【摘要】：近年來,全轉(zhuǎn)錄工程方法(Global Transcription Machinery Engineering,gTME)由于其在改變基因轉(zhuǎn)錄以獲得有益細(xì)胞表型方面的高效應(yīng)用而得到了廣泛關(guān)注。本研究中,我們運(yùn)用基因操作策略(具體為分子生物學(xué)技術(shù)),通過全轉(zhuǎn)錄工程技術(shù)的篩選,得到了一株SPT15和TAF23雙基因突變的釀酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)二倍體菌株。通過引物對SPT15-EcoRI-FW/SPT15-SalI-RV和TAF23-Sal I-FW/TAF23-NheI RV進(jìn)行PCR擴(kuò)增分別得到的SPT15和TAF23基因,相應(yīng)酶切后各自連接質(zhì)粒pYX212,分別轉(zhuǎn)化單倍體釀酒酵母MAT-a[CICC 1374]和MAT-α[CICC 31144],單倍體融合后得到同時含有質(zhì)粒pYX-SPT15和pYX-TAF23的二倍體菌株,并對其進(jìn)行了一系列穩(wěn)定性實驗的驗證。本研究中,我們對易錯PCR中提高M(jìn)nCl2濃度以代替MgCl2的方法進(jìn)行了修正,并發(fā)現(xiàn)這會對應(yīng)用gTME方法產(chǎn)生重要影響。基于此而得到了90株以上生物乙醇產(chǎn)量有顯著提高的突變株,其中3%MnCl2的突變株產(chǎn)量最高,比對照菌株提高了60.24%。
[Abstract]:In recent years, full transcription engineering method (Global Transcription Machinery Engineering,gTME) has been paid more and more attention because of its efficient application in transforming gene transcription to obtain beneficial phenotypes. In this study, a SPT15 and TAF23 double gene mutant (Saccharomyces cerevisiae) diploid strain of Saccharomyces cerevisiae was obtained by using the strategy of gene manipulation (molecular biology technology) and the screening of full transcription engineering technique. The SPT15 and TAF23 genes were amplified by polymerase chain reaction (PCR) with primers from SPT15-EcoRI-FW/SPT15-SalI-RV and TAF23-Sal I-FW/TAF23-NheI / RV respectively, and the corresponding ligated plasmids pYX212, were ligated with each other. Haploid Saccharomyces cerevisiae MAT-a [CICC 1374] and MAT- 偽 [CICC 31144] were transformed into haploid Saccharomyces cerevisiae MAT-a [CICC 1374] and MAT- 偽 [CICC 31144] respectively. After haploid fusion, diploid strains containing both plasmid pYX-SPT15 and pYX-TAF23 were obtained. In this study, we modified the method of increasing the concentration of MnCl2 instead of MgCl2 in error-prone PCR, and found that it would have an important effect on the application of gTME method. Based on this, 90 mutants with significant increase in bioethanol production were obtained, among which the mutant strain 3%MnCl2 had the highest yield, which was 60.24% higher than that of the control strain.
【學(xué)位授予單位】：江南大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：TQ223.122;TQ926

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本文編號：2467950