發(fā)布時(shí)間：2017-12-13 22:12

  本文關(guān)鍵詞：檸條錦雞兒LEA基因家族成員的鑒定與功能分析

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【摘要】：檸條錦雞兒(Caragana korshinskii)屬于豆科錦雞兒屬,分布于我國(guó)西北荒漠和半荒漠地區(qū),具有極強(qiáng)的抗逆性和廣適性,是一種研究植物抗逆機(jī)制的理想材料。胚胎發(fā)育晚期豐富蛋白(LEA蛋白)在植物抵抗非生物脅迫過(guò)程中起著重要作用,但目前對(duì)檸條錦雞兒LEA基因的研究還較少。本研究在檸條錦雞兒干旱消減抑制雜交文庫(kù)(SSH)和中間錦雞兒干旱轉(zhuǎn)錄組測(cè)序基礎(chǔ)上,通過(guò)RACE和同源克隆技術(shù)對(duì)檸條錦雞兒LEA基因家族成員進(jìn)行克隆分析,并對(duì)其中部分LEA基因在脅迫響應(yīng)中的功能進(jìn)行了初步研究,具體結(jié)果如下:1.本研究從干旱消減抑制雜交文庫(kù)(SSH)和干旱轉(zhuǎn)錄組測(cè)序結(jié)果中共鑒定得到26個(gè)CkLEA基因,包括3個(gè)LEA_1,8個(gè)LEA_2,3個(gè)LEA_3,2個(gè)LEA_4,1個(gè)LEA_6,2個(gè)SMP和7個(gè)dehydrin基因,并對(duì)這些基因的特征和系統(tǒng)進(jìn)化關(guān)系進(jìn)行了分析。2.利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR對(duì)CkLEA基因的表達(dá)模式進(jìn)行了檢測(cè),大部分CkLEA基因在根、莖、葉、花和種子中的表達(dá)都具有一定的組織特異性,并能夠受干旱、鹽、低溫、熱、高pH和ABA等處理誘導(dǎo)。3.利用RACE技術(shù)克隆得到3個(gè)CkLEA基因cDNA序列,命名為:CkLEA2-2、CkLEA2-3、CkLEA4-2,3個(gè)基因分別編碼了 152、152、320個(gè)氨基酸。4.構(gòu)建了CkLEA2-2-GFP、CkLEA2-3-GFP和CkLEA4-2-GFP三個(gè)GFP融合表達(dá)載體。亞細(xì)胞定位觀察發(fā)現(xiàn),CkLEA4-2定位在線粒體上,CkLEA2-2和CkLEA2-3定位于細(xì)胞質(zhì)、細(xì)胞核和細(xì)胞膜上。5.構(gòu)建了CkLEA2-2基因原核表達(dá)載體pE2-CkLEA2-2,轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21(DE3),對(duì)轉(zhuǎn)化的大腸桿菌進(jìn)行脅迫處理,發(fā)現(xiàn)CkLEA2-2提高了大腸桿菌對(duì)鹽和滲透脅迫的耐受能力。6.構(gòu)建了 pCanG-CkLEA2-2、pCanG-CkLEA2-3、pCanG-CkLEA3-1 和pCanG-CkLEA4-2植物過(guò)表達(dá)載體,對(duì)轉(zhuǎn)基因擬南芥功能進(jìn)行研究。過(guò)表達(dá)CkLEA2-2、CkLEA2-3、CkLEA3-1、CkLEA4-2均不同程度地提高了擬南芥在NaCl和mannitol脅迫下的萌發(fā)率,并降低了種子萌發(fā)過(guò)程中對(duì)ABA的敏感性。在幼苗生長(zhǎng)階段,過(guò)表達(dá)CkLEA2-2增強(qiáng)了擬南芥對(duì)NaCl和ABA的耐受性,主根長(zhǎng)于野生型;過(guò)表達(dá)CkLEA2-3、CkLEA3-1和CkLEA4-2提高了擬南芥的抗旱性,此外,各過(guò)表達(dá)株系中參與ABA信號(hào)途徑和脅迫響應(yīng)基因的表達(dá)也出現(xiàn)上調(diào)。
【學(xué)位授予單位】：內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類(lèi)號(hào)】：Q943.2

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 劉穎;馮金朝;吳亞麗;王麗娟;;內(nèi)蒙古和林格爾地區(qū)檸條錦雞兒生化成分分析[J];干旱區(qū)資源與環(huán)境;2008年09期

2 趙奎;丁國(guó)棟;吳斌;張宇清;段玉璽;張靜虎;孫毅;;寧夏鹽池毛烏素沙地檸條錦雞兒莖流及蒸騰特征[J];干旱區(qū)研究;2009年03期

3 王學(xué)敏;王美珍;王贊;高洪文;;檸條錦雞兒肌動(dòng)蛋白基因的克隆和表達(dá)穩(wěn)定性分析[J];植物生理學(xué)通訊;2009年08期

4 劉林德;賈興軍;張同;潘成臣;侯月利;張莉;王麗娟;趙雪;;甘肅臨澤檸條錦雞兒的開(kāi)花生物學(xué)研究[J];魯東大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2010年04期

5 鄧?yán)?王鴻U，

本文編號(hào)：1286766