擬南芥μ1銜接蛋白介導(dǎo)反式高爾基網(wǎng)絡(luò)和早期內(nèi)體上的蛋白分揀
本文選題:囊泡運(yùn)輸 + 銜接蛋白復(fù)合體; 參考:《山東農(nóng)業(yè)大學(xué)》2016年博士論文
【摘要】:植物細(xì)胞中存在著復(fù)雜的內(nèi)膜系統(tǒng),細(xì)胞內(nèi)蛋白的分揀發(fā)生在內(nèi)吞和分泌途徑中,反式高爾基網(wǎng)絡(luò)/早期內(nèi)吞小泡(TGN/EE)是內(nèi)吞途徑和分泌途徑的交匯點(diǎn)。在擬南芥中,TGN/EE是一個(gè)自主和高度動(dòng)態(tài)變化的細(xì)胞器,貨物蛋白到達(dá)了TGN/EE后,會(huì)在小囊泡上進(jìn)行進(jìn)一步的分揀。有一些會(huì)和PVC/MVB融合進(jìn)入液泡降解途徑,有一些會(huì)進(jìn)入分泌途徑而運(yùn)輸?shù)劫|(zhì)膜上。因此,TGN/EE是內(nèi)吞途徑和分泌途徑中至關(guān)重要的貨物分揀中心。胞內(nèi)蛋白的分揀依賴于貨物蛋白自身的分揀序列和識(shí)別這一序列的分子機(jī)制。銜接蛋白(AP)復(fù)合體在識(shí)別分揀序列的過程中起著至關(guān)重要的作用。銜接蛋白復(fù)合體是異源四聚體,包括兩個(gè)大亞基(γ和β),一個(gè)中間亞基(μ)和一個(gè)小亞基(σ)。其中中間亞基主要負(fù)責(zé)貨物的識(shí)別。在擬南芥中,最近Park和Teh等人鑒定了AP1復(fù)合體的μ亞基AP1M2的功能。AP1M2之前被命名為HAPLESS13(HAP13),它的突變體hap13表現(xiàn)出雄性不育的表型。最近的研究結(jié)果表明HAP13定位在TGN上并且可以和AP1復(fù)合體別的亞基相互作用,這證明了HAP13/AP1M2確實(shí)就是AP1的μ亞基。ap1m2-1是新發(fā)現(xiàn)的HAP13/AP1M2突變體,KNOLLE的定位在突變體中出現(xiàn)了異常從而導(dǎo)致了突變體細(xì)胞分裂的異常。但是,HAP13/AP1M2是否還參與別的生物學(xué)過程還不是很清楚。本論文的主要結(jié)果和結(jié)論如下:(1)HAP13參與了細(xì)胞的形態(tài)建成。為了研究HAP13在孢子體發(fā)育中的功能,我們利用新獲得的等位突變體hap13-1(ap1m2-1)來做研究,其還有部分的轉(zhuǎn)錄本編碼前面的229個(gè)氨基酸。hap13-1表現(xiàn)出多方面生長(zhǎng)發(fā)育的表型,植株矮小,主根變短,在土中很難完成成花轉(zhuǎn)變。葉片表皮細(xì)胞變小而且失去了七巧板狀的拼圖結(jié)構(gòu)。表皮毛分支數(shù)減少,大多數(shù)只有一個(gè)分支。根和下胚軸表皮細(xì)胞發(fā)育異常,呈現(xiàn)出鼓包狀。根毛細(xì)胞膨大或者很難起始發(fā)育。(2)HAP13參與后高爾基體的膜泡運(yùn)輸。為了探究HAP13參與哪些囊泡運(yùn)輸途徑,我們利用熒光染料FM4-64和BFA處理的方法檢測(cè)內(nèi)吞和囊泡運(yùn)輸?shù)倪^程。在hap13-1中,我們發(fā)現(xiàn)FM4-64的內(nèi)吞明顯增加,BFA處理后,突變體中仍然有很多FM4-64存在于BFA小體以外,BFA洗脫以后,突變體中的BFA小體仍然有部分殘留。(3)HAP13參與了調(diào)控生長(zhǎng)素信號(hào)途徑和類受體激酶信號(hào)途徑。為了進(jìn)一步研究HAP13參與的囊泡運(yùn)輸途徑,把HAP13可能的貨物連接上熒光蛋白,利用雜交的方法引入到突變體中,看這些貨物蛋白的亞細(xì)胞定位是否受到影響。生長(zhǎng)素外運(yùn)蛋白PIN2在質(zhì)膜上的不對(duì)稱定位受到了破壞,油菜素內(nèi)酯的受體BRI1在胞質(zhì)小囊泡中的定位明顯增加。BFA處理后,兩種蛋白在突變中都可以形成BFA小體。但是當(dāng)BFA洗脫以后,兩種蛋白在突變體中都仍然有部分殘留。(4)HAP13介導(dǎo)液泡融合的功能在進(jìn)化上保守。為了進(jìn)一步驗(yàn)證HAP13是AP1的中間亞基,我們利用擬南芥中的HAP13來互補(bǔ)酵母AP1的μ亞基突變體amp1-的表型,HAP13可以互補(bǔ)amp1-在滲透脅迫下液泡融合異常的表型。綜上所述,擬南芥μ1銜接蛋白對(duì)于TGN/EE上的蛋白分揀起著非常重要的作用。
[Abstract]:In Arabidopsis , TGN / EE is one of the most important goods sorting centers . ( 4 ) In order to further verify the phenotype of the mu - subunit mutant amp1 - of the yeast AP1 in the arabidopsis thaliana , in order to further verify the phenotype of the mu - subunit mutant amp1 - of the yeast AP1 in the arabidopsis thaliana , in order to further verify the phenotype of the mu - subunit mutant amp1 - of the yeast AP1 in the Arabidopsis thaliana , it is possible to complement amp1 - the phenotype of the vacuolar fusion abnormal under osmotic stress . In conclusion , the Arabidopsis . mu . 1 adaptor protein plays a very important role in protein sorting on TGN / EE .
【學(xué)位授予單位】:山東農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】:博士
【學(xué)位授予年份】:2016
【分類號(hào)】:Q943.2
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,本文編號(hào):2003323
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