本文關(guān)鍵詞：線蟲神經(jīng)元中特異性基因表達(dá)系統(tǒng)的構(gòu)建與應(yīng)用

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【摘要】：線蟲是最富有成果的促進(jìn)發(fā)育和神經(jīng)系統(tǒng)的分子機(jī)制進(jìn)步的模式生物,它已經(jīng)成為科學(xué)家眼中的明星生物. 線蟲全體透明簡單,已經(jīng)成為生物學(xué)研究中的無價(jià)的工具,主要在特異性靶標(biāo)的功能特性的研究方面,這個(gè)已經(jīng)用基因組學(xué)的方法確定.秀麗隱桿線蟲和高等生物,線蟲和高級(jí)的生物體,以及簡單和農(nóng)業(yè)的成本效益,使為一種有效的活體模型,它適合于全生物體高生產(chǎn)率化合物篩選和廣泛目標(biāo)驗(yàn)證.線蟲神經(jīng)系統(tǒng)是非常簡單的,雌雄同體成蟲僅302個(gè)神經(jīng)元,其可分為運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元,感覺神經(jīng)元和中間神經(jīng)元.因此我們選擇秀麗隱桿線蟲作為我們工作的研究目標(biāo).在這里我們結(jié)合gateway技術(shù)以及位點(diǎn)特異性重組系統(tǒng)(Cre/loxP, FLP/FRT),熒光共聚焦顯微鏡來標(biāo)記秀麗隱桿線蟲的神經(jīng)元。我們選擇啟動(dòng)子的重疊區(qū),從而能夠通過不同的熒光蛋白來標(biāo)記出神經(jīng)元。此外我們運(yùn)用了重組系統(tǒng),能夠運(yùn)用兩個(gè)啟動(dòng)子的重疊區(qū)和位點(diǎn)特異性重組酶系統(tǒng)(FLP/FRT, Cre/LoxP)標(biāo)記單個(gè)神經(jīng)元.我們已經(jīng)構(gòu)建質(zhì)粒中包含F(xiàn)LP/FRT或者Cre/loxP特異的重組系統(tǒng)來研究兩種啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)的神經(jīng)元的表達(dá)系統(tǒng).我們也構(gòu)建了質(zhì)粒中含有(FLP/FRT和Cre/loxP)位點(diǎn)特異性重組系統(tǒng)來研究三個(gè)特異性啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)的神經(jīng)元的表達(dá).此外,我們運(yùn)用啟動(dòng)子庫結(jié)合gateway的方法促進(jìn)線蟲神經(jīng)元的研究.在這個(gè)模型中,我們不僅可以標(biāo)記神經(jīng)元而且可以建立一個(gè)線蟲的神經(jīng)元的三維重構(gòu)圖譜. 另一方面,被發(fā)現(xiàn)一些精彩的工具和技能為通過標(biāo)志著該特定神經(jīng)元構(gòu)建質(zhì)粒已經(jīng)發(fā)現(xiàn)出來,尤其是該酶切法該組合和多站點(diǎn)重組技術(shù),不僅顯示該高效和在酶切無縫連接反應(yīng),但也需要多站點(diǎn)重組反應(yīng)重復(fù)使用.與此同時(shí),通過應(yīng)用這種方法找到基因“的條件表達(dá)譜,進(jìn)一步研究線蟲神經(jīng)元和基因的功能 在此方面,我們可以標(biāo)記感覺神經(jīng)元ASH和ASI,由啟動(dòng)子sra-6P和gpa-HP, rab-3P和gpa-4P的交叉點(diǎn).我們可以標(biāo)記的神經(jīng)元ASH,由三個(gè)啟動(dòng)子的rab-3p交集,我們已經(jīng)使用了第二個(gè)啟動(dòng)子和第三都是相同的(gba-4P)可以在單個(gè)神經(jīng)元表達(dá)ASI,這樣在神經(jīng)元功能的進(jìn)一步研究做鋪墊.
【關(guān)鍵詞】：線蟲的神經(jīng)元 基因表達(dá) 位點(diǎn)特異性重組酶系統(tǒng)
【學(xué)位授予單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：Q78
【目錄】：

• 摘要7-9
• ABSTRACT9-11
• LIST OF CONTENTS11-13
• LIST OF FIGURES13-16
• LIST OF TABLES16-17
• CHAPTER ONE INTRODUCTION17-20
• CHAPTER TWO LITERATURE REVIEW20-54
• 2.1 OVERVIEW OF MODEL ORGANISM CELEGANS20
• 2.2 THE REASON FOR THE STUDY OF NEMATODES C.ELEGANS20-22
• 2.3 LABORATORY CULTURE OF C. ELEGANS22
• 2.4 LIFE CYCLES OF C. ELEGANS22-24
• 2.5 THE ONLINE INFORMATION RESOURCES FOR C. ELEGANS24-26
• 2.6 GENOME OF C. ELEGANS26-27
• 2.7 NEMATODES NERVOUS SYSTEM27-31
• 2.8 GENE EXPRESSION PROCESS31
• 2.9 TRANSGENIC RESEARCH METHODS NEMATODES31-34
• 2.10 NEURON-SPECIFIC MARKERS IN CELEGANSBODY34-36
• 2.11 SITE-SPECIFIC RECOMBINASE SYSTEM36-45
• 2.12 PUBLISHED EXAMPLES OF EXPRESSION FLP/FRT AND CRE/LOXP SYSTEM45-49
• 2.13 SL2 TRANS-SPLICING FACTORS49-50
• 2.14 NUCLEAR LOCALIZATION SIGNAL OR SEQUENCE(NLS)50-51
• 2.15 MULTISITE GATEWAY TECHNOLOGY51-54
• CHAPTER THREE MATERIALS AND METHODS54-92
• 3 MATERIALS AND METHODS54-92
• 3.1 MATERIALS54-58
• 3.2 METHODS58-92
• CHAPTER FOUR RESULTS AND DISCUSSION92-105
• 4.1 RESTRICTION DIGESTION METHODS COMBINED WITH MUL TISITE GATEWAYVECTOR92-93
• 4.2 PROMOTER DRIVEN THE EXPRESSION OF FLUORSCENT PROTEIN LABELEDNEURONS93-105
• CHAPTER FIVE CONCLUSION AND FUTURE WORK105-108
• CONCLUSIONS105-107
• FUTUR WORK107-108
• ACKNOWLEDGEMENTS108-109
• LIST OF ABBREVIATIONS109-111
• REFERENCES LIST111-125
• APPENDIX125-129
• LIST OF PUBLICATIONS129

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