本文關(guān)鍵詞：谷氨酸能和GABA能神經(jīng)元突觸前差異研究

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【摘要】：由于興奮性和抑制性突觸對于神經(jīng)環(huán)路調(diào)節(jié)的重要性,谷氨酸能和GABA能突觸的功能研究一直是關(guān)注的熱點。以往的研究往往關(guān)注于兩者突觸后的差別,而突觸前的研究則大部分不區(qū)分二者或僅僅集中于谷氨酸能突觸。 我們的研究首先利用了高壓冷凍固定技術(shù)對小鼠大腦皮層組織的興奮性突觸和抑制性突觸囊泡結(jié)構(gòu)形態(tài)進(jìn)行了3D重構(gòu)和大小與形態(tài)的比較,發(fā)現(xiàn)在抑制性的GABA能突觸中能夠觀察到較多直徑在60nm以上的囊泡,而興奮性突觸的囊泡則幾乎都集中在50nm附近；接著,我們利用辣根過氧化物酶(HRP)對谷氨酸能突觸和GABA能突觸前的功能性回收囊泡進(jìn)行標(biāo)記,并在標(biāo)記后的不同時間點進(jìn)行固定和觀察,發(fā)現(xiàn)GABA能突觸的功能性回收囊泡中有大量直徑接近內(nèi)吞體(endosome)的大型囊泡,這些大型囊泡在回收后15min內(nèi)可以轉(zhuǎn)變生成小囊泡,而谷氨酸能突觸中這一現(xiàn)象并不明顯；之后,我們又利用FM4-64染料標(biāo)記回收囊泡,并于15min后在熒光顯微鏡下對神經(jīng)元進(jìn)行刺激和實時成像。我們發(fā)現(xiàn),GABA能的回收囊泡可以在電刺激下迅速釋放干凈,而谷氨酸能的突觸囊泡在電刺激下只能釋放一部分,只有使用高鉀溶液灌流才能讓這些回收囊泡繼續(xù)釋放。最后,我們利用雙通道膜片鉗技術(shù),比較谷氨酸能突觸和GABA能突觸在連續(xù)刺激下的電流反應(yīng)恢復(fù)情況,發(fā)現(xiàn)谷氨酸能突觸在刺激后可以比GABA能突觸更快恢復(fù)到初始強(qiáng)度。根據(jù)這些現(xiàn)象,我們認(rèn)為谷氨酸能和GABA能突觸前存在不同的囊泡循環(huán)模式,并為這一領(lǐng)域提供了新的觀點和思路。
【關(guān)鍵詞】：
【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：Q421
【目錄】：

• 接播5-7
• 摘要7-8
• Abstract8-10
• 縮寫10-12
• 目錄12-14
• 1. 引言14-18
• 2. 實驗材料和方法18-31
• 2.1 細(xì)胞培養(yǎng)18-20
• 2.2 電生理記錄20-21
• 2.3 熒光顯微成像21-23
• 2.4 電鏡制樣及觀察23-25
• 2.5 高壓冷凍及冷凍替代25-27
• 2.6 主要溶液的配制27-28
• 2.7 主要藥品來源28-29
• 2.8 主要儀器29-30
• 2.9 數(shù)據(jù)統(tǒng)計和分析30-31
• 3. 實驗結(jié)果31-48
• 3.1 GABA能神經(jīng)突觸中可以觀察到較多的大直徑囊泡31-36
• 3.2 GABA能突觸在刺激后會產(chǎn)生大量的大直徑囊泡36-40
• 3.3 谷氨酸能突觸的回收囊泡在電刺激下較難釋放40-45
• 3.4 谷氨酸能突觸后電流在刺激后恢復(fù)得較快45-48
• 4. 討論48-52
• 5. 參考文獻(xiàn)52-62
• 6. 文獻(xiàn)綜述：突觸前的囊泡回收途徑62-92
• 摘要62
• 前言62-64
• 網(wǎng)格蛋白Clathrin介導(dǎo)的內(nèi)吞途徑(Clathrin-mediate endocytosis, CME)64-68
• Kiss and run途徑68-71
• 超快速內(nèi)吞途徑(Ultrafast endocytosis)71-73
• 大泡內(nèi)吞途徑(Bulk endocytosis)73-75
• 討論75-77
• 參考文獻(xiàn)77-92
• 作者簡介及在讀期間所取得的科研成果9

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號：1034459