本文關(guān)鍵詞：Spt4:Spt5結(jié)合DNA以及抗體E9結(jié)合ErbB2的結(jié)構(gòu)生物學(xué)研究

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【摘要】：基因表達是一個復(fù)雜并且受到多重調(diào)控的精細過程,包括了轉(zhuǎn)錄、翻譯和翻譯后修飾三個過程,并受到多種蛋白質(zhì)復(fù)合物的調(diào)控�；虮磉_的第一步是轉(zhuǎn)錄,由RNA聚合酶催化,將遺傳信息從DNA傳遞到RNA。調(diào)節(jié)基因轉(zhuǎn)錄的蛋白質(zhì)被稱作轉(zhuǎn)錄因子,轉(zhuǎn)錄因子在原核、古核、真核三界中的保守程度并不高,但唯一例外的是Spt5/NusG家族。Spt5(原核中被稱作NusG)是唯一在三界中都存在的轉(zhuǎn)錄因子。在古核和真核生物中,Spt5可以和Spt4形成穩(wěn)定的異二聚體發(fā)揮功能；但在原核生物中并不存在Spt4的同源蛋白,因而NusG獨自發(fā)揮功能。前人的工作已經(jīng)證明,Spt4:Spt5復(fù)合物與RNA聚合酶直接相互作用,并結(jié)合在RNA聚合酶clamp結(jié)構(gòu)域的coiled-coil模體上。Spt4:Spt5所處的這一位置位于DNA出口處,在這里,完成了轉(zhuǎn)錄的DNA重新形成雙螺旋結(jié)構(gòu),并通過DNA出口排出。在本次工作中,我們通過核磁共振化學(xué)位移擾動和熒光偏振實驗首次證實了Spt4:Spt5結(jié)合DNA的能力；并通過解析和分析MjSpt4:Spt5的晶體結(jié)構(gòu),猜測了一個位于Spt4:Spt5上可能的DNA結(jié)合區(qū)域；并從兩套衍射數(shù)據(jù)解析的模型中捕捉到了Spt4:Spt5兩種不同的構(gòu)象,進而分析了兩種構(gòu)象對Spt4:Spt5結(jié)合DNA能力的影響；通過結(jié)合定點突變和熒光偏振實驗,我們最終構(gòu)建了一個Spt4:Spt5結(jié)合DNA的模型,進而構(gòu)建了一個包含了RNA聚合酶、Spt4:Spt5復(fù)合物和DNA三個元素的RNA聚合酶DNA出口模型,并通過生化實驗和計算機模擬驗證了此模型的正確性。ErbB2隸屬于酪氨酸蛋白激酶家族中的表皮生長因子受體亞家族,這類跨膜蛋白通過胞外結(jié)構(gòu)域的二聚化激活其胞內(nèi)區(qū)的酪氨酸激酶活性,進而互相催化對方的胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域C末端尾巴并進一步激活下游信號通路。ErbB2負(fù)責(zé)調(diào)控包括細胞復(fù)制和凋亡的多條重要信號通路,其活性異常會導(dǎo)致乳腺癌等近十種癌癥,并有著更高轉(zhuǎn)移性。因而,近年來ErbB2成為了抗腫瘤治療的重要靶標(biāo)分子。中國科學(xué)技術(shù)大學(xué)的細胞與分子免疫學(xué)實驗室近年來一直致力于抗ErbB2抗體的研發(fā),并開發(fā)了一株具有抗腫瘤活性的人鼠嵌合抗體chA21。近期,該實驗室完成了對chA21的人源化,并通過親和力成熟技術(shù)制備了具有高親和力的人源化抗ErbB2抗體E9。我們與細胞與分子免疫學(xué)實驗室合作,通過X射線衍射方法解析了E9 scFv片段與ErbB2完整胞外結(jié)構(gòu)域的晶體結(jié)構(gòu),確認(rèn)了E9在ErbB2上的結(jié)合位置；并發(fā)現(xiàn)在抗原—抗體結(jié)合界面上,原先chA21所結(jié)合的抗原表面三條loop變成了兩條,解釋了E9親和力提升的原因；結(jié)合ELISA和腫瘤細胞增長抑制試驗闡明了抗體CDR區(qū)相對距離對E9抗腫瘤能力的影響,進一步補充了E9下調(diào)ErbB2模型的細節(jié)。
【學(xué)位授予單位】：中國科學(xué)技術(shù)大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：Q78

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1 徐耀忠;Thiobase DNA: the chemistry and some applications in cancer studies[J];Progress in Natural Science;2000年06期

2 傅衍 ,牛冬 ,阮暉 ,陳海燕;COMPARISON OF DIFFERENT ENZYMES AND PROBES AND THEIR COMBINATIONS IN DNA FINGERPRINTING[J];Journal of Zhejiang University Science;2001年04期

3 安小惠 ,王一理 ,來寶長 ,耿一萍 ,司履生;CONSTRUCTION OF HUMAN INTERLUEKIN-18 DNA VACCINE AND IT'S EXPRESSION IN MAMMALIAN CELLS[J];Journal of Xi'an Medical University;2001年02期

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5 ;DIFFERENT RESULTS BY DIFFERENT COMMERCIAL TAQ DNA POLYMERASE IN RAPD[J];四川動物;2002年02期

6 ;Genetic Diversity of Three Aristichthys nobilis Populations and One Inbreeding Stock[J];Wuhan University Journal of Natural Sciences;2002年02期

7 強曉藝;DNA計算的應(yīng)用與展望[J];西安聯(lián)合大學(xué)學(xué)報;2002年02期

8 王軍陽,范桂香,勝利,袁育康;THE CONSTRUCTION AND PRELIMINARY APPRAISEMENT OF HSV-2 gD GENE DNA VACCINE[J];Academic Journal of Xi'an Jiaotong University;2002年02期

9 董菁 ,成軍 ,王勤環(huán) ,施雙雙 ,王剛 ,斯崇文;CLONING AND ANALYSIS OF THE GENOMIC DNA SEQUENCE OF AUGMENTER OF LIVERR EGENERATION FROM RAT[J];Chinese Medical Sciences Journal;2002年02期

10 謝傳曉;Evidence for Base Substitutions and Repair of DNA Mismatch Damage Induced by Low Energy N~+ Ion Beam Implantation in E. coli[J];High Technology Letters;2003年02期

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1 Michael J.Siefkes;Cory O.Brant;Ronald B.Walter;;A novel real-time XL-PCR for DNA damage detection[A];漁業(yè)科技創(chuàng)新與發(fā)展方式轉(zhuǎn)變——2011年中國水產(chǎn)學(xué)會學(xué)術(shù)年會論文摘要集[C];2011年

2 ;Hormonal Regulation and Tumorigenic Role of DNA Methyltransferase[A];2011中國婦產(chǎn)科學(xué)術(shù)會議暨浙江省計劃生育與生殖醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)年會暨生殖健康講習(xí)班論文匯編[C];2011年

3 Dongmei Zhao;Fan Jin;Yuli Qian;Hefeng Huang;;Expression patterns of Dnmtl and Dnmt3b in preimplantational mouse embryos and effects of in-vitro cultures on their expression[A];中華醫(yī)學(xué)會第十次全國婦產(chǎn)科學(xué)術(shù)會議婦科內(nèi)分泌會場（婦科內(nèi)分泌學(xué)組、絕經(jīng)學(xué)組、計劃生育學(xué)組）論文匯編[C];2012年

4 姜東成;蔣稼歡;楊力;蔡紹皙;K.-L.Paul Sung;;在聚吡咯微點致動下的DNA雜交行為[A];2008年全國生物流變學(xué)與生物力學(xué)學(xué)術(shù)會議論文摘要集[C];2008年

5 白明慧;翁小成;周翔;;聯(lián)鄰苯二酚類小分子作為DNA交聯(lián)劑的研究[A];第六屆全國化學(xué)生物學(xué)學(xué)術(shù)會議論文摘要集[C];2009年

6 張曄;杜智;楊斌;高英堂;;檢測外周血中游離DNA的應(yīng)用前景(綜述)[A];天津市生物醫(yī)學(xué)工程學(xué)會第29屆學(xué)術(shù)年會暨首屆生物醫(yī)學(xué)工程前沿科學(xué)研討會論文集[C];2009年

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8 ;EFFECTS OF Ku70-DEFICIENT ON ARSENITE-INDUCED DNA DOUBLE STRAND BREAKS, CHROMOSOMAL ALTERATIONS AND CELL CYCLE ARREST[A];海峽兩岸第三屆毒理學(xué)研討會論文摘要[C];2005年

9 李經(jīng)建;冀中華;蔡生民;;小溝結(jié)合方式中的DNA媒介電荷轉(zhuǎn)移[A];第十三次全國電化學(xué)會議論文摘要集（下集）[C];2005年

10 ;The interaction between Levofloxacine Hydrochloride and DNA mediated by Cu~(2+)[A];湖北省化學(xué)化工學(xué)會2006年年會暨循環(huán)經(jīng)濟專家論壇論文集[C];2006年

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1 本報記者 袁滿;平安：把“領(lǐng)先”作為DNA[N];經(jīng)濟觀察報;2006年

2 舒放;編織一個DNA納米桶[N];醫(yī)藥經(jīng)濟報;2006年

3 閆潔;英兩無罪公民起訴要求銷毀DNA記錄[N];新華每日電訊;2008年

4 何德功;日本制成診斷魚病的“DNA書”[N];農(nóng)民日報;2004年

5 本報記者 張巍巍;DNA樣本也能作假[N];科技日報;2009年

6 周斌偉　鄒巍;蘇州警方應(yīng)用DNA技術(shù)一年偵破案件1887起[N];人民公安報;2011年

7 本報記者 楊天笑;揭秘“神探”DNA[N];蘇州日報;2011年

8 第四軍醫(yī)大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)部生物化學(xué)與分子生物學(xué)教研室教授 李福洋;破除法老DNA的咒語[N];東方早報;2011年

9 常麗君;DNA電路可檢測導(dǎo)致疾病的基因損傷[N];科技日報;2012年

10 常麗君;效率和質(zhì)量：“DNA制造業(yè)”兩大障礙被攻克[N];科技日報;2012年

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1 唐陽;基于質(zhì)譜技術(shù)的基因組DNA甲基化及其氧化衍生物分析[D];武漢大學(xué);2014年

2 池晴佳;DNA動力學(xué)與彈性性質(zhì)研究[D];重慶大學(xué);2015年

3 胡璐璐;哺乳動物DNA去甲基化過程關(guān)鍵酶TET2的三維結(jié)構(gòu)與P暬蒲芯縖D];復(fù)旦大學(xué);2014年

4 馬寅洲;基于滾環(huán)擴增的DNA自組裝技術(shù)的研究[D];南京大學(xué);2014年

5 黃學(xué)鋒;精子DNA碎片的臨床意義：臨床和實驗研究[D];復(fù)旦大學(xué);2013年

6 隋江東;APE1促進DNA-PKcs介導(dǎo)hnRNPA1磷酸化及其在有絲分裂期端粒保護中的作用[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2015年

7 劉松柏;結(jié)構(gòu)特異性核酸酶FEN1在DNA復(fù)制及細胞周期過程中的功能性研究[D];浙江大學(xué);2015年

8 王璐;哺乳動物中親本DNA甲基化的重編程與繼承[D];中國科學(xué)院北京基因組研究所;2015年

9 齊文靖;染色質(zhì)改構(gòu)蛋白BRG1在DNA雙鏈斷裂修復(fù)中的作用及機制研究[D];東北師范大學(xué);2015年

10 龍湍;水稻T-DNA插入突變?nèi)后w側(cè)翼序列的分離分析和OsaTRZ2的克隆與功能鑒定[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2014年

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1 董洪奎;面向可視化納米操作的DNA運動學(xué)建模及誤差實時校正方法[D];沈陽理工大學(xué);2014年

2 聞金燕;水溶性羧基和吡啶基咔咯大環(huán)與DNA和人血清蛋白的相互作用[D];華南理工大學(xué);2015年

3 江懌雨;水溶性羧酸卟啉及其配合物與DNA和人血清蛋白的相互作用[D];華南理工大學(xué);2015年

4 高志森;比較外周游離循環(huán)腫瘤DNA與癌胚抗原監(jiān)測非小細胞肺癌根治術(shù)前后腫瘤負(fù)荷變化的初步研究[D];福建醫(yī)科大學(xué);2015年

5 丁浩;血漿循環(huán)DNA完整性及多基因甲基化對肺癌診斷價值的研究[D];河北大學(xué);2015年

6 王鵬;基于碳點@氧化石墨烯復(fù)合材料DNA生物傳感器的構(gòu)建及用于PML/RARα基因檢測[D];福建醫(yī)科大學(xué);2015年

7 李海青;轉(zhuǎn)堿篷和鹽角草總DNA的耐鹽紫花苜蓿的選育[D];內(nèi)蒙古大學(xué);2015年

8 李婷婷;小鼠DNA模式識別重要受體的分子結(jié)構(gòu)特征及其功能研究[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2015年

9 劉瑞斯;抗癌藥物奧沙利鉑與DNA相互作用的原子力顯微鏡觀察研究[D];東北林業(yè)大學(xué);2015年

10 熊忠;芳香二肽與一價金屬離子間相互作用及DNA切割活性的研究[D];鄭州大學(xué);2015年

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本文編號：1250901