植物內(nèi)生真菌和毛殼屬真菌是具有高度多樣性的微生物資源,可以產(chǎn)生多種多樣結(jié)構(gòu)新穎的次級(jí)代謝產(chǎn)物,而且這些代謝產(chǎn)物大多具有抗氧化、抗腫瘤、抗菌、降血糖、免疫抑制、抗病毒等多種生物活性,目前已經(jīng)成為發(fā)現(xiàn)新的天然活性物質(zhì)的重要來源。因此,本文選取了植物內(nèi)生真菌和毛殼屬真菌作為研究對(duì)象,對(duì)其次級(jí)代謝產(chǎn)物的分離純化、鑒定以及生物活性等方面進(jìn)行了研究。首先,采用組織分離法從13種植物的果實(shí)、葉、莖等29個(gè)部位中選擇性地分離純化得到了20株內(nèi)生真菌。運(yùn)用分子學(xué)手段,對(duì)20株真菌的28S r DNA序列進(jìn)行了測(cè)定,在BLAST上與其同源性高的序列進(jìn)行比對(duì),并結(jié)合聚類分析和菌落形態(tài)顏色的觀察,鑒定其中16株內(nèi)生真菌為Cladosporium sp.,Paramicrothyrium chinensis,Mycosphaerella sp.H41b4,Eupenicillium sp.NF2_PD013,Colletotrichum boninense,Corynespora torulosa,Sarocladium bacillisporum,Colletotrichum sp.,Pestalotiopsis sp.,Guignardia mangiferae,Phoma minor,Pseudocercospora nephrolepidicola,Collembolispora barbata,Alternaria sp.,Corynespora cassiicola和Glomerella acutata;另外3株真菌為Fungal sp.F185(JQ747675.1)、Fungal endophyte(KF435931.1)和Fungus clone Alb_O_Aug F04(GU174372.1),為不常見真菌;還有內(nèi)生真菌ZSY-1為本實(shí)驗(yàn)分離得到的一株新菌株。對(duì)分離得到的20株植物內(nèi)生真菌和購(gòu)買的5株毛殼屬真菌的次級(jí)代謝產(chǎn)物情況和表觀遺傳試劑煙酰胺(NA)和辛二酰二異羥肟酸(SBHA)對(duì)其次級(jí)代謝產(chǎn)物的影響進(jìn)行了研究。各個(gè)真菌分別在不添加試劑、添加NA 50μmol/L、NA 100μmol/L、SBHA 100μmol/L和SBHA 500μmol/L五種條件下培養(yǎng)。收集得到培養(yǎng)液粗提物,經(jīng)過高效液相色譜(HPLC)和質(zhì)譜(MS)分析,結(jié)果表明植物內(nèi)生真菌ZYHY、HGZJ和毛殼屬真菌Chaetomium piluliferoides的次級(jí)代謝產(chǎn)物非常豐富,表觀遺傳試劑NA和SBHA對(duì)大部分真菌的次級(jí)代謝產(chǎn)物合成有影響,其中NA 50μmol/L對(duì)菌株HGZJ和Chaetomium piluliferoides的次級(jí)代謝產(chǎn)物的影響顯著。另外,還初步探究了細(xì)菌脂多糖(LPS)對(duì)植物內(nèi)生真菌ZYHY和HGZJ的次級(jí)代謝產(chǎn)物的影響,結(jié)果表明LPS能明顯改變這兩株真菌的次級(jí)代謝產(chǎn)物譜。運(yùn)用硅膠柱色譜、薄層色譜、Sephadex LH-20凝膠色譜和HPLC等多種色譜分離技術(shù)對(duì)菌株ZYHY、HGZJ和Chaetomium piluliferoides的培養(yǎng)液粗提物進(jìn)行了分離純化,共分離得到15個(gè)化合物,并借助核磁共振(NMR)和MS等波譜手段對(duì)其結(jié)構(gòu)進(jìn)行了鑒定,其中9個(gè)為新化合物。從菌株ZYHY的次級(jí)代謝產(chǎn)物中分離得到4個(gè)已知化合物,分別為geodin,dihydrogeodin,3’-chlorotrypacidin和monochlorosulochrin,均含有氯元素。從菌株HGZJ的次級(jí)代謝產(chǎn)物中分離得到5個(gè)新化合物HGZJ-1、HGZJ-2、HGZJ-3、HGZJ-5、HGZJ-6和1個(gè)已知化合物ambuic acid。從菌株Chaetomium piluliferoides的次級(jí)代謝產(chǎn)物中分離得到4個(gè)新化合物CPIL-1、CPIL-3、CPIL-4、CPIL-5和1個(gè)已知化合物Chaetophenol A。同時(shí),還測(cè)定了化合物CPIL-3和CPIL-4的比旋光度,分別為0和-63.5。利用Mosher法和VCD法測(cè)定了化合物CPIL-4的絕對(duì)構(gòu)型,其C-2處的絕對(duì)構(gòu)型為S,C-3處的絕對(duì)構(gòu)型為R。對(duì)分離得到的化合物進(jìn)行了抗氧化、抗癌和抗肝損傷等生物活性的初步評(píng)定。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,化合物geodin和CPIL-3具有明顯的DPPH自由基清除能力�；衔飃eodin,dihydrogeodin,3’-chlorotrypacidin,monochlorosulochrin,CPIL-4和Chaetophenol A對(duì)MCF-7細(xì)胞有明顯的增殖抑制作用;化合物HGZJ-1,HGZJ-2,CPIL-1和CPIL-3對(duì)MCF-7細(xì)胞有一定的增殖抑制作用�；衔飃eodin,3’-chlorotrypacidin和Chaetophenol A對(duì)Hep G2細(xì)胞有明顯的增殖抑制作用;化合物dihydrogeodin,monochlorosulochrin,HGZJ-1,HGZJ-2,CPIL-1和CPIL-3對(duì)Hep G2細(xì)胞有一定的增殖抑制作用;化合物CPIL-4在低濃度時(shí)促進(jìn)Hep G2細(xì)胞的增殖,高濃度時(shí)抑制Hep G2細(xì)胞的增殖�；衔顲PIL-5和低濃度的dihydrogeodin,monochlorosulochrin對(duì)CCl4造成的肝細(xì)胞損傷有一定的保護(hù)作用。
【學(xué)位單位】：華南理工大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位年份】：2015
【中圖分類】：Q936

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2817644