本文關(guān)鍵詞：植物多酚修飾非甾體抗炎藥的設(shè)計(jì)、合成及其抗炎作用與機(jī)理研究

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【摘要】：非甾體抗炎藥作為一種非處方藥,已在全世界范圍內(nèi)被廣泛用于解熱、鎮(zhèn)痛、治療關(guān)節(jié)炎和預(yù)防腫瘤等。但是長(zhǎng)期服用非甾體抗炎藥可能會(huì)導(dǎo)致患者胃腸道出血、腎毒性、肝毒性和心血管疾病等副作用的產(chǎn)生,這極大地限制了其廣泛應(yīng)用。為了得到生理活性好、副作用小的新型抗炎藥,本文受植物多酚生物活性多樣性的啟發(fā),以非甾體抗炎藥為先導(dǎo)化合物,選用姜黃素與厚樸酚對(duì)非甾體抗炎進(jìn)行結(jié)構(gòu)改造,合成目標(biāo)化合物并以體外細(xì)胞毒實(shí)驗(yàn)和動(dòng)物體內(nèi)實(shí)驗(yàn)對(duì)目標(biāo)化合物的抗炎活性進(jìn)行篩選,然后對(duì)其抗炎機(jī)理進(jìn)行研究,為新型抗炎藥的開發(fā)奠定基礎(chǔ)。本文受到植物多酚生物活性多樣性的啟發(fā),基于NSAIDs母體結(jié)構(gòu),經(jīng)酯化反應(yīng)對(duì)NSAIDs母體進(jìn)行結(jié)構(gòu)修飾,合成了四個(gè)系列共51個(gè)姜黃素類似物和厚樸酚類似物,并通過(guò)氫譜、碳譜和質(zhì)譜等表征手段對(duì)所合成的化合物的結(jié)構(gòu)進(jìn)行表征,確證了目標(biāo)化合物的結(jié)構(gòu)。本文采用MTT染色法對(duì)合成得到的51,個(gè)姜黃素類似物和厚樸酚類似物的體外RAW264.7巨噬細(xì)胞的細(xì)胞毒進(jìn)行了檢測(cè),其半數(shù)抑制濃度用IC50值表示。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：27個(gè)姜黃素類似物和24個(gè)厚樸酚類似物中的大部分化合物對(duì)RAW 264.7細(xì)胞均有較強(qiáng)的抑制作用,在一定程度上誘導(dǎo)RAW 264.7細(xì)胞凋亡,其中化合物A5和C1l的抑制作用是最強(qiáng)的。通過(guò)體外抗炎活性與構(gòu)效關(guān)系研究發(fā)現(xiàn)：在滅酸類單取代姜黃素類似物中,含有吸電子基團(tuán)的單取代姜黃素類似物的抗炎活性更強(qiáng)。其中間位上的H被-CF3取代后,其類似物A5(5.54μM)對(duì)RAW264.7細(xì)胞的抑制作用是最強(qiáng)的,其次是間位被-C1取代的姜黃素類似物(A8),對(duì)RAW264.7細(xì)胞抑制作用最弱的是間位被-CH3取代的姜黃素類似物(A13)。而且本文合成的大部分單取代的姜黃素類似物(c, e, f, g, h, l, k, m)具有比雙取代的姜黃素類似物更強(qiáng)的體外抗炎活性；全部的雙取代厚樸酚類似物具有比單取代厚樸酚類似物更強(qiáng)的體外抗炎活性。本文進(jìn)一步以TPA誘導(dǎo)的小鼠耳廓腫脹實(shí)驗(yàn)為模型,對(duì)27個(gè)姜黃素類似物和24個(gè)厚樸酚類似物的體內(nèi)抗炎活性進(jìn)行篩選。篩選結(jié)果表明：23個(gè)姜黃素類似物的抑制率優(yōu)于姜黃素；21個(gè)厚樸酚類似物的抑制率優(yōu)于厚樸酚。其中抑制率超過(guò)90.0%的姜黃素類似物包括：A5, A6, A11, B4, B6和B13；抑制率超過(guò)90.0%的厚樸酚類似物包括：C2, C3, C6, C7, C9, D4, D7和D9。根據(jù)體內(nèi)抗炎活性與構(gòu)效關(guān)系分析,B13,A6和A5分別是水楊酸類姜黃素類似物,丙酸類姜黃素類似物以及滅酸類姜黃素類似物中對(duì)TPA誘導(dǎo)的小鼠耳廓腫脹起抑制作用最為明顯以及最具潛力的三個(gè)化合物；C7和C3分別是異丙酸類厚樸酚類似物以及水楊酸類厚樸酚類似物中對(duì)TPA誘導(dǎo)的小鼠耳廓腫脹起抑制作用最為明顯以及最具潛力的兩個(gè)化合物。大部分單取代的姜黃素類似物(b, e, f, g, h, k,1, m)和厚樸酚類似物(b, c, e, g, h, i, k,1)對(duì)TPA誘導(dǎo)的小鼠耳廓腫脹的抑制作用明顯強(qiáng)于雙取代的姜黃素類似物和厚樸酚類似物。而且通過(guò)更進(jìn)一步的體內(nèi)抗炎活性篩選發(fā)現(xiàn),與單獨(dú)使用姜黃素,水楊酸或雙水楊酸酯,聯(lián)合應(yīng)用姜黃素和水楊酸(1：1)或聯(lián)合應(yīng)用姜黃素和雙水楊酸酯(1：2)相比,All和B13對(duì)TPA誘導(dǎo)的小鼠耳廓腫脹具有更為明顯的抑制作用；同樣地,與單獨(dú)使用厚樸酚,酮洛芬,聯(lián)合應(yīng)用厚樸酚和酮洛芬(1：1)相比,‘C7對(duì)TPA誘導(dǎo)的小鼠耳廓腫脹具有更為明顯的抑制作用。此外,本文還研究了All,B13和C7對(duì)NF-κB信號(hào)通路的影響,結(jié)果顯示：與空白對(duì)照組相比,致炎劑TPA對(duì)NF-κB的活化作用起著至關(guān)重要的作用,其可誘導(dǎo)IL-1B,IL-6和TNF-a的產(chǎn)生,導(dǎo)致p65和IκBα磷酸化以及活化IκBα的上游因子IKK。使用Al1、B13和C7對(duì)小鼠耳廓進(jìn)行預(yù)處理后發(fā)現(xiàn),Al1、B13和C7可抑制IL-1B,IL-6和TNF-α的產(chǎn)生,預(yù)防p65磷酸化,調(diào)節(jié)IκBα磷酸化和抑制IKK活性。
【關(guān)鍵詞】：非甾體抗炎藥 姜黃素 厚樸酚 TPA 抗炎活性
【學(xué)位授予單位】：廣東工業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：TQ465
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-15
• 第一章 緒論15-46
• 1.1 非甾體抗炎藥的概述15-25
• 1.1.1 非甾體抗炎藥的概念15
• 1.1.2 非甾體抗炎藥的發(fā)展概況15-16
• 1.1.3 非甾體抗炎藥的分類16-17
• 1.1.4 非甾體抗炎藥的藥理作用17-19
• 1.1.5 非甾體抗炎藥的不良反應(yīng)19-21
• 1.1.6 非甾體抗炎藥的化學(xué)結(jié)構(gòu)修飾21-25
• 1.2 天然藥物的概述25-34
• 1.2.1 姜黃素與厚樸酚的概述25-27
• 1.2.2 姜黃素與厚樸酚的藥理作用27-31
• 1.2.3 姜黃素與厚樸酚的抗炎作用機(jī)制31-34
• 1.3 本論文研究背景和選題意義34-35
• 參考文獻(xiàn)35-46
• 第二章 基于NSAIDs的姜黃素類似物與厚樸酚類似物的合成46-73
• 2.1 引言46-47
• 2.2 實(shí)驗(yàn)部分47-51
• 2.2.1 實(shí)驗(yàn)試劑與儀器47-48
• 2.2.2 姜黃素類似物的合成48-49
• 2.2.3 厚樸酚類似物的合成49-51
• 2.3 姜黃素類似物與厚樸酚類似物的結(jié)構(gòu)表征51-70
• 2.3.1 結(jié)構(gòu)表征實(shí)驗(yàn)試劑51-52
• 2.3.2 結(jié)構(gòu)表征實(shí)驗(yàn)儀器52
• 2.3.3 結(jié)構(gòu)表征實(shí)驗(yàn)方法52-53
• 2.3.4 D2的單晶結(jié)構(gòu)表征53-56
• 2.3.5 姜黃素類似物結(jié)構(gòu)表征數(shù)據(jù)56-63
• 2.3.6 厚樸酚類似物結(jié)構(gòu)表征數(shù)據(jù)63-70
• 2.4 本章小結(jié)70
• 參考文獻(xiàn)70-73
• 第三章 姜黃素類似物與厚樸酚類似物的細(xì)胞毒實(shí)驗(yàn)研究73-80
• 3.1 引言73
• 3.2 實(shí)驗(yàn)部分73-76
• 3.2.1 實(shí)驗(yàn)儀器與試劑73-74
• 3.2.2 完全培養(yǎng)液的制備74
• 3.2.3 凍存液的配制74
• 3.2.4 胰蛋白酶溶液的制備74
• 3.2.5 細(xì)胞株的來(lái)源74-75
• 3.2.6 四唑鹽(MTT)溶液75
• 3.2.7 供試品溶液制備75
• 3.2.8 實(shí)驗(yàn)方法75-76
• 3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果76-79
• 3.3.1 姜黃素類似物對(duì)RAW 264.7細(xì)胞增殖的半數(shù)抑制濃度IC_(50)76-78
• 3.3.2 厚樸酚類似物對(duì)RAW 264.7細(xì)胞增殖的半數(shù)抑制濃度IC_(50)78-79
• 3.4 小結(jié)79
• 參考文獻(xiàn)79-80
• 第四章 姜黃素類似物與厚樸酚類似物的體內(nèi)抗炎實(shí)驗(yàn)研究80-92
• 4.1 引言80
• 4.2 實(shí)驗(yàn)部分80-82
• 4.2.1 實(shí)驗(yàn)材料與設(shè)備80-81
• 4.2.2 實(shí)驗(yàn)方法81-82
• 4.2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法82
• 4.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果82-90
• 4.3.1 姜黃素類似物對(duì)TPA誘導(dǎo)的小鼠耳廓腫脹的抑制作用82-85
• 4.3.2 厚樸酚類似物對(duì)TPA誘導(dǎo)的小鼠耳廓腫脹的抑制作用85-90
• 4.4 小結(jié)90-91
• 參考文獻(xiàn)91-92
• 第五章 A11、B13和C7的抗炎機(jī)理研究92-104
• 5.1 引言92
• 5.2 實(shí)驗(yàn)部分92-96
• 5.2.1 實(shí)驗(yàn)材料與儀器92-93
• 5.2.2 實(shí)驗(yàn)方法93-95
• 5.2.3 生物標(biāo)記物的表達(dá)評(píng)分95
• 5.2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法95-96
• 5.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果96-103
• 5.3.1 A11,B13和C7 HE染色的耳廓切片研究96-98
• 5.3.2 A11,B13和C7對(duì)TPA誘導(dǎo)的IL-1β,IL-6和TNF-a抑制作用的研究98-99
• 5.3.3 A11,B13和C7對(duì)TPA誘導(dǎo)的NF-κB核轉(zhuǎn)移和活化抑制作用的研究99-101
• 5.3.4 A11,B13和C7對(duì)TPA誘導(dǎo)的IKK和IκB-a活化抑制作用的研究101-103
• 5.4 小結(jié)103
• 參考文獻(xiàn)103-104
• 結(jié)論104-106
• 附錄106-170
• 部分化合物的核磁氫譜、碳譜和質(zhì)譜圖106-164
• 合成化合物的結(jié)構(gòu)與編號(hào)164-170
• 攻讀博士期間發(fā)表論文和專利170-173
• 致謝173

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本文編號(hào)：915322