前人研究表明,編碼磷脂酶A亞家族ⅠⅡ（pPLAⅢs）的基因影響生長素響應(yīng)。但是,這些基因如何影響植物和細(xì)胞形態(tài)建成并不清楚。為探明pPLAⅢδ在細(xì)胞形態(tài)發(fā)生及器官大小形成中的作用,及其與生長素調(diào)節(jié)的關(guān)系,我們利用擬南芥pPLAⅢδT-DNA突變體以及擬南芥和油菜過表達(dá)植株,系統(tǒng)研究了pPLAIIl6基因表達(dá)變化對植物形態(tài)學(xué)、細(xì)胞學(xué)、代謝產(chǎn)物及其它內(nèi)源基因表達(dá)的影響。主要研究結(jié)果如下：1、GUS染色結(jié)果和基因表達(dá)分析顯示pPLAⅢδ在多器官中表達(dá),但是,在根和幼嫩組織中表達(dá)水平相對較高。2、蛋白質(zhì)的亞細(xì)胞定位分析發(fā)現(xiàn)pPLAⅢδ定位于細(xì)胞膜上。3.pPLAⅢδ過表達(dá)植株表現(xiàn)出矮小、節(jié)間縮短增粗、葉片縮小變厚等表型,表明超量表達(dá)pPLAⅢδ能夠抑制植株器官的縱向生長、促進(jìn)橫向生長。4、與野生型相比,pPLAⅢδT-DNA插入突變體的下胚軸細(xì)胞顯著增長,而pPLAⅢδ過表達(dá)植物的下胚軸細(xì)胞變寬,葉片表皮的細(xì)胞極性降低。表明pPLAⅢδ參與細(xì)胞的形態(tài)發(fā)生。5、pPLAⅢδT-DNA插入突變體的下胚軸表型相似于乙烯的“三重反應(yīng)”。表達(dá)分析發(fā)現(xiàn),在兩個過表達(dá)株系中參與乙烯生物合成途徑的關(guān)鍵基因AC... 

【文章來源】：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)湖北省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：88 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
縮寫詞表
1 前言
    1.1 磷脂酶概述
        1.1.1 磷脂酶家族
        1.1.2 磷脂酶水解產(chǎn)物的功能
        1.1.3 磷脂酶的生理功能
    1.2 植物激素概述
        1.2.1 植物激素的種類
            1.2.1.1 生長素
            1.2.1.2 乙烯
            1.2.1.3 細(xì)胞分裂素
            1.2.1.4 脫落酸
            1.2.1.5 赤霉素
            1.2.1.6 其它激素
        1.2.2 植物激素的調(diào)節(jié)
        1.2.3 不同激素間的相互影響
    1.3 植物細(xì)胞形態(tài)建成概述
    1.4 磷脂酶和激素參與細(xì)胞的形態(tài)調(diào)控
    1.5 本研究的目的和意義
2 材料和方法
    2.1 實驗材料
        2.1.1 植物材料
        2.1.2 生化試劑
    2.2 試驗方法
        2.2.1 T-DNA純合突變體的鑒定
        2.2.2 遺傳表達(dá)載體的構(gòu)建
        2.2.3 農(nóng)桿菌介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化與陽性植株的篩選
            2.2.3.1 農(nóng)桿菌介導(dǎo)的擬南芥遺傳轉(zhuǎn)化
            2.2.3.2 轉(zhuǎn)基因種子篩選
        2.2.4 植物材料的種植
        2.2.5 RNA的抽提和反轉(zhuǎn)錄
            2.2.5.1 RNA的抽提
            2.2.5.2 反轉(zhuǎn)錄
        2.2.6 表達(dá)分析
        2.2.7 植株和器官的形態(tài)測量
        2.2.8 細(xì)胞學(xué)的觀察
            2.2.8.1 下胚軸和葉片的表皮細(xì)胞
            2.2.8.2 下胚軸和葉片橫切
        2.2.9 引物與測序分析
        2.2.10 數(shù)據(jù)分析
3 結(jié)果與分析
    3.1 pPLAⅢδ的表達(dá)模式分析
    3.2 pPLAⅢδ的亞細(xì)胞定位
    3.3 pPLAⅢδ對植株生長和器官大小的影響
    3.4 pPLAⅢδ影響下胚軸和表皮毛的細(xì)胞形態(tài)
    3.5 pPLAⅢδ影響葉片表皮細(xì)胞的極性
    3.6 pPLAⅢδ影響乙烯生物合成相關(guān)基因的表達(dá)
    3.7 pPLAⅢδ影響植株內(nèi)源生長素的分布
    3.8 pPLAⅢδ參與生長素的響應(yīng)
    3.9 pPLAⅢδ突變體中參與生長素響應(yīng)和細(xì)胞形態(tài)建成相關(guān)基因的表達(dá)變化
    3.10 pPLAⅢδ表達(dá)變化顯著改變PA含量
    3.11 油菜pPLAⅢδ同源基因的克隆及序列比較
4 討論
    4.1 pPLAⅢδ的表達(dá)改變導(dǎo)致不同的生長素響應(yīng)表型
    4.2 pPLAⅢδ參與生長素依賴的極性細(xì)胞生長
    4.3 pPLAⅢδ參與植物生長素響應(yīng)的調(diào)節(jié)
    4.4 pPLAⅢδ通過調(diào)節(jié)PA響應(yīng)生長素刺激
參考文獻(xiàn)
附錄
    附錄1
    附錄2
    附錄3 主要試劑的配制
    附錄4 載體構(gòu)建程序
    附錄5 作者在讀期間發(fā)表的論文
致謝



本文編號：3516321