本文關(guān)鍵詞：ICP4促進miR-101表達及miR-101調(diào)節(jié)HSV-1復(fù)制機制的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《天津醫(yī)科大學》 2015年

ICP4促進miR-101表達及miR-101調(diào)節(jié)HSV-1復(fù)制機制的研究

王相玲  

【摘要】：【目的】micro RNAs(mi RNAs)是一種內(nèi)源性18~26 nt的單鏈非編碼小分子RNA,在動植物體內(nèi)通過靶定編碼基因m RNA 3’UTR區(qū)域直接進行轉(zhuǎn)錄后調(diào)控從而發(fā)揮其基因表達調(diào)控功能。已有研究表明宿主細胞mi RNAs參與了病毒感染后的抗病毒免答效應(yīng),另一方面病毒感染還可引起宿主細胞內(nèi)mi RNAs的表達升高或降低,宿主細胞mi RNAs與病毒感染之間存在著密切的相關(guān)性。本項目前期實驗結(jié)果表明HSV-1感染He La細胞后mi R-101表達水平顯著升高,并且初步確定mi R-101通過直接靶定并下調(diào)COX2(Cyclooxygenase 2)和GRSF1(G-rich RNA sequence binding factor 1)可能對HSV-1的復(fù)制產(chǎn)生影響。成熟的mi R-101有兩個前體,為pre-mi R-101-1和pre-mi R-101-2,分別位于1號和9號染色體上,本實驗室前期工作證明HSV-1感染后mi R-101的表達水平升高,以pre-mi R-101-2來源為主。因此本文擬從HSV-1誘導(dǎo)hsa-mi R-101-2表達升高的現(xiàn)象出發(fā),深入研究HSV-1感染后宿主細胞hsa-mi R-101-2顯著升高的具體機制,以及mi R-101對HSV-1復(fù)制的具體調(diào)控作用機制,深入闡明宿主細胞mi RNA與HSV-1之間的相互作用關(guān)系�！痉椒ā勘疚闹饕獜腍SV-1感染后宿主細胞mi R-101顯著升高的具體機制,以及mi R-101對HSV-1復(fù)制的具體調(diào)控作用機制兩方面進行:1.首先通過雙熒光素酶報告系統(tǒng)實驗確定HSV-1對hsa-mi R-101-2啟動子的具體作用方式,確定導(dǎo)致hsa-mi R-101-2啟動子活性變化的HSV-1編碼的作用因子。然后通過q RT-PCR實驗檢測該作用因子對hsa-mi R-101-2及其宿主基因表達水平的影響,進一步確定該作用因子對hsa-mi R-101-2的具體調(diào)控方式。最后通過染色質(zhì)免疫共沉淀實驗,凝膠電泳遷移實驗確定作用因子是否作為轉(zhuǎn)錄因子與hsa-mi R-101-2啟動子發(fā)生直接或間接的相互作用。2.首先通過病毒滴定,免疫熒光,western blot等實驗進一步確定mi R-101的直接靶基因COX2和GRSF1對HSV-1復(fù)制的具體作用。然后通過q RT-PCR確定COX2對干擾素表達水平的影響;并通過western blot,RNA免疫共沉淀及凝膠電泳遷移實驗確定GRSF1促進HSV-1衣殼蛋白表達的具體作用方式,最終確定COX2和GRSF1影響HSV-1復(fù)制的具體分子途徑�！窘Y(jié)果】1.雙熒光素酶報告系統(tǒng)實驗結(jié)果表明HSV-1感染后,hsa-mi R-101-2啟動子活性顯著增強;2.雙熒光素酶報告系統(tǒng)實驗結(jié)果表明過表達HSV-1即刻早期蛋白ICP4可以促進hsa-mi R-101-2啟動子活性,q RT-PCR實驗結(jié)果顯示過表達ICP4可以促進hsa-mi R-101-2及其宿主基因的表達;3.染色質(zhì)免疫共沉淀實驗(Ch IP)及凝膠電泳遷移實驗(EMSA)結(jié)果表明ICP4可以直接結(jié)合hsa-mi R-101-2啟動子序列;4.病毒滴定實驗,免疫熒光實驗,western blot實驗結(jié)果表明GRSF1可以促進HSV-1復(fù)制,而COX2可以抑制HSV-1復(fù)制;5.qRT-PCR實驗結(jié)果表明COX2可以促進I/III型干擾素的表達;6.Western blot實驗結(jié)果表明GRSF1可以促進HSV-1衣殼蛋白p40的表達水平;7.RNA免疫共沉淀實驗及RNA凝膠電泳遷移實驗結(jié)果表明GRSF1可以與p40的m RNA直接結(jié)合�！窘Y(jié)論】通過對本課題的深入研究,具體可以得到以下3個結(jié)論:1、HSV-1通過其即刻早期蛋白ICP4誘導(dǎo)hsa-mi R-101-2的表達升高,ICP4可以直接結(jié)合hsa-mi R-101-2啟動子序列并作為轉(zhuǎn)錄因子激活其轉(zhuǎn)錄活性。2、mi R-101的直接靶基因COX2可以通過促進I/III型干擾素的表達從而抑制HSV-1的復(fù)制。3、mi R-101的直接靶基因GRSF1可以通過結(jié)合HSV-1衣殼蛋白p40的mRNA促進其翻譯表達,從而促進HSV-1的復(fù)制。

【關(guān)鍵詞】：
【學位授予單位】：天津醫(yī)科大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R373
【目錄】：

下載全文 更多同類文獻

CAJ全文下載

(如何獲取全文？ 歡迎：購買知網(wǎng)充值卡、在線充值、在線咨詢)

CAJViewer閱讀器支持CAJ、PDF文件格式

【共引文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前8條

1 Stella Chai;Stephanie Ma;;Clinical implications of microRNAs in liver cancer stem cells[J];癌癥(英文版);2013年08期

2 羅陽;韓子午;田男;;miRNA與常見肝病發(fā)生發(fā)展關(guān)系的研究進展[J];浙江中醫(yī)藥大學學報;2014年01期

3 趙福林;李宇寧;段招軍;;MicroRNA與病毒感染[J];病毒學報;2015年02期

4 范瑞琦;揭克敏;肖影群;劉卓琦;王蒙蒙;羅達亞;;microRNA在肝臟非可控病毒感染性炎性反應(yīng)惡性轉(zhuǎn)化過程中的作用[J];基礎(chǔ)醫(yī)學與臨床;2014年08期

5 張強;陳文;鄧存良;;microRNA在慢性乙型肝炎中作用研究進展[J];西南軍醫(yī);2015年03期

6 郭慶紅;龍巖君;蒲春文;王玉平;周永寧;;微小RNA在乙型肝炎病毒相關(guān)慢加急性肝衰竭中的研究進展[J];蘭州大學學報(醫(yī)學版);2015年04期

7 張榮花;王密斯;王琳;馮雪研;郝曉方;甄永占;李琳;陳靜;章廣玲;;賴氨大黃酸通過調(diào)控miRNA表達水平抑制HBV增殖[J];檢驗醫(yī)學與臨床;2015年19期

8 寧志強;束永前;;微小RNA-143在非小細胞肺癌中的表達及意義[J];江蘇醫(yī)藥;2015年15期

中國博士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 劉雪會;單核苷酸多態(tài)性和miRNA對CARM1基因表達的調(diào)控機制及其在冠心病中的作用研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學院;2013年

2 王曉君;miRNA-214通過靶向β-catenin通路抑制肝癌生長[D];福建醫(yī)科大學;2013年

3 宋廣忠;乙型肝炎重癥化過程中microRNA-210的改變及功能研究[D];浙江大學;2013年

4 范薇;鴨瘟病毒gD基因發(fā)現(xiàn)及重組蛋白應(yīng)用研究[D];四川農(nóng)業(yè)大學;2013年

5 陳文;HBV相關(guān)慢加急性肝衰竭患者表觀遺傳學變化研究[D];第三軍醫(yī)大學;2013年

6 李成林;miR-210抑制食管Eca109細胞生長的機制研究[D];河北醫(yī)科大學;2014年

7 霍威;miRNA調(diào)控TRAIL表達對前列腺癌細胞產(chǎn)生選擇性細胞毒作用[D];吉林大學;2014年

8 胡永艷;去乙�；窼IRT1基因表達及其多態(tài)性與冠心病的關(guān)聯(lián)研究和Chr6p21.32區(qū)域SNP rs9268402與冠心病發(fā)病機制的探索[D];北京協(xié)和醫(yī)學院;2014年

9 郭永燦;HBV CccDNA磁性捕獲雜交定量PCR方法的建立及應(yīng)用評價[D];重慶醫(yī)科大學;2014年

10 金曉馨;香葉醇抗胰腺癌作用及其機制的實驗研究[D];中南大學;2013年

【相似文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 況守龍;胡廷章;;啟動子的克隆和研究方法[J];重慶工學院學報(自然科學版);2007年01期

2 李志新;曹雙河;張相岐;張懷剛;;偽鵝觀草高分子量麥谷蛋白基因啟動子的克隆[J];長江大學學報(自科版)農(nóng)學卷;2007年02期

3 高剛;魯艷芹;韓金祥;趙麗;;雙啟動子對增強型綠色熒光蛋白表達的影響[J];中國生物制品學雜志;2009年10期

4 郝迪萩;趙琳;陳李淼;李文濱;;克隆啟動子方法的比較及應(yīng)用[J];東北農(nóng)業(yè)大學學報;2010年03期

5 張文燕;武栓虎;王敏強;;基于一致序列多樣性分析的啟動子預(yù)測方法[J];生物信息學;2012年03期

6 馮政;梅書棋;武華玉;彭先文;孫華;李良華;;動物啟動子的研究策略[J];河南農(nóng)業(yè)科學;2012年12期

7 杜小溪;高祥剛;陳潘海;汪洋;赫崇波;;魚類基因啟動子的研究進展[J];生物技術(shù)通報;2013年08期

8 謝迎秋,朱禎,劉玉樂,吳茜;一種新型雙向啟動子——棉花曲葉病毒啟動子的分離、序列分析與功能初探[J];高技術(shù)通訊;2000年04期

9 賈帥爭,呂麗萍,劉敏霞,詹林盛,王海平,王全立;小鼠白蛋白啟動子的組織特異性功能研究[J];生物技術(shù)通訊;2003年04期

10 吳志香;邵敬偉;袁鳳山;;胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白-1啟動子的克隆與序列分析[J];生物技術(shù)通訊;2005年06期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 徐昌杰;胡桂兵;張上隆;;果實成熟特異啟動子研究進展[A];中國園藝學會第五屆青年學術(shù)討論會論文集[C];2002年

2 蕭鳳回;段承俐;薛剛平;;快速檢測干旱和脫水可誘導(dǎo)植物啟動子瞬間表達特性的方法[A];中國遺傳學會七屆一次青年研討會暨上海高校模式生物E——研究院第一屆模式生物學術(shù)研討會論文匯編[C];2005年

3 龍海濤;李洪清;李玲;;藍豬兒捕獲啟動子系統(tǒng)建立[A];2006中國植物細胞發(fā)育與分子生物學學術(shù)研討會論文集[C];2006年

4 楊俊;劉繼紅;郭小林;王濤;王軍凱;陳美元;王少剛;葉章群;;人腎組織GGCX基因啟動子區(qū)克隆與活性分析[A];第十五屆全國泌尿外科學術(shù)會議論文集[C];2008年

5 馬小娟;侯林;陳曦;馬飛;;人類選擇性剪接基因與選擇性啟動子關(guān)聯(lián)的系統(tǒng)分析[A];“基因、進化與生理功能多樣性”海內(nèi)外學術(shù)研討會暨中國生理學會第七屆比較生理學學術(shù)會議論文摘要[C];2009年

6 陳慧峰;林育純;林麗娜;方飛;陳雯;林忠寧;;蛋白磷酸酶2A不同亞基基因啟動子區(qū)遺傳變異性位點篩查[A];遺傳學進步與人口健康高峰論壇論文集[C];2007年

7 李靜;劉學群;王春臺;;一個煙草葡糖基轉(zhuǎn)移酶基因啟動子的克隆與誘導(dǎo)表達[A];湖北省植物生理學會第十五次學術(shù)研討會論文集[C];2007年

8 呂杰;趙瑩子;黃玉屏;沈萍;陳向東;;嗜鹽古生菌Haloarcula hispanica淀粉酶基因啟動子的研究及其跨域表達載體的構(gòu)建[A];基因開啟未來：新時代的遺傳學與科技進步——湖北省遺傳學會第八次代表大會暨學術(shù)討論會論文摘要匯編[C];2009年

9 夏定國;張婷婷;趙巧玲;張國政;裘智勇;;家蠶脂肪酶Ⅰ基因的啟動子分析[A];第十屆家（柞）蠶遺傳育種及良種繁育學術(shù)研討會論文集[C];2013年

10 王小華;姜廣水;吳欽貞;姜萍萍;劉浩;江浩;;二價雙啟動子防齲DNA疫苗的構(gòu)建及鑒定[A];2007年第七次全國牙體牙髓病學學術(shù)會議論文集[C];2007年

中國重要報紙全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 記者　錢錚;[N];人民日報;2006年

2 錢錚;[N];醫(yī)藥經(jīng)濟報;2006年

3 ;[N];中國醫(yī)藥報;2003年

中國博士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 馬洪鑫;ZHX2調(diào)控脂蛋白脂酶參與脂肪肝及肝細胞肝癌的作用及機制研究[D];山東大學;2015年

2 宋劍平;基質(zhì)金屬蛋白酶-3基因啟動子區(qū)多態(tài)與散發(fā)性腦動靜脈畸形的遺傳易感性分析與功能研究[D];復(fù)旦大學;2014年

3 田媛;關(guān)于人腦膠質(zhì)瘤中miR-144/451啟動子區(qū)甲基化水平的實驗研究[D];天津醫(yī)科大學;2015年

4 王相玲;ICP4促進miR-101表達及miR-101調(diào)節(jié)HSV-1復(fù)制機制的研究[D];天津醫(yī)科大學;2015年

5 楊予濤;一個光合組織特異表達啟動子的克隆、功能分析及其轉(zhuǎn)錄因子的鑒定[D];山東農(nóng)業(yè)大學;2005年

6 楊曉敏;環(huán)加氧酶-2啟動子區(qū)抑制性結(jié)合蛋白的鑒定和功能分析[D];南京醫(yī)科大學;2007年

7 柳小慶;玉米胚特異性高表達啟動子的基因組規(guī)模篩選、克隆和功能鑒定[D];中國農(nóng)業(yè)科學院;2014年

8 李哲;釀酒酵母和大腸桿菌的啟動子特性及其代謝工程應(yīng)用研究[D];北京理工大學;2015年

9 陸超;人CD2AP基因啟動子的鑒定及其功能研究[D];南京醫(yī)科大學;2010年

10 宋斐;胚乳特異性ALP type-B基因啟動子的克隆及其功能分析[D];華中科技大學;2012年

中國碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 余霜;家蠶血細胞特異啟動子的篩選與鑒定[D];西南大學;2015年

2 王璇;水曲柳節(jié)律基因LHY啟動子克隆及功能研究[D];東北林業(yè)大學;2015年

3 趙夏云;芥菜開花整合子SOC1的啟動子克隆及其與FLC、SVP蛋白相互作用[D];西南大學;2015年

4 張鑫平;擬南芥和油菜花藥特異表達啟動子的克隆與功能分析[D];華中農(nóng)業(yè)大學;2015年

5 于璐;受體相互作用蛋白激酶3轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)特性研究[D];蘇州大學;2015年

6 李玉姣;豬肝臟特異性TTR基因啟動子驅(qū)動扣囊復(fù)膜孢酵母菌BGL1基因在轉(zhuǎn)基因鼠中的表達驗證[D];華中農(nóng)業(yè)大學;2015年

7 郭凱慶;反向PCR精確定位人結(jié)腸癌SW480細胞CD133基因啟動子區(qū)脫氧核糖核酸酶Ⅰ高敏感位點[D];山西醫(yī)科大學;2015年

8 楊丹;大豆誘導(dǎo)型NAC轉(zhuǎn)錄因子基因啟動子克隆及功能研究[D];山東大學;2015年

9 李杰;楊樹木質(zhì)部特異性啟動子的功能及JCesAP關(guān)鍵調(diào)控域研究[D];河北農(nóng)業(yè)大學;2015年

10 汪澤宇;c1orf109結(jié)合cyclin D1啟動子序列特征研究[D];哈爾濱工業(yè)大學;2015年

  本文關(guān)鍵詞：ICP4促進miR-101表達及miR-101調(diào)節(jié)HSV-1復(fù)制機制的研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：173750