發(fā)布時(shí)間：2021-11-06 15:44

　　類胡蘿卜素為以多個(gè)共軛的碳碳雙鍵為生色系骨架的脂肪族或脂環(huán)族類型化合物,是由植物和微生物合成的一大類色素,因具有多種醫(yī)學(xué)生物學(xué)功能而廣受關(guān)注。西瓜（Citrullus lanatus）屬于大眾化水果之一,瓜瓤所具有的紅、粉紅、黃、白等瓤色是由類胡蘿卜素組成與含量的差異所致的,研究西瓜類胡蘿卜素生物合成積累代謝,并進(jìn)行遺傳操作,探討其抗腫瘤作用,可為西瓜類胡蘿卜素的開發(fā)利用,進(jìn)行西瓜營(yíng)養(yǎng)育種和種質(zhì)創(chuàng)新提供依據(jù)。本課題從基因水平上分析西瓜果實(shí)類胡蘿卜素合成代謝的調(diào)控機(jī)制,并建立農(nóng)桿菌介導(dǎo)的西瓜遺傳轉(zhuǎn)化體系,試圖通過(guò)轉(zhuǎn)基因技術(shù)對(duì)西瓜果實(shí)類胡蘿卜素的成分進(jìn)行改良。此外,本課題還對(duì)番茄紅素和β-胡蘿卜素抗腫瘤作用的分子機(jī)制進(jìn)行研究。主要內(nèi)容如下:利用RT-PCR和RACE技術(shù)從西瓜果實(shí)中分離獲得牻牛兒基牻牛兒基焦磷酸合成酶基因GGPS和八氫番茄紅素合成酶基因PSY的c DNA全長(zhǎng)序列,并通過(guò)生物信息學(xué)方法對(duì)其核酸及推導(dǎo)的氨基酸序列進(jìn)行分析。結(jié)果顯示,（1）西瓜GGPS基因c DNA序列全長(zhǎng)1,445 bp（Gen Bank登錄號(hào):KF914758）,開放閱讀框?yàn)?,092 bp,編碼363個(gè)氨基... 

【文章來(lái)源】：鄭州大學(xué)河南省 211工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：126 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
中文摘要
ABSTRACT
1 引言
    1.1 類胡蘿卜素概述
    1.2 植物中類胡蘿卜素的功能
    1.3 植物類胡蘿卜素的生物合成
        1.3.1 植物類胡蘿卜素的合成途徑
        1.3.2 植物類胡蘿卜素的合成調(diào)控
        1.3.3 植物類胡蘿卜素的基因工程
    1.4 西瓜果實(shí)類胡蘿卜素的研究進(jìn)展
    1.5 本課題的立題依據(jù)及研究?jī)?nèi)容
        1.5.1 立題依據(jù)
        1.5.2 研究?jī)?nèi)容
2 西瓜GGPS和PSY基因全長(zhǎng)CDNA的克隆與序列分析
    2.1 引言
    2.2 實(shí)驗(yàn)材料
        2.2.1 植物材料、菌株及質(zhì)粒
        2.2.2 工具酶及生化試劑
    2.3 實(shí)驗(yàn)方法
        2.3.1 果實(shí)總RNA提取與cDNA合成
        2.3.2 保守序列的擴(kuò)增
        2.3.3 5‘端和 3‘序列的擴(kuò)增
        2.3.4 全長(zhǎng)序列的擴(kuò)增
        2.3.5 序列分析
    2.4 結(jié)果與分析
        2.4.1 果實(shí)總RNA的提取
        2.4.2 GGPS基因全長(zhǎng)的克隆
        2.4.3 GGPS核酸與氨基酸序列分析
        2.4.4 PSY基因全長(zhǎng)的克隆
        2.4.5 PSY核酸與氨基酸序列分析
    2.5 小結(jié)
3 西瓜果實(shí)發(fā)育過(guò)程中類胡蘿卜素的組成與其代謝相關(guān)酶基因的表達(dá)
    3.1 引言
    3.2 實(shí)驗(yàn)材料
        3.2.1 植物材料
        3.2.2 工具酶及生化試劑
    3.3 實(shí)驗(yàn)方法
        3.3.1 果實(shí)瓤色的檢測(cè)
        3.3.2 果實(shí)類胡蘿卜素的提取
        3.3.3 類胡蘿卜素的HPLC檢測(cè)
        3.3.4 果實(shí)總RNA提取與cDNA合成
        3.3.5 熒光定量PCR引物設(shè)計(jì)
        3.3.6 熒光定量PCR反應(yīng)
        3.3.7 數(shù)據(jù)分析
    3.4 結(jié)果與分析
        3.4.1 果實(shí)發(fā)育過(guò)程中瓤色的變化
        3.4.2 果實(shí)發(fā)育過(guò)程中類胡蘿卜素的組成
        3.4.3 果實(shí)發(fā)育過(guò)程中類胡蘿卜素代謝相關(guān)酶基因的表達(dá)
        3.4.4 類胡蘿卜素含量與其代謝相關(guān)酶基因表達(dá)量的相關(guān)性分析
    3.5 討論
    3.6 小結(jié)
4 類胡蘿卜素合成酶基因果實(shí)特異性表達(dá)載體的構(gòu)建
    4.1 引言
    4.2 實(shí)驗(yàn)材料
        4.2.1 植物材料、菌株及質(zhì)粒
        4.2.2 工具酶及生化試劑
        4.2.3 培養(yǎng)基及主要試劑
        4.2.4 PCR引物
    4.3 實(shí)驗(yàn)方法
        4.3.1 果實(shí)基因組DNA提取
        4.3.2 果實(shí)總RNA提取與cDNA合成
        4.3.3 PCR擴(kuò)增
        4.3.4 DNA酶切與連接
        4.3.5 重組表達(dá)載體轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌
    4.4 結(jié)果與分析
        4.4.1 重組載體pAGPL1 的構(gòu)建
        4.4.2 重組表達(dá)載體pAGPL1-GGPS的構(gòu)建
        4.4.3 重組表達(dá)載體pAGPL1-PSY的構(gòu)建
        4.4.4 重組表達(dá)載體pAGPL1-LCYB的構(gòu)建
        4.4.5 重組表達(dá)載體轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌
    4.5 討論
    4.6 小結(jié)
5 農(nóng)桿菌介導(dǎo)GGPS基因?qū)ξ鞴系倪z傳轉(zhuǎn)化
    5.1 引言
    5.2 實(shí)驗(yàn)材料
        5.2.1 植物材料及菌株
        5.2.2 培養(yǎng)基及主要試劑
    5.3 實(shí)驗(yàn)方法
        5.3.1 西瓜子葉體外再生體系的建立
        5.3.2 農(nóng)桿菌介導(dǎo)西瓜遺傳轉(zhuǎn)化體系的建立
        5.3.3 抗性苗的分子鑒定
    5.4 結(jié)果與分析
        5.4.1 西瓜子葉體外再生體系的建立
        5.4.2 農(nóng)桿菌介導(dǎo)西瓜遺傳轉(zhuǎn)化體系的建立
        5.4.3 抗性苗的分子鑒定
    5.5 討論
        5.5.1 西瓜子葉體外再生體系
        5.5.2 農(nóng)桿菌介導(dǎo)西瓜遺傳轉(zhuǎn)化體系
    5.6 小結(jié)
6 番茄紅素和β-胡蘿卜素對(duì)癌細(xì)胞的作用及其機(jī)制
    6.1 引言
    6.2 實(shí)驗(yàn)材料
        6.2.1 細(xì)胞材料
        6.2.2 抗體及生化試劑
        6.2.3 培養(yǎng)基及主要試劑
    6.3 實(shí)驗(yàn)方法
        6.3.1 MTT法檢測(cè)細(xì)胞活力
        6.3.2 Western Blotting檢測(cè)蛋白表達(dá)
        6.3.3 數(shù)據(jù)分析
    6.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        6.4.1 番茄紅素和 β-胡蘿卜素對(duì)癌細(xì)胞增殖的影響
        6.4.2 番茄紅素和 β-胡蘿卜素對(duì)經(jīng)GW9662 預(yù)處理細(xì)胞增殖的影響
        6.4.3 番茄紅素和 β-胡蘿卜素對(duì)PPARγ 表達(dá)的影響
        6.4.4 番茄紅素和 β-胡蘿卜素對(duì)p21WAF1/CIP1、Cyclin D1 和Cox-2 表達(dá)的影響
    6.5 討論
    6.6 小結(jié)
7 結(jié)論與展望
    7.1 結(jié)論
    7.2 創(chuàng)新之處
    7.3 研究展望
參考文獻(xiàn)
附錄
個(gè)人簡(jiǎn)歷和文章發(fā)表情況
致謝



本文編號(hào)：3480097