEF細(xì)胞，用10%完全培養(yǎng)基懸浮細(xì)胞并接種6cm細(xì)胞培養(yǎng)皿中，于37℃、5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，待細(xì)胞單層鋪滿達(dá)70%~90%左右，用PBS輕輕漂洗2次，加入病毒液（以感染復(fù)數(shù)（multiplicityofinfection,MOI）為2.0TCID50/細(xì)胞接種），37℃吸附2h，吸附結(jié)束后用PBS漂洗2次，換入2%的細(xì)胞維持液，繼續(xù)培養(yǎng)。同時(shí)，設(shè)不接種病毒的細(xì)胞組為陰性對(duì)照，其他處理同病毒感染組。感染48h時(shí)，分別收集DHAV-1感染組（簡稱為D）和未感染的DEF細(xì)胞(簡稱為N)。每組設(shè)立3個(gè)生物學(xué)重復(fù)。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Coxsackievirus B3 Infection Triggers Autophagy through 3 Pathways of Endoplasmic Reticulum Stress[J]. LUO Xiao Nuan,YAO Hai Lan,SONG Juan,SONG Qin Qin,SHI Bing Tian,XIA Dong,HAN Jun.  Biomedical and Environmental Sciences. 2018(12)
[2]鴨甲型肝炎病毒1型抗體CLEIA檢測(cè)方法的建立[J]. 銀鳳桂,侯力丹,魏艷秋,楊寶芝,李蕓,李晶,張爽,劉文軍,楊利敏.  中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2017(06)
[3]Caspase Family Proteases and Apoptosis[J]. Ting-Jun FAN Li-Hui HAN Ri-Shan CONG Jin LIANG College of Marine Life Sciences,Division of Life Science and Technology,Ocean University of China,Qingdao 266003,China;College of Chemistry & Chemical Engineering,Ocean University of China,Qingdao 266003,China.  Acta Biochimica et Biophysica Sinica. 2005(11)
[4]鴨肝炎病毒誘導(dǎo)雛鴨細(xì)胞凋亡的研究[J]. 陳志勝,王丙云,潘忠雄,蔡巧奕,顧萬軍.  中國獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2003(02)
[5]試驗(yàn)感染鴨病毒性肝炎雛鴨的組織病理學(xué)研究[J]. 胡薛英,程國富,周詩其,熊道煥.  華中農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào). 2000(01)
[6]鴨病毒性肝炎病毒細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)的研究[J]. 羅函祿,范文明,張菊英,劉建平.  江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué). 1996(06)
[7]鴨病毒性肝炎的研究——Ⅰ.鴨病毒性肝炎病毒的純化及電鏡觀察[J]. 羅函祿,徐漢祥,范文明,潘乃珍.  中國畜禽傳染病. 1990(03)

博士論文
[1]新型鴨肝炎病毒致病特性及感染鴨肝胰細(xì)胞凋亡的研究[D]. 胡薛英.中國農(nóng)業(yè)大學(xué) 2005



本文編號(hào)：3523187