本文關(guān)鍵詞：小鼠雌性誘導(dǎo)多能性干細(xì)胞的分離與多能性研究

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【摘要】：自2006年Yamanaka研究小組首次成功地從小鼠胎兒成纖維細(xì)胞誘導(dǎo)得到誘導(dǎo)多能性干細(xì)胞(Induced pluripotent stem cells,i PSCs)以來,由于i PS細(xì)胞潛在的廣闊應(yīng)用前景而迅速成為干細(xì)胞研究領(lǐng)域的新熱點(diǎn)。高質(zhì)量的i PS細(xì)胞可以獲得有生殖系傳遞能力的嵌合體,以及通過四倍體補(bǔ)償技術(shù)獲得完全由i PS細(xì)胞發(fā)育來的小鼠。目前,絕大部分供研究用的小鼠多能干細(xì)胞系為雄性,科學(xué)家對雌性小鼠的多能干細(xì)胞細(xì)胞系的研究甚少,包括商業(yè)公司所提供的小鼠多能干細(xì)胞系也多為雄性。因此,高質(zhì)量的雌性i PS細(xì)胞系對于科研應(yīng)用以及研究人類雌性多能干細(xì)胞的臨床研究就顯得尤為重要。我們通過調(diào)查研究發(fā)現(xiàn),現(xiàn)在誘導(dǎo)i PS的體系多以混合性別的小鼠胎兒成纖維細(xì)胞為材料,即MEF細(xì)胞來源于多只小鼠胎兒。我們進(jìn)行了比對研究,用混合性別的MEF為材料進(jìn)行從頭誘導(dǎo),得到的i PS細(xì)胞系性別比例發(fā)生嚴(yán)重失衡,雄性多能干細(xì)胞的克隆數(shù)量明顯高于雌性多能干細(xì)胞。本試驗(yàn)所用起始細(xì)胞的數(shù)量和傳代次數(shù)等控制一致,雄性MEF細(xì)胞的比例分別0%,10%,30%,50%和100%,誘導(dǎo)成為雄性i PS細(xì)胞的比例分別為0%,19.9±2.8%,68.2±5.4%,85.9±6.8%和100%。但是當(dāng)通過對不同品系的初始細(xì)胞,不同的病毒感染組合以及不同批次之間的單一性別的細(xì)胞進(jìn)行誘導(dǎo),發(fā)現(xiàn)其效率沒有明顯差異。建系的雌性i PS細(xì)胞核型正常,具有與ES細(xì)胞相似的典型特征,包括,倍增速度快,成集落狀生長,具有較高堿性磷酸酶活性,表達(dá)ES細(xì)胞表面特異性抗原,表達(dá)ES細(xì)胞所有的多能基因,多能基因啟動(dòng)子區(qū)域保持低甲基化狀態(tài)。i PS細(xì)胞在體外常規(guī)培養(yǎng)后可自發(fā)形成類胚體,且有自發(fā)分化能力。將i PS細(xì)胞注入免疫缺陷小鼠體內(nèi)后,約4周,可形成的畸胎瘤,經(jīng)過切片、染色后可見典型的三胚層結(jié)構(gòu)。i PS細(xì)胞可通過嵌合體試驗(yàn)獲得具有生殖系傳遞能力的嵌合體小鼠,其中最重要的是,能夠通過四倍體胚胎補(bǔ)償技術(shù)這個(gè)檢測ES細(xì)胞多能性的黃金法則獲得完全有i PS細(xì)胞發(fā)育而來的雌性小鼠�；旌闲詣e比例誘導(dǎo)獲得的雌性i PS細(xì)胞系沒有能夠通過四倍體胚胎補(bǔ)償技術(shù)獲得完全由i PS細(xì)胞發(fā)育而來的雌性小鼠。這些結(jié)果表明,高效的獲得高質(zhì)量的雌性i PS細(xì)胞須通過對雌性細(xì)胞的單獨(dú)誘導(dǎo)來實(shí)現(xiàn),高質(zhì)量雌性干細(xì)胞對于臨床研究具有實(shí)際意義,為研究人類或其他物種的多能干細(xì)胞打下基礎(chǔ)。
【學(xué)位授予單位】：河北農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：Q954.4

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中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 柯為;骨髓干細(xì)胞的多能性及其應(yīng)用[J];生物工程學(xué)報(bào);2002年04期

2 潘少輝;胡s，

本文編號：1216470