極端環(huán)境下生存的生物,經(jīng)過長期的適應(yīng)及進(jìn)化,其必然具有獨(dú)特的抗性物質(zhì)及代謝途徑。臘梅能在低于冰點(diǎn)的低溫條件下開花,預(yù)示著臘梅花中必含有使其適于在低溫下生存的物質(zhì)。LEA蛋白的超量表達(dá)可能與臘梅的低溫抗性有關(guān)。利用本實(shí)驗(yàn)室已經(jīng)構(gòu)建好的臘梅花c DNA文庫,成功克隆出了1個(gè)LEA基因。Cp LEA5（Gene bank登錄號:KT727031）。隨后將這個(gè)基因在原核和真核生物轉(zhuǎn)化體系中表達(dá),測定了表達(dá)出來的蛋白的抗凍活性。本實(shí)驗(yàn)通過低溫對大腸桿菌陽性克隆菌株和野生型菌株進(jìn)行處理,研究它們的生物活性以及細(xì)胞膜通透性。通過低溫脅迫,陽性克隆菌株存活率比空載菌株高約20%。通過電導(dǎo)率測定,陽性克隆菌株細(xì)胞膜損傷程度僅為空載菌株的55%,陽性克隆菌株細(xì)胞膜完整性遭到破壞的程度比空載菌株小,說明Cp LEA5基因能提高表達(dá)宿主菌的抗低溫能力。我們還構(gòu)建了植物表達(dá)載體p TEV7::Cp LEA5,利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)轉(zhuǎn)化技術(shù)對擬南芥進(jìn)行遺傳轉(zhuǎn)化,并進(jìn)行擬南芥陽性植株的篩選,得到預(yù)期的轉(zhuǎn)Cp LEA5基因擬南芥并對其進(jìn)行抗凍生物功能鑒定。在極端環(huán)境生長的微生物也具有抗性蛋白,使其在極短的環(huán)境下生長繁育.以本... 

【文章來源】：吉林大學(xué)吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：128 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
第1章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 研究目的及意義
    1.2 植物晚期胚胎豐富蛋白質(zhì)（LEA proteins）概述
        1.2.1 LEA蛋白質(zhì)的分類
        1.2.2 LEA蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)
        1.2.3 LEA蛋白的亞細(xì)胞定位
        1.2.4 LEA蛋白編碼基因的表達(dá)調(diào)控
        1.2.5 LEA蛋白的功能
        1.2.6 有關(guān)臘梅的研究
    1.3 核糖體蛋白（Ribosome Protein）概述
        1.3.1 核糖體的結(jié)構(gòu)與組成
        1.3.2 核糖體蛋白的核糖體外功能
        1.3.3 核糖體蛋白質(zhì)與腫瘤、先天性疾病的關(guān)系
        1.3.4 核糖體蛋白質(zhì)與植物抗逆境脅迫的關(guān)系
第2章 研究內(nèi)容
    2.1 臘梅晚期胚胎發(fā)生豐富蛋白CpLEA5的基因克隆及生物功能驗(yàn)證
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)材料與試劑
        2.1.2 實(shí)驗(yàn)方法
    2.2 嗜鹽曲霉核糖體蛋白AgS3aE的基因克隆及生物功能驗(yàn)證
        2.2.1 試劑與材料
        2.2.2 實(shí)驗(yàn)方法
第3章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    3.1 CpLEA5基因的克隆
    3.2 CpLEA5基因及蛋白的生物信息學(xué)分析
    3.3 CpLEA5基因的原核表達(dá)及其所表達(dá)蛋白抗凍活性測定
        3.3.1 CpLEA5基因原核表達(dá)載體的構(gòu)建及蛋白表達(dá)
        3.3.2 低溫脅迫后大腸桿菌細(xì)胞存活率的測定
        3.3.3 低溫脅迫后大腸桿菌細(xì)胞膜通透性測定
    3.4 CpLEA5基因在酵母中抗逆功能分析
        3.4.1 酵母表達(dá)載體pRUL129-CpLEA5的構(gòu)建
        3.4.2 不同逆境脅迫下酵母轉(zhuǎn)化子的抗性分析
    3.5 F233CpLEA5基因在植物中抗逆功能分析
        3.5.1 轉(zhuǎn)CpLEA5基因擬南芥植株的DNA鑒定
        3.5.2 轉(zhuǎn)CpLEA5基因的擬南芥植株的RT-PCR檢測
        3.5.3 轉(zhuǎn)CpLEA5基因的擬南芥Western blotting鑒定
        3.5.4 轉(zhuǎn)Cp LEA5基因擬南芥的生物功能分析
    3.6 Ag RPS3aE基因的克隆及生物信息學(xué)分析
    3.7 Ag RPS3aE基因在稻瘟菌遺傳轉(zhuǎn)化中的應(yīng)用研究
    3.8 Ag RPS3aE在提高植物抗鹽性中的應(yīng)用研究
第4章 討論
結(jié)論
附： 蘿卜硫素制劑制備方法優(yōu)化
    第1章 文獻(xiàn)綜述
        1.1 植物次生代謝與逆境脅迫
        1.2 植物次生代謝產(chǎn)物的藥用價(jià)值
        1.3 硫代葡萄糖苷向異硫氰酸酯的轉(zhuǎn)化
        1.4 烹飪對硫代葡萄糖苷及異硫氰酸酯造成的損失
        1.5 蘿卜硫素的化學(xué)預(yù)防活性
        1.6 蘿卜硫素的吸收和代謝
    第2章 實(shí)驗(yàn)方法
        2.1 實(shí)驗(yàn)試劑與儀器
        2.2 試驗(yàn)方法
    第3章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.1 三種不同的青菜花芽制劑中蘿卜硫素（SF）和蘿卜硫苷的含量
        3.2 小鼠口服青菜花制劑后蘿卜硫素、蘿卜硫素-谷胱甘肽、蘿卜硫苷的藥代動(dòng)力學(xué)模型
        3.3 蘿卜硫素和蘿卜硫素-谷胱甘肽（SF-GSH）在組織中的分布
    第4章 討論
    結(jié)論
參考文獻(xiàn)
作者簡介及攻讀期間取得的科研成果
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]蠟梅胚胎晚期豐富蛋白基因CpLEA的克隆及表達(dá)分析[J]. 馬婧,孫文婷,王晶,眭順照,李名揚(yáng).  園藝學(xué)報(bào). 2014(08)
[2]基因組學(xué)在作物抗逆性研究中的新進(jìn)展[J]. 賈琪,吳名耀,梁康逕,孫新立,林文雄.  中國生態(tài)農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào). 2014(04)
[3]核糖體的結(jié)構(gòu)與功能研究[J]. 楊品紅,王志陶,王志勇.  安徽農(nóng)業(yè)科學(xué). 2011(06)
[4]大慶黑魚泡水源浮游植物初步調(diào)查及魚產(chǎn)力估計(jì)[J]. 袁改霞,肖榮欣,王輝,梁彥濤,尤鳳麗,張虹,馮偉,卞立紅.  中國農(nóng)學(xué)通報(bào). 2010(07)
[5]作物分子生態(tài)學(xué)研究與展望[J]. 陳婷,林文雄,熊君,沈荔花,王經(jīng)源,林瑞余,李兆偉,李振方.  中國生態(tài)農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào). 2008(04)
[6]極端微生物研究進(jìn)展[J]. 趙春杰,呂耀龍,馬玉玲.  內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版). 2008(01)
[7]植物抗逆機(jī)制與基因工程研究進(jìn)展[J]. 高銀.  內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)科技. 2007(05)
[8]Discovery and development of sulforaphane as a cancer chemopreventive phytochemical[J]. Yuesheng ZHANG~2,Li TANGDepartment of Cancer Prevention and Control,Roswell Park Cancer Institute,Buffalo,New York 14263,USA.  Acta Pharmacologica Sinica. 2007(09)
[9]植物次生代謝及其與環(huán)境的關(guān)系[J]. 閻秀峰,王洋,李一蒙.  生態(tài)學(xué)報(bào). 2007(06)
[10]鹽脅迫下植物基因的表達(dá)與基因工程研究進(jìn)展[J]. 張改娜,何濤,王學(xué)仁,賈敬芬.  武漢植物學(xué)研究. 2005(02)



本文編號：3088493