本文關(guān)鍵詞：自噬促進(jìn)傳染性法氏囊病病毒釋放的作用機(jī)制研究　出處：《甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)》2017年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：傳染性法氏囊病是一種感染雛雞的免疫抑制性疾病,對世界范圍的養(yǎng)禽業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。其病原傳染性法氏囊病病毒(infectious bursal disease virus,IBDV)屬于雙RNA病毒科的禽雙RNA病毒屬。通過對病毒分子和細(xì)胞生物學(xué)、結(jié)構(gòu)和致病機(jī)制等的不斷研究,IBDV已成為該病毒科中的代表。因?yàn)閷ψ允稍陔pRNA病毒感染中的調(diào)控及功能了解相對較少,IBDV就成為理解這一調(diào)控機(jī)制的重要模型。禽雙RNA病毒的VP2可以在病毒感染的早期通過與受體復(fù)合物HSP90AA1的相互作用誘導(dǎo)AKT-mTOR的失活從而誘導(dǎo)自噬。但是,在IBDV感染的晚期,自噬流的誘導(dǎo)、調(diào)控及其與病毒相互作用的機(jī)制還需要進(jìn)一步的研究。雙RNA病毒家族的成員能夠?qū)⒉《净蚪M整合成一個復(fù)合體結(jié)構(gòu),被稱作“病毒工廠”,并定位于內(nèi)體系統(tǒng)組份膜結(jié)構(gòu)的胞質(zhì)面。而且,高爾基體在IBDV組裝過程中也發(fā)揮了重要的作用。但是病毒成熟與釋放的機(jī)制需要深入地研究。最近有研究證明水痘病毒的細(xì)胞外排結(jié)合利用了內(nèi)體系統(tǒng)和自噬路徑。因此,在本論文的研究中,我們從宿主的角度出發(fā)嘗試研究自噬在IBDV成熟與釋放中的作用機(jī)制。在本研究中,我們利用IBDV研究自噬在禽雙RNA病毒復(fù)制中的作用。研究證明IBDV在感染晚期誘導(dǎo)了LC3分子的熒光聚點(diǎn)、內(nèi)源性LC3分子型別轉(zhuǎn)換為LC3-II、超微結(jié)構(gòu)典型的自噬體的顯著增加,說明IBDV感染誘導(dǎo)了細(xì)胞自噬的發(fā)生。饑餓誘導(dǎo)細(xì)胞自噬使病毒蛋白pVP2和VP2的量顯著增加,細(xì)胞內(nèi)與細(xì)胞上清中的感染性子代病毒量也顯著增加。WM抑制自噬,使細(xì)胞內(nèi)與細(xì)胞上清中子代病毒的量顯著降低;3-MA抑制自噬,使病毒蛋白pVP2和VP2均顯著地減少,而且細(xì)胞內(nèi)與細(xì)胞上清中子代病毒的量也顯著降低。敲低LC3B有效抑制了自噬,使病毒蛋白pVP2顯著減少,而且細(xì)胞內(nèi)與細(xì)胞上清中子代病毒也都極顯著地降低。敲低ATG5顯著抑制了自噬,使病毒蛋白pVP2顯著地減少,而且細(xì)胞內(nèi)與細(xì)胞上清中子代病毒的量都顯著降低。病毒感染后(p)VP2、VP3、dsRNA與LAMP1存在部分共定位。感染使LAMP1核心多肽和LAMP1糖基化的蛋白量均有顯著的增加。BAF A1作用抑制了病毒誘導(dǎo)的自噬體與溶酶體的融合,從而使病毒蛋白pVP2和VP2的量均顯著地降低,細(xì)胞內(nèi)與細(xì)胞上清中子代病毒的量也顯著降低。CQ作用抑制了病毒誘導(dǎo)的自噬溶酶體的降解,從而使病毒蛋白pVP2的量顯著增加,而VP2的量卻顯著降低,細(xì)胞內(nèi)與細(xì)胞上清中子代病毒的量也顯著地降低。這證明了IBDV誘導(dǎo)了自噬體與溶酶體的融合,但并沒有有效地降解其包裹的內(nèi)容物,而病毒粒子利用自噬囊泡的低pH環(huán)境來促進(jìn)病毒的成熟。利用免疫電鏡觀察發(fā)現(xiàn)大量的完整病毒粒子按晶格樣排列并被自噬溶酶體標(biāo)志分子p62包圍并有部分滲透到病毒粒子間。電鏡也觀察到大量的完整病毒粒子被囊泡膜結(jié)構(gòu)所包裹,介導(dǎo)明顯的釋放。說明自噬內(nèi)體系統(tǒng)協(xié)助了病毒蛋白的成熟和膜介導(dǎo)的子代病毒粒子的釋放。該研究證明了自噬增強(qiáng)病毒感染晚期的復(fù)制,自噬通路協(xié)助了IBDV復(fù)制復(fù)合體的功能與病毒組裝,對于完成病毒生命周期是十分關(guān)鍵的。而且,病毒綁架了自噬囊泡,利用其酸性環(huán)境促進(jìn)病毒的成熟,和一種膜介導(dǎo)的釋放與細(xì)胞到細(xì)胞的再感染機(jī)制。這就提出了一種自噬內(nèi)體系統(tǒng)介導(dǎo)IBDV成熟、釋放與再感染的機(jī)制。
【學(xué)位授予單位】：甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：S852.65

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