本文關(guān)鍵詞：凝血酶-海藻酸鈣復(fù)合介入栓塞止血?jiǎng)┑难兄萍皯?yīng)用基礎(chǔ)研究

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【摘要】：脾臟等實(shí)質(zhì)臟器損傷破裂后出血嚴(yán)重,常危及患者生命,傳統(tǒng)治療方式為開腹手術(shù)。近年來(lái),介入技術(shù)的飛速發(fā)展為脾損傷出血提供了新的治療選擇,尤其對(duì)于血流動(dòng)力學(xué)穩(wěn)定的傷者而言,動(dòng)脈介入栓塞止血術(shù)是非開腹手術(shù)治療脾破裂的最佳方式。介入止血術(shù)中所使用的栓塞劑可起到阻斷破裂血管血流、減少灌注、利于止血的作用,直接關(guān)系到栓塞止血術(shù)的成功與否。目前,國(guó)內(nèi)外常用的血管介入栓塞止血?jiǎng)┲饕形椈扇�、明膠海綿等固體材料以及氰基丙烯酸鹽粘合劑、Onyx等液體材料。微彈簧圈為永久性栓塞劑,制作材料為銅、鎢、鉑等貴金屬,種類繁多,制造工藝復(fù)雜且價(jià)格昂貴,使用時(shí)需根據(jù)靶血管管徑選擇相應(yīng)型號(hào)。此外,微彈簧圈作為栓塞材料還存在栓塞不完全、血栓形成率低等不足,且永久性栓塞可導(dǎo)致臟器功能組織體積萎縮或引起慢性炎癥甚至是器官損傷。明膠海綿是一種由多種氨基酸組成的動(dòng)物蛋白,能被人體組織吸收,具有使用方便、價(jià)格低廉等優(yōu)點(diǎn),最先被應(yīng)用于外科手術(shù)的術(shù)中止血。在介入領(lǐng)域,明膠海綿顆粒是目前唯一獲批用于體內(nèi)的生物可降解栓塞材料,主要用于破損血管的臨時(shí)止血或腫瘤切除術(shù)前的臨時(shí)血流阻斷。明膠海綿顆粒在體內(nèi)的降解吸收受諸多因素的影響,降解時(shí)間可從數(shù)日到數(shù)月不等,可在完全止血前即被機(jī)體吸收,使受損動(dòng)脈發(fā)生再出血的幾率增加。α-氰基丙烯酸正丁酯是臨床常用液態(tài)栓塞材料,可用于肝、脾等腹腔實(shí)質(zhì)臟器損傷出血的介入止血治療,由于其粘附性強(qiáng)且凝固時(shí)間窗短,使用時(shí)易與導(dǎo)管內(nèi)腔粘連。此外,該材料在體內(nèi)發(fā)生聚合反應(yīng)栓塞血管時(shí),所釋放的熱量可破壞動(dòng)脈內(nèi)膜,甚至引起嚴(yán)重感染、劇痛和組織缺血。Onyx是一種新近出現(xiàn)的液體栓塞材料,主要用于腦動(dòng)脈瘤和動(dòng)靜脈畸形的栓塞,也可用于腹腔實(shí)質(zhì)臟器的栓塞止血,但由于含有二甲基亞砜,可導(dǎo)致嚴(yán)重的血管痙攣,栓塞時(shí)需要特制導(dǎo)管,且在體內(nèi)凝固時(shí)間短,操作難度大。因此,針對(duì)脾臟等腹腔實(shí)質(zhì)臟器損傷出血的微創(chuàng)介入治療目前尚無(wú)十分理想的栓塞材料。采用海藻酸鈉等天然高分子生物材料裝載具有治療作用的藥物以制備載藥微球栓塞劑,是近年來(lái)介入栓塞材料研究的熱點(diǎn)之一。其中以海藻酸鈉為原料制備的微球栓塞劑可裝載和靶向釋放藥物,具有安全無(wú)毒、降解可控、普適性強(qiáng)、方便易用的優(yōu)點(diǎn),目前已被廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥研究領(lǐng)域。高效止血藥物凝血酶是一種針對(duì)外傷出血或消化道出血的常用止血?jiǎng)?可促進(jìn)血液中的纖維蛋白原轉(zhuǎn)化為纖維蛋白,迅速形成血栓,適用于不同出血部位,特別是用于不規(guī)則傷口或創(chuàng)面的快速止血。但在凝血酶作用下由血液成分所形成的自體血栓質(zhì)地軟、強(qiáng)度差,易脫落或過(guò)早自溶,止血效果不穩(wěn)定。根據(jù)上述情況,本課題擬將天然高分子生物材料海藻酸鈉與高效止血藥物凝血酶結(jié)合,制備新型復(fù)合微球介入栓塞止血?jiǎng)?并對(duì)其物理學(xué)、藥劑學(xué)和生物學(xué)特性進(jìn)行研究,之后通過(guò)脾臟損傷出血?jiǎng)游锬Ｐ?探索該新型栓塞材料的最佳使用方式并考察評(píng)估其栓塞止血效果。通過(guò)本課題,擬為脾臟等腹腔實(shí)質(zhì)器官損傷出血的介入治療提供高效、安全、普適、便捷且具有良好生物相容性的新型栓塞材料。主要研究?jī)?nèi)容和結(jié)果如下:1、凝血酶-海藻酸鈣復(fù)合微球介入栓塞止血?jiǎng)┑难兄聘鶕?jù)海藻酸鈉的理化性質(zhì),以及蛋白質(zhì)活性藥物凝血酶的藥理特性,選擇反應(yīng)條件溫和的靜電液滴法成功制備出凝血酶-海藻酸鈣復(fù)合微球。在本研究中,制備凝血酶-海藻酸鈣復(fù)合載藥微球的原料液為由生理鹽水(NS)配制的10mg/ml凝血酶-3%w/v海藻酸鈉混合溶液,凝膠浴溶液為30g/L Ca Cl2、5g/L Na Cl、1g/L Na H2PO4和5g/L吐溫-20組成的混合液。在高壓靜電成球裝置(YD-06)的靜電場(chǎng)力和自身重力作用下,原料液形成的細(xì)小液滴克服針尖粘附力和液體表面張力,快速滴入凝膠浴溶液中,通過(guò)海藻酸分子結(jié)構(gòu)中的羧基與凝膠浴溶液中的Ca2+發(fā)生聚電解質(zhì)反應(yīng),快速形成載有凝血酶的海藻酸鈣微球。最終通過(guò)設(shè)置不同的設(shè)備參數(shù),制備出了350μm和600μm兩種粒徑的載藥微球產(chǎn)品。試制實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果表明,載藥微球的粒徑與靜電場(chǎng)電壓呈正相關(guān),與針孔直徑、針頭與凝固液面距離、原料液流呈速負(fù)相關(guān)。光鏡和掃描電鏡結(jié)果顯示,所制備的凝血酶-海藻酸鈣微球粒徑均勻,凝血酶在球體內(nèi)部和表面散在分布,微球結(jié)構(gòu)疏松,表面粗糙并有大量微孔。上述結(jié)構(gòu)特征將有利于微球與血液接觸后快速釋放表層凝血酶,同時(shí)粗糙多孔的微球表面將有利于網(wǎng)羅血液中的血小板和紅細(xì)胞,激活凝血,快速形成含有微球的堅(jiān)實(shí)血栓。凝血酶-海藻酸鈣復(fù)合載藥微球的試制成功,為后續(xù)深入研究該新型材料的藥劑學(xué)、物理學(xué)、生物學(xué)特性,以及評(píng)估其栓塞止血適用性打下了良好的實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。2、凝血酶-海藻酸鈣復(fù)合微球介入栓塞止血?jiǎng)┑乃巹⿲W(xué)和物理學(xué)特性研究(1)載藥量與包封率將所制備的凝血酶-海藻酸鈣復(fù)合微球溶解于EDTA,利用紫外分光光度法檢測(cè)溶液中凝血酶的濃度,并計(jì)算出微球的包封率(entrapment efficiency,EE)和載藥量(drug loading,DL)。結(jié)果顯示,350μm微球的EE和DL分別為72.4±8.6%和20±4.1mg/ml,600μm微球的EE和DL分別為70.5±6.1%和13±5.2mg/ml。兩種不同粒徑載藥微球的包封率均達(dá)70%以上且無(wú)顯著差異(p0.05)。由于350μm微球的粒徑更小,在相同單位體積內(nèi),微球所占據(jù)的有效體積大于后者600μm微球,因此350μm微球的載藥量高于600μm微球(p0.05)。(2)釋藥模式與凝血酶活性殘余以NS作為釋藥介質(zhì),將定量微球投入其中并置于100rpm搖床上,環(huán)境溫度4℃。按預(yù)設(shè)的多個(gè)時(shí)間點(diǎn)取樣,再利用紫外分光光度法檢測(cè)各樣品溶液中的凝血酶濃度,繪制釋藥曲線并對(duì)載藥微球的釋藥模式進(jìn)行擬合。結(jié)果顯示,0h-2h期間350μm微球中的凝血酶為快速釋藥相,累計(jì)釋藥率為34.4±4.9%,此后為緩慢釋放相,192h的平均累計(jì)釋藥百分比可達(dá)90.23%;600μm微球則以緩釋為主,192h的平均累計(jì)釋藥率為67.07%。350μm載藥微球具有突釋和緩釋兩種釋藥模式,其累積釋藥率也明顯高于600μm載藥微球。突釋效應(yīng)對(duì)于微球與血液成分接觸后快速形成的混合血栓具有重要作用,緩釋則能夠持續(xù)保持靶點(diǎn)部位所需的藥物濃度。因此,350μm凝血酶-海藻酸鈣微球更加符合應(yīng)用需求。參照《中國(guó)藥典第二部》中的凝血酶活性檢測(cè)方法,對(duì)微球所釋放的凝血酶的活性殘余情況進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果顯示,1h、24h、72h和120h的凝血酶活性殘余分別為93.78%、95.74%、90.66%和92.72%,平均活性殘余93.23±2.12%。該結(jié)果提示,以海藻酸鈉作為骨架基質(zhì)材料,采用靜電液滴法制備凝血酶-海藻酸鈉微球可有效保護(hù)凝血酶的藥物活性。(3)微球彈性模量及其對(duì)混合血栓強(qiáng)度和抗擠壓能力的影響為了解凝血酶-海藻酸鈣復(fù)合載藥微球的物理學(xué)特性以及加入凝血酶后對(duì)微球結(jié)構(gòu)的影響,采用Dimesion 3100原子力顯微鏡對(duì)凝血酶-海藻酸鈣微球和采用相同工藝指標(biāo)的空白海藻酸鈣微球的彈性模量進(jìn)行檢測(cè)對(duì)比。結(jié)果顯示,凝血酶-海藻酸鈣微球?yàn)榭砂l(fā)生塑性形變的柔軟材料,其彈性模量小于相同工藝制備的空白海藻酸鈣微球,表明在加入凝血酶后,對(duì)海藻酸鈉與固定液中Ca2+的交聯(lián)螯合產(chǎn)生了影響,使原本致密的微球內(nèi)部結(jié)構(gòu)變得更為疏松,從而引起了微球機(jī)械特性的改變。為檢測(cè)加入凝血酶-海藻酸鈣微球是否能增加血栓強(qiáng)度的影響,分別利用血栓彈力圖儀(TEG)和高靈敏度的生物力學(xué)測(cè)量系統(tǒng)對(duì)含不同劑量微球的混合血栓進(jìn)行血栓強(qiáng)度和血栓抗擠壓能力檢測(cè)。TEG結(jié)果顯示,加入了微球的混合血栓其強(qiáng)度明顯大于單純血栓,混合血栓強(qiáng)度大小與所加入微球量相關(guān);而血栓抗擠壓能力檢測(cè)結(jié)果則進(jìn)一步證實(shí)了TEG實(shí)驗(yàn)結(jié)論,并確定了按照2:3的體積比將凝血酶-海藻酸鈣微球與全血混合時(shí),所形成的混合血栓抗擠壓能力最強(qiáng)。本部分藥劑學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,采用靜電液滴法制備凝血酶-海藻酸鈣微球具有藥物利用率高、釋藥模式理想、藥物活性好等特性,有望實(shí)現(xiàn)在體外與血液快速形成微球混合血栓和血管內(nèi)栓塞后不斷釋藥以加固血栓的既定目標(biāo)。物理學(xué)特性測(cè)試結(jié)果提示,凝血酶-海藻酸鈣微球作為一種新型材料,與血液混合所形成的混合血栓在強(qiáng)度和抗擠壓能力等方面均顯著強(qiáng)于柔軟易碎的單純血栓。因此,凝血酶-海藻酸鈣微球的藥劑學(xué)特性以及微球所參與形成混合血栓的物理學(xué)性質(zhì)均能滿足有效栓塞受損靶血管的應(yīng)用需求。3、凝血酶-海藻酸鈣復(fù)合微球介入栓塞止血?jiǎng)┑纳锵嗳菪匝芯?1)體外細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)根據(jù)材料細(xì)胞毒性檢測(cè)的要求并結(jié)合凝血酶-海藻酸鈣微球材料的臨床應(yīng)用特點(diǎn),選擇了小鼠成纖維細(xì)胞(L929)、人動(dòng)脈血管內(nèi)皮細(xì)胞(VECs)和人外周血紅細(xì)胞(RBC)進(jìn)行了間接接觸(浸提液)和直接接觸兩種方式的細(xì)胞毒性檢測(cè)實(shí)驗(yàn)。L929細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,凝血酶-海藻酸鈣微球?yàn)榧?xì)胞毒性I級(jí)(低細(xì)胞毒性)。凝血酶-海藻酸鈣微球作為一種栓塞止血材料,實(shí)際應(yīng)用時(shí)將與人動(dòng)脈血管內(nèi)皮細(xì)胞、紅細(xì)胞等直接發(fā)生接觸。VECs直接接觸毒性實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,凝血酶-海藻酸鈣微球與VECs共培養(yǎng)后,細(xì)胞存活率與正常培養(yǎng)基對(duì)照組無(wú)明顯差異,表明無(wú)VECs細(xì)胞毒性;RBC溶血實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,凝血酶-海藻酸鈣微球不引起外周血RBC發(fā)生溶血。上述結(jié)果證實(shí),凝血酶-海藻酸鈣微球作為一種血管內(nèi)應(yīng)用的新型栓塞材料,具有良好的細(xì)胞相容性和血液相容性。(2)動(dòng)物在體實(shí)驗(yàn)對(duì)于新型醫(yī)用材料的最終臨床前評(píng)估,主要是基于動(dòng)物實(shí)驗(yàn)。為此,我們利用C57BL/6J小鼠、SD大鼠、新西蘭兔等多種動(dòng)物模型,分別從潛在刺激性、全身急性毒性、遺傳毒性、組織炎癥反應(yīng)以及體內(nèi)降解速率等方面對(duì)凝血酶-海藻酸鈣微球的組織相容性進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)評(píng)估。新西蘭大白兔的背部皮膚具有高度敏感性,是皮內(nèi)注射刺激試驗(yàn)的理想動(dòng)物模型。在本研究中,將含高濃度凝血酶-海藻酸鈣微球溶出物的浸提液1ml分別注射到4只雄性新西蘭大白兔背部皮內(nèi)后,在72h的觀察期內(nèi)未見(jiàn)局部皮膚發(fā)生任何紅斑、紅疹、水皰或水腫等異常反應(yīng),刺激評(píng)分為0分,與NS對(duì)照組無(wú)差異。因此,凝血酶-海藻酸鈣微球?qū)C(jī)體組織無(wú)潛在刺激性和毒性。將40只雄性C57小鼠隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組(每組各20只),實(shí)驗(yàn)組于腹腔內(nèi)注入高濃度凝血酶-海藻酸鈣微球浸提液1ml,對(duì)照組則用NS代替,以觀察微球溶出物是否引起的全身急性毒性反應(yīng)。為期28d的觀察結(jié)果顯示,實(shí)驗(yàn)組和NS對(duì)照組動(dòng)物的一般情況均正常,未發(fā)現(xiàn)死亡或異常行為活動(dòng),兩組動(dòng)物腹腔注射后的體重增長(zhǎng)量無(wú)差異;組織學(xué)檢查結(jié)果示實(shí)驗(yàn)組動(dòng)物的心臟、肝臟、脾臟、肺及腎臟等主要臟器無(wú)明顯病理改變。凝血酶-海藻酸鈣微球的遺傳毒性檢測(cè)采用的是骨髓微核實(shí)驗(yàn)。將15只雄性C57小鼠隨機(jī)分為凝血酶-海藻酸鈣微球浸提液實(shí)驗(yàn)組,環(huán)磷酰胺注射液陽(yáng)性對(duì)照組和NS陰性對(duì)照組,分別按照50ml/kg,40mg/kg和50ml/kg的劑量行腹腔內(nèi)注射,24h后取股骨骨髓涂片并行組織學(xué)檢查。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,經(jīng)腹腔注射浸提液后,C57小鼠骨髓中的微核形成率與陰性對(duì)照(NS)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,而環(huán)磷酰胺注射液陽(yáng)性對(duì)照組的微核形成率明顯高于實(shí)驗(yàn)組和陰性對(duì)照組。因此,凝血酶-海藻酸鈣微球既不引起全身急性毒性反應(yīng),又無(wú)導(dǎo)致機(jī)體細(xì)胞DNA斷裂和非整倍體化的遺傳毒性。凝血酶-海藻酸鈣微球的體內(nèi)降解和組織炎癥反應(yīng)實(shí)驗(yàn)采用了18只雄性SD大鼠。將凝血酶-海藻酸鈣微球植入大鼠背部皮下,于第2、4、6、8、10、12w各處死3只動(dòng)物并取出植入的微球及周圍組織,利用組織學(xué)方法觀測(cè)植入微球的粒徑變化及周圍組織的炎癥反應(yīng)情況。結(jié)果提示,凝血酶-海藻酸鈣微球在體內(nèi)可逐漸被降解吸收,完全降解的時(shí)間約為植入后10w,微球在體內(nèi)可引起輕到中度的慢性炎癥反應(yīng),炎癥反應(yīng)的程度隨著微球的降解吸收而逐漸減弱。上述動(dòng)物在體實(shí)驗(yàn)提示,凝血酶-海藻酸鈣微球不引起全身急性毒性反應(yīng),無(wú)遺傳毒性和組織刺激性,為體內(nèi)可降解材料;凝血酶-海藻酸鈣微球在體內(nèi)所引起的輕中度慢性炎癥反應(yīng)持續(xù)時(shí)間由微球的降解速率決定。綜上所述,本部分體外細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)和動(dòng)物在體實(shí)驗(yàn)結(jié)果證實(shí),凝血酶-海藻酸鈣載藥微球是一種具有良好的細(xì)胞相容性、血液相容性和組織相容性的可降解材料,符合對(duì)栓塞材料的生物安全性要求。4、凝血酶-海藻酸鈣復(fù)合微球介入栓塞止血?jiǎng)┑膽?yīng)用方法探索及療效評(píng)價(jià)(1)應(yīng)用方法建立為探討凝血酶-海藻酸鈣微球所制備的混合血栓栓塞劑用于破損實(shí)質(zhì)臟器介入栓塞止血的可行性、有效性和安全性,我們對(duì)微球混合血栓栓塞劑的經(jīng)導(dǎo)管遞送方式,在實(shí)質(zhì)臟器損傷出血介入栓塞治療中的應(yīng)用效果以及術(shù)后可能出現(xiàn)的并發(fā)癥情況進(jìn)行了進(jìn)一步研究。對(duì)比劑是心血管介入操作中必不可少的藥物之一,主要用于X射線下血管或體腔的顯示,增強(qiáng)影像觀察效果,目前臨床上以含碘對(duì)比劑居多。由于凝血酶-海藻酸鈣微球混合血栓本身在X線下不能顯影,為此我們以含碘對(duì)比劑對(duì)凝血酶的活性影響為考察指標(biāo),對(duì)是否能夠在制備混合血栓時(shí)加入對(duì)比劑示蹤進(jìn)行了相關(guān)研究。結(jié)果表明,安射力(碘佛醇)、優(yōu)維顯(碘普羅胺)、威視派克(碘克沙醇)和泛影葡胺四種臨床常用含碘對(duì)比劑均可影響凝血酶的活性,并呈濃度依賴性,因此在介入栓塞過(guò)程中應(yīng)盡量避免凝血酶-海藻酸鈣微球與對(duì)比劑接觸。為在保證微球中凝血酶活性的同時(shí),解決遞送示蹤問(wèn)題,我們發(fā)明了 三明治‖遞送法,即先將對(duì)比劑充盈導(dǎo)管,之后將一定量的混合血栓推注入導(dǎo)管內(nèi),再注入對(duì)比劑。試用結(jié)果表明,該新方法不僅可以清晰示蹤混合血栓栓塞劑在導(dǎo)管內(nèi)的運(yùn)動(dòng)軌跡及最終的栓塞定位,而且成功將凝血酶-海藻酸鈣微球與對(duì)比劑隔離,有效保護(hù)了微球中的凝血酶活性。(2)凝血酶-海藻酸鈣微球混合血栓介入栓塞止血可行性及療效評(píng)價(jià)為證實(shí)凝血酶-海藻酸鈣微球混合血栓栓塞劑的栓塞止血作用原理和應(yīng)用效果,利用兔腎損傷出血模型分別對(duì)微球混合血栓、空白海藻酸鈣微球以及單純血栓的腎實(shí)質(zhì)損傷后腎動(dòng)脈栓塞的止血效果進(jìn)行檢測(cè),空白對(duì)照組以NS替代栓塞劑(每組8只,共24只)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,微球混合血栓栓塞劑遞送到腎動(dòng)脈后可完全阻斷血流,無(wú)栓塞劑返流,從栓塞完成到受損腎實(shí)質(zhì)完全止血用時(shí)短,混合血栓用量少,動(dòng)物的術(shù)后1周生存率達(dá)100%;單純自體實(shí)現(xiàn)完全栓塞的血栓用量大于混合血栓,由于完全止血前栓塞腎動(dòng)脈的自體血栓發(fā)生自溶,損傷部位再出血,術(shù)后6小時(shí)內(nèi)死亡率達(dá)50%。空白海藻酸鈣微球?qū)φ战M和NS空白對(duì)照組的介入栓塞止血均未成功。栓塞術(shù)后各組動(dòng)物腎臟的組織學(xué)檢查結(jié)果顯示,凝血酶-海藻酸鈣微球混合血栓中可見(jiàn)大量纖維蛋白束包繞微球周圍,且腎實(shí)質(zhì)內(nèi)動(dòng)脈中未發(fā)現(xiàn)微球;栓塞靶血管的自體血栓中組織學(xué)檢查僅可見(jiàn)散在分布的纖維蛋白細(xì)小片段;空白海藻酸鈣微球栓塞組的腎動(dòng)脈內(nèi)栓塞部位未發(fā)現(xiàn)微球滯留或血栓形成,而腎實(shí)質(zhì)中的動(dòng)脈內(nèi)可見(jiàn)微球堵塞血管。上述結(jié)果提示,單純血栓或單純微球均不能有效或可靠止血,而將兩者相結(jié)合所形成的微球混合血栓卻是一種高效、安全、可靠的栓塞止血?jiǎng)＝Y(jié)合本部分的實(shí)驗(yàn)結(jié)論以及前期的微球釋藥模式和對(duì)血栓強(qiáng)度影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果,可以認(rèn)為,凝血酶-海藻酸鈣微球能夠有有效止血的原因主要是:在體外與血液接觸并形成混合血栓時(shí),微球在自身參與血栓形成的同時(shí),早期突釋的凝血酶可將纖維蛋白原快速轉(zhuǎn)化為相互交聯(lián)的纖維蛋白束,最終形成堅(jiān)實(shí)的微球混合血栓。栓塞受損動(dòng)脈時(shí),微球既起到物理栓塞的作用,又可不斷緩釋凝血酶形成新的纖維蛋白束以加固混合血栓,使其能夠在血流沖擊及血管壁的擠壓等各種作用力下不發(fā)生破碎或移位。為了驗(yàn)證凝血酶-海藻酸鈣微球混合血栓對(duì)大動(dòng)物脾臟損傷的介入止血效果以及術(shù)后的并發(fā)癥情況,我們制作了比格犬開腹脾臟損傷出血模型,并以微球混合血栓作為栓塞劑實(shí)施了8例脾動(dòng)脈近端栓塞術(shù)。結(jié)果顯示,凝血酶-海藻酸鈣微球混合血栓栓塞劑體外制備方便快捷;采用 三明治‖法遞送可清晰顯示栓塞劑運(yùn)動(dòng)軌跡和在靶血管內(nèi)的栓塞定位情況;由于微球混合血栓中不含有機(jī)溶劑,所以術(shù)中遞送時(shí)既不需要特殊材料導(dǎo)管,亦不刺激血管引起痙攣,利用普通導(dǎo)管即可快速靶向遞送,操作簡(jiǎn)便,無(wú)堵管或粘管,術(shù)中栓塞止血的成功率達(dá)100%。術(shù)后脾動(dòng)脈造影復(fù)查結(jié)果提示,破損動(dòng)脈栓塞后,側(cè)支循環(huán)逐漸建立并供應(yīng)栓塞動(dòng)脈遠(yuǎn)端的脾臟組織,脾臟形態(tài)可逐漸恢復(fù)正常。混合微球血栓栓塞后未發(fā)生再出血、假性動(dòng)脈瘤或脾完全梗死等需開腹處理的嚴(yán)重并發(fā)癥,有效保留了脾臟及其功能;栓塞后動(dòng)物的體溫、體重等一般情況以及血液學(xué)指標(biāo)與空白手術(shù)對(duì)照組動(dòng)物(4例)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。上述栓塞及術(shù)后觀察結(jié)果提示,凝血酶-海藻酸鈣微球及其所制備微球混合血栓栓塞劑的使用方法簡(jiǎn)單,手術(shù)操作方便,栓塞止血效果可靠,且不引起嚴(yán)重并發(fā)癥,有望作為一種理想的介入止血栓塞材料。綜上所述,本課題針對(duì)腹腔實(shí)質(zhì)臟器閉合性損傷尚無(wú)理想栓塞材料的現(xiàn)狀,成功探索了新型天然高分子生物復(fù)合栓塞止血材料凝血酶-海藻酸鈣微球的制備技術(shù)方法,并對(duì)其藥劑學(xué)和物理學(xué)特性,生物相容性,以及臨床適用性進(jìn)行了全面研究。實(shí)驗(yàn)結(jié)果初步證實(shí)了該新型材料具有栓塞止血迅速、效果可靠、普適性強(qiáng)、使用方便、生物相容性好等特征,適用于脾臟、腎臟等腹腔實(shí)質(zhì)臟器閉合性損傷的介入止血治療。該新型栓塞材料的研發(fā)和應(yīng)用將有助于進(jìn)一步提高實(shí)質(zhì)臟器損傷出血的介入救治效果,改善預(yù)后,同時(shí)也為天然生物高分子材料的醫(yī)學(xué)應(yīng)用轉(zhuǎn)化提供了新的研究方向和思路。
【關(guān)鍵詞】：脾臟 損傷 海藻酸鈉 凝血酶 微球 栓塞 止血
【學(xué)位授予單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R943
【目錄】：

• 縮略語(yǔ)表5-6
• 英文摘要6-16
• 中文摘要16-23
• 第一章 前言23-27
• 第二章 凝血酶-海藻酸鈣復(fù)合微球介入栓塞止血?jiǎng)┑难兄?/span>27-35
• 2.1 材料與方法28-30
• 2.2 結(jié)果30-32
• 2.3 討論32-34
• 2.4 小結(jié)34-35
• 第三章 凝血酶-海藻酸鈣復(fù)合微球栓塞止血?jiǎng)┑乃巹⿲W(xué)和物理學(xué)特性研究35-56
• 3.1 材料與方法36-47
• 3.2 結(jié)果47-52
• 3.3 討論52-55
• 3.4 小結(jié)55-56
• 第四章 凝血酶-海藻酸鈣復(fù)合微球介入栓塞止血?jiǎng)┑纳锵嗳菪匝芯?/span>56-74
• 4.1 材料與方法56-62
• 4.2 結(jié)果62-70
• 4.3 討論70-73
• 4.4 小結(jié)73-74
• 第五章 凝血酶-海藻酸鈣復(fù)合微球介入栓塞止血?jiǎng)┑膽?yīng)用方法探索及療效評(píng)價(jià)74-91
• 5.1 材料與方法74-81
• 5.2 結(jié)果81-86
• 5.3 討論86-90
• 5.4 小結(jié)90-91
• 全文總結(jié)91-93
• 參考文獻(xiàn)93-105
• 文獻(xiàn)綜述 脾動(dòng)脈栓塞術(shù)在鈍性脾損傷治療中的應(yīng)用105-117
• 參考文獻(xiàn)111-117
• 攻讀博士學(xué)位期間發(fā)表及撰寫的論文117-119
• 致謝119

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：804130