目的1.明確NQO1抑制劑DIC對HBV轉(zhuǎn)錄復(fù)制的調(diào)控作用。2.解析NQO1調(diào)控HBx蛋白穩(wěn)定性的分子機(jī)制。3.闡明NQO1穩(wěn)定HBx蛋白對ccc DNA轉(zhuǎn)錄和HBV復(fù)制過程的重要作用。4.探究NQO1/HBx調(diào)控ccc DNA轉(zhuǎn)錄的分子機(jī)制。5.體內(nèi)實(shí)驗(yàn)充分評估NQO1抑制劑DIC的抗HBV效能。方法1.利用Nano-Glo?Hi Bi T Lytic Detection System評估NQO1抑制劑DIC對病毒蛋白HBx表達(dá)水平的調(diào)控作用;Western blot檢測DIC對外源性和內(nèi)源性HBx蛋白水平的影響。2.在HBV感染的Hep G2-NTCP中,使用不同濃度的DIC處理細(xì)胞:real-time PCR（RT-PCR）檢測total HBV RNAs和pg RNA的水平;Northern blot檢測HBV 3.5-kb和2.1/2.4-kb RNA水平;Quantitative real-time PCR（q RT-PCR）檢測HBV ccc DNA水平。3.在Hep G2細(xì)胞中敲減/敲除或過表達(dá)NQO1,共轉(zhuǎn)染HBx:Western blot和RT-PCR檢測HBx蛋白... 

【文章來源】：重慶醫(yī)科大學(xué)重慶市

【文章頁數(shù)】：139 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

HiBiT裂解檢測系統(tǒng)檢測DIC對HiBiT-HBx表達(dá)的影響

Westernblot檢測DIC對外源性HBx表達(dá)的影響

重慶醫(yī)科大學(xué)博士研究生學(xué)位論文41于96孔板后，使用不同濃度的Dicoumarol(DIC)處理細(xì)胞72h，MTT實(shí)驗(yàn)檢測DIC對細(xì)胞活性的影響。結(jié)果顯示，與對照組比較，DIC的CC50均大于400μM；且在HepG2-NTCP、HepAD38和HepG2等3種細(xì)胞中CC50大于800μM，以上結(jié)果說明DIC的細(xì)胞毒性較�。▓D1.2）。圖1.2MTT實(shí)驗(yàn)檢測DIC對細(xì)胞活性的影響Figure1.2EffectsofDIConcellviabilityweredeterminedbyMTTassay.2.2Dicoumarol對HBx表達(dá)的影響2.2.1Dicoumarol對外源性HBx表達(dá)的影響為了進(jìn)一步探究DIC對HBx表達(dá)的影響，我們接下來在HepG2細(xì)胞中分別轉(zhuǎn)染了3×Flag-HBx和2×HA-HBx后，采用不同濃度的DIC處理，westernblot檢測HBx蛋白水平發(fā)現(xiàn)，DIC可顯著抑制外源性HBx蛋白的表達(dá)（圖1.3）。圖1.3Westernblot檢測DIC對外源性HBx表達(dá)的影響Figure1.3TheeffectofDIContheexpressionlevelofexogenousHBxwasdeterminedbyusingwesternblot.

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號：3335659