【摘要】：與A型流感病毒常引起世界大流行相比,B型流感病毒一般引起局部流行,嚴(yán)重情況下可致人死亡。作為一種重要的流行病病因,B型流感病毒的復(fù)制機(jī)理及免疫學(xué)特征仍有待于研究。病毒感染機(jī)體后,首先觸發(fā)機(jī)體的天然免疫應(yīng)答。細(xì)胞感染實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),在B型流感病毒感染早期,Ⅰ型和Ⅲ型干擾素、干擾素誘導(dǎo)基因以及前炎癥因子等細(xì)胞因子快速并且高水平表達(dá)。RIG-Ⅰ是細(xì)胞內(nèi)重要的RNA病毒核酸受體,利用CRISPR/Cas9技術(shù)敲除細(xì)胞內(nèi)RIG-Ⅰ基因以后,我們發(fā)現(xiàn)B型流感病毒感染后RIG-Ⅰ下游轉(zhuǎn)錄因子NF-κB、IRF3和STAT1的磷酸化水平及細(xì)胞因子表達(dá)量急劇下調(diào),顯示B型流感病毒誘導(dǎo)的細(xì)胞因子產(chǎn)生是RIG-Ⅰ通路依賴型。進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),B型流感病毒在感染早期促進(jìn)RIG-Ⅰ及其E3泛素連接酶TRIM25的線粒體定位,并且強(qiáng)烈誘導(dǎo)RIG-Ⅰ Lys63 (K63)連接的聚泛素化修飾。同時(shí),TRIM25與B型流感病毒NS1蛋白(NS1-B)N端RNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域(RBD)結(jié)合,與RIG-Ⅰ形成RIG-I/TRIM25/NS1-B復(fù)合物,阻止了NS1-B C端效應(yīng)結(jié)構(gòu)域(TED)對(duì)RIG-Ⅰ泛素化的抑制,從而保證RIG-Ⅰ能迅速發(fā)生泛素化修飾。綜上所述,在B型流感病毒感染早期,RIG-Ⅰ迅速發(fā)生調(diào)節(jié)性泛素化修飾,并定位于線粒體向下游傳導(dǎo)信號(hào),引起下游轉(zhuǎn)錄因子的活化,細(xì)胞因子大量產(chǎn)生。其中,TRM25發(fā)揮對(duì)信號(hào)通路的正向調(diào)節(jié)作用。B型流感病毒是由8條單負(fù)鏈RNA組成的囊膜病毒。其基因組共編碼13種蛋白,其中基質(zhì)蛋白M1(BM1)除了作為病毒結(jié)構(gòu)蛋白外,是否參與對(duì)病毒復(fù)制的調(diào)控尚不清楚。通過(guò)對(duì)BM1在B型流感病毒感染早期和晚期存在核質(zhì)穿梭現(xiàn)象的觀察,我們鑒定出BM1序列上存在兩個(gè)CRM1依賴的出核信號(hào)肽(NES)(3-14位氨基酸和124-133位氨基酸)和1個(gè)入核信號(hào)肽(NLS)(76-94位氨基酸),并找出了關(guān)鍵性的氨基酸位點(diǎn)。同時(shí)利用質(zhì)譜分析發(fā)現(xiàn)了BM1蛋白NLS存在2個(gè)位點(diǎn)的磷酸化修飾,即Thr80 (T80)和Ser84 (S84)。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn),T80和S84的磷酸化修飾促進(jìn)EGFP-NLS的入核,并促進(jìn)BM1與細(xì)胞核運(yùn)輸?shù)鞍譱mportinα1的結(jié)合。反向遺傳實(shí)驗(yàn)表明,突變BM1 NES、NLS關(guān)鍵氨基酸位點(diǎn)和磷酸化位點(diǎn)后,病毒無(wú)法進(jìn)行包裝,說(shuō)明這些位點(diǎn)在B型流感病毒復(fù)制過(guò)程中發(fā)揮著關(guān)鍵的作用。
[Abstract]:Compared with influenza A viruses, influenza B viruses usually cause local epidemics and death in severe cases. As an important epidemiological cause, the replication mechanism and immunological characteristics of influenza B virus remain to be studied. After the virus infects the body, first triggers the body's innate immune response. In the early stage of influenza B virus infection, cytokines such as interferon type I and type 鈪，

本文編號(hào)：2297221