【摘要】：本文由兩部分工作組成,第一部分是對(duì)粟酒裂殖酵母DJ-1同源蛋白的功能進(jìn)行的研究,第二部分是對(duì)PPR蛋白(pentatricopeptide repeat proteins)的缺失引起的細(xì)胞絮凝與細(xì)胞凋亡的機(jī)制進(jìn)行的研究。帕金森病相關(guān)蛋白DJ-1參與了細(xì)胞中眾多不同的加工過(guò)程,包括羰基化合物的脫毒反應(yīng),細(xì)胞自噬以及氧化應(yīng)激等。DJ-1同源蛋白在生物界的分布非常的廣泛,它的眾多參與各種不同應(yīng)激反應(yīng)的同源蛋白共同組成了一個(gè)蛋白超家族。粟酒裂殖酵母(chizosaccharomyces pombe)含有六個(gè)DJ-1同源蛋白,我們將其分別命名為Hsp3101-Hsp3105和Sdj1。在本研究的前半部分工作中,我們對(duì)S. pombe的DJ-1同源蛋白的功能及其在穩(wěn)定期受到的調(diào)控進(jìn)行研究。本部分所開(kāi)展的工作和研究結(jié)果有：(1)通過(guò)檢測(cè)高表達(dá)酵母DJ-1同源基因?qū)σ吧蚐. pombe以及△Spglol的α-羰基化合物抗逆性影響,我們發(fā)現(xiàn)S. pombe的Hsp3101, Hsp3102以及Sdj1, S. cerevisiae的HSP31具有乙二醛酶Ⅲ的活性,高表達(dá)時(shí)能夠增強(qiáng)野生型S. pombe以及ASpglol應(yīng)對(duì)丙酮醛和乙二醛的能力。(2)通過(guò)Western blot技術(shù),我們檢測(cè)了hsp3101-hsp3105缺陷菌以及sdjl缺陷菌中CFP-Atg8的加工情況,同時(shí)利用熒光顯微鏡觀察了缺陷菌中GFP-Atg8在自噬體組裝位點(diǎn)(PAS)處的定位情況,我們發(fā)現(xiàn)S. pombe的Hsp3102,Hsp3104, Hsp3105和Sdj1蛋白與細(xì)胞的自噬反應(yīng)有關(guān)聯(lián),并且S. pombe所有的DJ-1同源蛋白都參與了Atg8蛋白在自噬體組裝位點(diǎn)PAS處的正常定位。(3)以slyl缺陷菌和atfl缺陷菌為載體,通過(guò)Western blot技術(shù)檢測(cè)S. pombe的DJ-1同源蛋白在穩(wěn)定期的豐度,發(fā)現(xiàn)穩(wěn)定期表達(dá)的S. pombe DJ-1同源蛋白在sty1缺陷菌和atf1缺陷菌的含量受到了明顯的影響,說(shuō)明S. pombe的DJ-1同源蛋白在穩(wěn)定期的表達(dá)受到了Styl和Atfl的調(diào)控。PPR蛋白是最近發(fā)現(xiàn)的一類(lèi)廣泛存在于真核生物界,調(diào)控線粒體和葉綠體基因表達(dá)的RNA結(jié)合蛋白。主要功能是參與細(xì)胞器RNA的剪接、編輯、切割、穩(wěn)定或者是調(diào)控其翻譯。在本研究中,我們發(fā)現(xiàn)敲除了S. pombe的ppr基因會(huì)導(dǎo)致缺陷菌出現(xiàn)細(xì)胞絮凝和細(xì)胞凋亡現(xiàn)象。通過(guò)qRT-PCR檢測(cè)缺陷菌的絮凝因子以及細(xì)胞壁重構(gòu)酶結(jié)構(gòu)基因的表達(dá)情況,發(fā)現(xiàn)ppr3, ppr4, ppr6, ppr10基因的缺失會(huì)導(dǎo)致部分絮凝因子以及細(xì)胞壁重構(gòu)酶的高表達(dá),進(jìn)而引起細(xì)胞出現(xiàn)絮凝表型。而通過(guò)存活率檢測(cè),結(jié)合細(xì)胞核的DAPI染色,線粒體染色以及對(duì)各個(gè)ppr缺陷菌的ROS檢測(cè),發(fā)現(xiàn)ppr3, ppr4, ppr6, ppr10基因的缺失會(huì)導(dǎo)致缺陷菌線粒體受損,細(xì)胞產(chǎn)生大量活性氧和過(guò)量的鐵離子進(jìn)而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)凋亡現(xiàn)象。
【圖文】：

圖１．２邋ｑＲＴ－ＰＣ民分析＆邋／ｗｗＡｅ的／ｗ如／口和吻／的表達(dá)［２７］逡逑－邋ｎ逡逑

圖１．５酵母宏自嗤的過(guò)程［５０］逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋１．５邋Ｔｈｅ邋ｐｒｏｃｅｓｓ邋ｏｆ邋ｍａｃｒｏａｕｔｏｐｈａｇｙ邋ｉｎ邋ｙｅａｓｔ［５０］逡逑．．
【學(xué)位授予單位】：南京師范大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：Q936

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本文編號(hào)：2577781