本文關(guān)鍵詞：Hippo信號(hào)通路中TEAD蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)與功能研究　出處：《吉林大學(xué)》2016年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

  更多相關(guān)文章： Hippo TEAD 棕櫚�；� X射線晶體衍射 小分子抑制劑

【摘要】：TEA結(jié)構(gòu)域(TEAD)轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合共激活劑YAP和TAZ并且調(diào)節(jié)Hippo信號(hào)通路的轉(zhuǎn)錄輸出。TEAD蛋白質(zhì)在調(diào)控器官大小和腫瘤形成過(guò)程中起著非常重要的作用。蛋白質(zhì)的S型棕櫚�；揎棸岩粋�(gè)脂肪酸鹽—棕櫚酸鹽分子,附加到半胱氨酸殘基上,并且調(diào)控著蛋白質(zhì)的運(yùn)輸,膜定位和信號(hào)傳輸活動(dòng)�；诓豢赡娴淖貦磅＾D(zhuǎn)移酶(PATs)的抑制劑來(lái)構(gòu)建了可以使酶或自我棕櫚�；揎椀牡鞍踪|(zhì)的活性位點(diǎn)半胱氨酸烷基化的化學(xué)活性探針,2-bromopalmitate (2-BP)和cerulenin。我們合成了多加一個(gè)炔烴尾巴的2-BP和cerulenin的類似物。他們是可以用來(lái)共價(jià)標(biāo)記并指示PATs依賴或自我棕櫚酰化修飾的蛋白質(zhì)的生物正交化學(xué)指示器。通過(guò)蛋白質(zhì)組學(xué)和生物化學(xué)的研究,我們發(fā)現(xiàn)了人類TEAD蛋白質(zhì)擁有體內(nèi)的棕櫚酰酶活性,并且在在生理?xiàng)l件下可以對(duì)進(jìn)化上高度保守的半胱氨酸殘基進(jìn)行自我棕櫚酰化修飾。我們構(gòu)建、表達(dá)并純化了h TEAD2 YBD蛋白質(zhì),使蛋白質(zhì)結(jié)晶并通過(guò)X射線晶體衍射收集數(shù)據(jù)并進(jìn)行數(shù)據(jù)處理。我們發(fā)現(xiàn)該晶體實(shí)際上為結(jié)合有一個(gè)棕櫚酸鹽分子的TEAD復(fù)合體,即hTEAD2-PLM復(fù)合體并解析了該復(fù)合體的結(jié)構(gòu)(PDB: 5HGU),并且發(fā)現(xiàn)棕櫚酸的脂鏈插入到一個(gè)保守的高度疏水的口袋中并結(jié)合在hTEAD2 YBD的C380位點(diǎn)。這為TEAD找到了一個(gè)新的配體結(jié)合位點(diǎn)。TEADs的棕櫚酰化在調(diào)控Hippo信號(hào)通路的轉(zhuǎn)錄復(fù)合物中起著重要的作用。本課題的研究直接把自我棕櫚�；揎椇虷ippo信號(hào)通路的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)聯(lián)系起來(lái)。我們通過(guò)藥物篩選,找到了可以與TEAD蛋白質(zhì)結(jié)合的化學(xué)分子抑制劑氟芬那酸(flufenamic acid, FA)。為了找到FA與TEAD的結(jié)合位點(diǎn),我們首先使用浸泡的方法使FA分子進(jìn)入到hTEAD2-PLM復(fù)合物晶體中,通過(guò)X射線晶體衍射解析了hTEAD2-FA復(fù)合體的晶體結(jié)構(gòu)(PDB:5DQ8)并發(fā)現(xiàn)FA分子定位在TEAD YBD的中心疏水口袋中且與C380位點(diǎn)相結(jié)合。為了充分證明該結(jié)構(gòu)中額外電子密度來(lái)源于FA分子,我們構(gòu)建了FA分子的溴帶同源物Bromofenamic aid (BFA)。將BFA分子使用同樣的方法浸泡到hTEAD2-PLM復(fù)合物晶體中,解析了hTEAD2-FA復(fù)合體的結(jié)構(gòu)(PDB:5DQE)并通過(guò)差異電子密度圖確定了額外電子密度來(lái)源于BFA分子。在晶體結(jié)構(gòu)發(fā)現(xiàn)了FA/BFA也可以與C348位點(diǎn)結(jié)合。而FA/BFA與hTEAD2 YBD的結(jié)合位點(diǎn)恰好為hTEAD2 YBD棕櫚�；揎椢稽c(diǎn)(C380,C348),即]FA/BFA化學(xué)分子抑制了TEAD YBD的棕櫚酰化修飾。我們同時(shí)通過(guò)對(duì)TEAD2 YBD蛋白質(zhì)的棕櫚酰化位點(diǎn)(C348,C380)的Cto S突變檢測(cè)到TEAD與YAP親和力的減弱。也通過(guò)對(duì)位于TEAD YBD蛋白質(zhì)片段的疏水口袋開口處的丙氨酸的突變(A235,A304)而阻礙棕櫚酸鹽進(jìn)入疏水口袋中,從空間位阻角度減弱了TEAD與YAP的結(jié)合。這證明了抑制TEAD的棕櫚�；揎椏梢砸种芓EAD與YAP的結(jié)合。
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：Q51

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