本文關(guān)鍵詞：尋找新的組蛋白賴氨酸去甲基化酶和甲基化賴氨酸識(shí)別蛋白，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：組蛋白賴氨酸甲基化修飾是“組蛋白密碼”假說的重要組成部分,在生物體的生命活動(dòng)中扮演著重要功能。組蛋白賴氨酸甲基化是由賴氨酸甲基轉(zhuǎn)移酶催化SAM產(chǎn)生,由甲基化賴氨酸識(shí)別蛋白與其結(jié)合體現(xiàn)其功能,也能夠由組蛋白去甲基化酶將其移除。目前還有多個(gè)組蛋白甲基化位點(diǎn)對應(yīng)的去甲基化酶沒有被發(fā)現(xiàn),而發(fā)現(xiàn)新的組蛋白甲基化賴氨酸識(shí)別蛋白有助于更深入理解組蛋白甲基化的生物學(xué)功能。在本研究的第一部分中,我們嘗試尋找新的組蛋白賴氨酸去甲基化酶。我們發(fā)現(xiàn),在體外的GST pull-down實(shí)驗(yàn)中,AlkB家族蛋白質(zhì)ALKBH7能夠結(jié)合組蛋白,并且能夠在以組蛋白為底物的去甲基化實(shí)驗(yàn)中減弱H4K20me2的抗體信號(hào),但該活性相當(dāng)微弱,我們的多種嘗試均不能使其增強(qiáng)。該結(jié)果沒能在以H4K20me2甲基化多肽為底物的質(zhì)譜實(shí)驗(yàn)中得到確證。我們接著通過免疫熒光和細(xì)胞組份分離實(shí)驗(yàn)表明,ALKBH7定位于線粒體。免疫沉淀-質(zhì)譜實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示ALKBH7同JDUFS3等多個(gè)蛋白相互作用。根據(jù)最近報(bào)道的ALKBH7的晶體結(jié)構(gòu)與脯氨酸羥化酶PHD2的相似性,我們設(shè)計(jì)了多條多肽,通過質(zhì)譜技術(shù)尋找ALKBH7的底物,但皆未能得到陽性結(jié)果。在本研究的第二部分中,我們探索FMR1作為一個(gè)新的組蛋白甲基化賴氨酸識(shí)別蛋白的可能性。我們發(fā)現(xiàn),在體外的GST pull-down實(shí)驗(yàn)中,FMR1 N端能夠結(jié)合組蛋白,且該相互作用依賴于組蛋白的翻譯后修飾。但在隨后的peptide array, peptide pull-down等實(shí)驗(yàn)中,我們沒有能夠確定FMR1具體的結(jié)合位點(diǎn)。我們的免疫熒光和細(xì)胞組份分離實(shí)驗(yàn)表明,FMR1同細(xì)胞核存在緊密的聯(lián)系,但ChIP-cloning實(shí)驗(yàn)表明FMR1不與染色質(zhì)相互作用。我們同時(shí)發(fā)現(xiàn),當(dāng)FMRl被敲低時(shí),蛋白P55的水平發(fā)生了顯著上升,該現(xiàn)象可能為最近報(bào)道的FMR1敲低抑制yH2AX的生成提供了新的解釋。本研究的第三部分探索了純化的化學(xué)交聯(lián)的CD3-HER2雙特異性抗體在介導(dǎo)CIK細(xì)胞殺傷腫瘤細(xì)胞中的功能。我們發(fā)現(xiàn),該雙特異性抗體對CIK細(xì)胞毒性的增強(qiáng)于CIK的自發(fā)毒性相關(guān),當(dāng)CIK細(xì)胞自發(fā)毒性較弱時(shí),純化的雙特異性抗體能夠顯著增強(qiáng)其細(xì)胞毒性；而當(dāng)其自發(fā)毒性較強(qiáng)時(shí),純化的雙特異性抗體與化學(xué)交聯(lián)產(chǎn)生的粗品相比,不具有明顯差異。該部分作為博士階段完成的工作之一,一并附于此文中。
【關(guān)鍵詞】：組蛋白 賴氨酸甲基化 ALKBH7 FMR1 雙特異抗體
【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：Q55;Q51
【目錄】：

• 中文摘要4-5
• ABSTRACT5-7
• 縮寫詞表7-8
• 第一部分 尋找人類AlkB雙氧酶家族成員ALKBH7的底物8-38
• 一、研究背景8-16
• 二、實(shí)驗(yàn)結(jié)果16-36
• 三、討論36-38
• 第二部分 探索FMR1蛋白同組蛋白的相互作用38-56
• 一、研究背景38-44
• 二、實(shí)驗(yàn)結(jié)果44-53
• 三、討論53-56
• 第三部分 純化的anti-CD3×anti-HER2雙特異性抗體能夠顯著增強(qiáng)自發(fā)細(xì)胞毒性較弱的CIK細(xì)胞的殺傷能力56-65
• 一、研究背景56-57
• 二、實(shí)驗(yàn)結(jié)果57-63
• 三、討論63-65
• 第四部分：材料與方法65-106
• 一、第一部分中使用的實(shí)驗(yàn)方法65-83
• 二、第二部分中使用的實(shí)驗(yàn)方法83-89
• 三、第三部分中使用的實(shí)驗(yàn)方法89-94
• 四、實(shí)驗(yàn)材料來源94-98
• 五、實(shí)驗(yàn)試劑配制98-106
• 綜述：人類AlkB家族成員生物學(xué)功能的研究進(jìn)展106-112
• 參考文獻(xiàn)112-122
• 致謝122-123
• 博士期間發(fā)表文章123-

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 陳曉嘯;;以全系列、高品質(zhì)產(chǎn)品迎接國內(nèi)售后市場黃金期——訪天合汽車公司售后市場部門[J];汽車與配件;2010年20期

  本文關(guān)鍵詞：尋找新的組蛋白賴氨酸去甲基化酶和甲基化賴氨酸識(shí)別蛋白，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：267905