本文關鍵詞：牡丹皮有效成分丹皮酚的提取及其藥理作用的研究

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【摘要】：糖尿病已經(jīng)成為繼腫瘤、心腦血管疾病之后第三大影響人類生活質量和健康的慢性疾病,其中有90%以上屬于Ⅱ型糖尿病。目前,對于Ⅱ型糖尿病患者,臨床上主要是采用肌肉注射胰島素配合口服降糖藥進行治療。這種方法雖然可以緩解高血糖對人體帶來的傷害,但是這些合成藥物對機體普遍存在著不良反應和毒副作用,且患者需要終身服用,因此不可避免的對機體的主要器官(肝、腎等)造成嚴重損害乃至不得不停止用藥。天然藥物因具有毒副作用小,無明顯不良反應的特點在糖尿病的治療過程中受到了普遍的關注,并取得了一定的進展。丹皮酚(Paeonol)是一種傳統(tǒng)中藥,丹皮酚味苦性寒,入心、肝和腎三條經(jīng)絡,具有清熱解毒、活血化瘀之功效,對多種疾病均有一定的治療作用。目前研究已經(jīng)證實,丹皮酚對于Ⅱ型糖尿病動物模型具有明顯的治療作用,能夠有效降低糖尿病模型的血脂、血糖和高胰島素血癥,并且在臨床應用中也取得了一定的療效。然而,仍有許多工作亟需解決,如:從植物中經(jīng)濟高效的提取出具有生物活性的丹皮酚晶體、丹皮酚抗Ⅱ型糖尿病的具體作用機制還需進一步闡明。因此,本研究對丹皮酚的提取工藝進行了優(yōu)化,并采用酶聯(lián)免疫吸附試驗、流式細胞技術、多聚酶鏈反應以及Western-blotting方法等,較為系統(tǒng)地研究了丹皮酚抗Ⅱ型糖尿病的具體作用及其機制。本試驗采用鹽水浸泡-水蒸氣蒸餾法進行粗提,采用重結晶法進行純化,從牡丹皮中提取出白色針狀丹皮酚結晶,提取率為86.40%,經(jīng)過分析鑒定為丹皮酚,純度為95.21%。在動物試驗過程中,采用鏈脲佐菌素結合高脂飼料制備Ⅱ型糖尿病大鼠模型,隨機將動物分成正常組、模型組、丹皮酚低劑量組和高劑量組,對丹皮酚降血糖、血脂作用,緩解高胰島素血癥、丹皮酚對機體免疫功能的調節(jié)和對胰島B細胞增殖分化的影響等方面進行了研究,獲得如下結果:在給予糖尿病大鼠連續(xù)40天不同劑量丹皮酚灌胃治療后,血糖從最初的16mmol/L左右下降到9.8mmol/L和7.0mmol/L,高劑量和低劑量組與模型組大鼠血糖相比均出現(xiàn)了顯著性下降(p0.01),血清胰島素也從33.75μIU/L分別下降到25.58μIU/L和19.96μIU/L,也出現(xiàn)了明顯的降低(p0.01),接近正常大鼠的18.97μIU/L。同時,糖尿病大鼠的體重、血脂、糖化血紅蛋白(Hb Alc)和葡萄糖耐量試驗等也均出現(xiàn)明顯改善,證明丹皮酚對Ⅱ型糖尿病具有很好的治療效果。通過對丹皮酚治療前后大鼠免疫功能的檢測結果,丹皮酚可以顯著升高Th1細胞的特征因子IL-2和TNF-α血清含量,即增強Th1細胞的整體活性,進而誘導CD8+細胞增殖分化,提高細胞免疫功能,增強胰島B細胞的抵御傷害的能力,減少B的死亡。檢測到血清中Th2的特征因子IL-6含量及基因表達顯著降低,表明Th2的活性明顯降低,即Th2誘導的體液免疫亢進受到有效抑制,Ig和C3、C4含量逐步恢復正常,減少對機體組織器官的損傷。另外丹皮酚還能升高血清中Treg細胞的特征因子TGF-β的含量及基因表達,通過增加Treg細胞的數(shù)量和活性,恢復CD4+/CD8+的比值,改善機體的特異性免疫。給予丹皮酚治療40天后,胰腺組織HE染色結果顯示,丹皮酚能夠消除因糖尿病所致的胰腺組織內的免疫炎性反應,同時促進B細胞的增殖分化,參與受損胰島修復和重建。通過研究發(fā)現(xiàn)丹皮酚具體作用機制,一方面能夠促進胰腺組織內PPARγ表達顯著增加,進而抑制JNK1凋亡信號通路,減少胰島B細胞的進一步損傷,另一方面丹皮酚能夠增強胰腺組織內GLP-1的表達,再通過GLP-1增強胰島B細胞增殖分化路徑中至關重要的因子PDX-1的表達,促進胰島B細胞增殖分化,參與因糖尿病而受損的胰島組織的重建與修復。
【關鍵詞】：丹皮酚 Ⅱ型糖尿病 胰島素抵抗 免疫功能 增殖分化
【學位授予單位】：燕山大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：TQ460.1
【目錄】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-13
• 第1章 緒論13-28
• 1.1 課題背景13-14
• 1.2 Ⅱ型糖尿病的病因與發(fā)病機制14-19
• 1.2.1 發(fā)病因素15-16
• 1.2.2 發(fā)病機制16-19
• 1.3 糖尿病治療19-22
• 1.3.1 西藥類治療藥物19-21
• 1.3.2 中藥類治療藥物21-22
• 1.4 丹皮酚的藥理作用22-26
• 1.4.1 丹皮酚的研究現(xiàn)狀22-26
• 1.4.2 小結26
• 1.5 本文的主要研究內容和意義26-28
• 1.5.1 研究內容26-27
• 1.5.2 研究意義27-28
• 第2章 丹皮酚的分離、純化和鑒定28-40
• 2.1 引言28
• 2.2 試驗材料28-29
• 2.2.1 藥品和試劑28-29
• 2.2.2 主要試驗儀器29
• 2.3 試驗方法29-32
• 2.3.1 牡丹皮樣品中丹皮酚的含量測定29-30
• 2.3.2 丹皮酚的提取30-31
• 2.3.3 丹皮酚的純化31
• 2.3.4 牡丹皮提取物丹皮酚的鑒定及純度檢測31-32
• 2.3.5 數(shù)據(jù)處理32
• 2.4 試驗結果32-36
• 2.4.1 牡丹皮中丹皮酚含量測定結果32
• 2.4.2 鹽水浸泡-水蒸汽蒸餾法提取丹皮酚結果32-36
• 2.5 討論36-38
• 2.5.1 牡丹根皮中丹皮酚的提取和純化36-38
• 2.5.2 牡丹皮中提取物質-丹皮酚的鑒定38
• 2.6 本章小結38-40
• 第3章 丹皮酚對II型糖尿病大鼠降糖作用的研究40-54
• 3.1 引言40
• 3.2 試驗材料40-41
• 3.2.1 試驗試劑與藥品40-41
• 3.2.2 主要試驗儀器41
• 3.2.3 試驗動物41
• 3.3 試驗方法41-44
• 3.3.1 試驗用糖尿病大鼠模型的制備及分組41-42
• 3.3.2 確定動物的給藥劑量42
• 3.3.3 丹皮酚降糖效果的檢測42-43
• 3.3.4 丹皮酚對實驗動物血脂影響的檢測43
• 3.3.5 實驗動物體重及肝、胰腺、脾臟和腎臟重量的測量43
• 3.3.6 試驗動物血清胰島素水平的檢測43-44
• 3.3.7 數(shù)據(jù)統(tǒng)計44
• 3.4 試驗結果44-48
• 3.4.1 II糖尿病大鼠模型的建立及評價44-45
• 3.4.2 大鼠葡萄糖耐受量檢測結果45
• 3.4.3 丹皮酚降糖效果測定結果45-46
• 3.4.4 實驗動物血脂檢測結果46-47
• 3.4.5 大鼠肝臟、胰腺、脾臟和腎臟重量變化結果47
• 3.4.6 血清胰島素和Hb A1c檢測結果47-48
• 3.5 討論48-53
• 3.5.1 Ⅱ型糖尿病大鼠模型的建立48-49
• 3.5.2 丹皮酚對糖尿病大鼠血糖和血脂的影響49-50
• 3.5.3 丹皮酚對大鼠肝臟、腎臟、胰腺和脾臟重量的影響50-51
• 3.5.4 丹皮酚影響Hb A1c含量變化的意義51-52
• 3.5.5 丹皮酚影響血清胰島素含量變化意義52-53
• 3.6 本章小結53-54
• 第4章 丹皮酚對II型糖尿病大鼠的免疫調節(jié)作用54-76
• 4.1 引言54-55
• 4.2 材料55-57
• 4.2.1 實驗動物55
• 4.2.2 實驗試劑55-56
• 4.2.3 主要試驗儀器56-57
• 4.3 試驗方法57-62
• 4.3.1 糖尿病大鼠模型的建立57
• 4.3.2 試驗動物分組及丹皮酚給藥方案57
• 4.3.3 大鼠脾臟重量指數(shù)的測定57
• 4.3.4 大鼠血常規(guī)檢測57-58
• 4.3.5 大鼠腹腔巨噬細胞吞噬功能試驗58
• 4.3.6 淋巴細胞增值率測定(MTT法)58
• 4.3.7 大鼠外周血T淋巴細胞亞群的檢測(流式細胞技術)58-59
• 4.3.8 大鼠外周血中免疫球蛋白及補體C3、C4 的檢測59
• 4.3.9 大鼠血清中炎性細胞因子IL-6、IL-2、TNF-α和TGF-β的檢測59
• 4.3.10 大鼠外周血淋巴細胞中IL-6、IL-2、TNF-α和TGF-β m RNA的表達59-62
• 4.3.11 統(tǒng)計學分析62
• 4.4 試驗結果62-69
• 4.4.1 各組大鼠血糖、血脂、糖化血紅蛋白和胰島素含量變化62-63
• 4.4.2 脾指數(shù)檢測結果63-64
• 4.4.3 大鼠血常規(guī)白細胞比例檢測結果64-65
• 4.4.4 大鼠腹腔巨噬細胞吞噬功能檢測結果65
• 4.4.5 大鼠淋巴細胞增值率65-66
• 4.4.6 流式細胞儀T淋巴細胞亞群檢測結果66
• 4.4.7 免疫球蛋白及補體C3、C4 檢測結果66-67
• 4.4.8 大鼠血清中炎性因子IL-6、IL-2、TNF-α和TGF-β檢測結果67
• 4.4.9 大鼠血中總m RNA的提取及鑒定結果67-68
• 4.4.10 各組大鼠血中IL-2、IL-6、TNF-α和TGF-β m RNA的表達結果68-69
• 4.5 討論69-75
• 4.5.1 丹皮酚對糖尿病大鼠免疫功能的調節(jié)作用69-70
• 4.5.2 丹皮酚對糖尿病大鼠T淋巴細胞亞群的影響70-71
• 4.5.3 丹皮酚對糖尿病大鼠血清中免疫球蛋白及補體的影響71-73
• 4.5.4 丹皮酚對糖尿病大鼠血清中炎性因子含量及表達的影響作用73-75
• 4.6 本章小結75-76
• 第5章 丹皮酚對胰島B細胞增殖分化作用的研究76-93
• 5.1 引言76-77
• 5.2 試驗材料77-78
• 5.2.1 試驗動物77
• 5.2.2 試驗試劑77-78
• 5.2.3 試驗器械78
• 5.3 試驗方法78-84
• 5.3.1 動物分組、模型制備及給藥方案78
• 5.3.2 體重和血糖檢測78
• 5.3.3 大鼠血清中胰島素含量檢測78-79
• 5.3.4 大鼠胰腺組織病理變化檢測79-80
• 5.3.5 檢測大鼠胰腺組織相關m RNA的表達變化80-81
• 5.3.6 胰腺組織中PPARγ、GLP-1、PDX-1、P-JNK、JNK蛋白含量檢測81-84
• 5.3.7 數(shù)據(jù)分析84
• 5.4 試驗結果84-88
• 5.4.1 HE染色結果84-85
• 5.4.2 Western-Boltting檢測蛋白表達85-87
• 5.4.3 RT-PCR檢測m RNA的表達結果87-88
• 5.5 討論88-92
• 5.5.1 丹皮酚對PPARγ和JNK1 的影響89-91
• 5.5.2 丹皮酚對GLP-1 和PDX-1 的影響91-92
• 5.6 本章小結92-93
• 結論93-94
• 創(chuàng)新點及展望與設想94-95
• 參考文獻95-106
• 附錄106-108
• 攻讀博士學位期間承擔的科研任務與主要成果108-110
• 致謝110-111
• 作者簡介111

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

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本文編號：792027