本文選題：大豆　切入點：多肽　出處：《吉林大學(xué)》2017年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：本文是國家科技支撐計劃課題(編號:2012BAD33B03)“食源性功能肽生物制備技術(shù)研究”的部分內(nèi)容,主要研究食源性生物活性肽的代謝組學(xué)作用機制。大豆是中國重要糧食作物之一,含有豐富植物蛋白質(zhì),營養(yǎng)價值很高。大豆多肽是用蛋白酶將大豆蛋白質(zhì)水解,再經(jīng)分離、純化等操作而得到的一種氨基酸鏈或蛋白質(zhì)片段,其氨基酸組成平衡,含量豐富,還具有大豆蛋白質(zhì)所不具備的良好的溶解性、吸水性等理化性質(zhì),而且具有易吸收性、降低膽固醇、降低血壓等多種生理功能。TTYY是從大豆蛋白質(zhì)中提取的一種具有較強抗氧化能力的生物活性肽,將其應(yīng)用于食品中可提高食品的營養(yǎng)價值,因此,有必要對它的作用機制進行探討,以確定其保健功效。代謝組學(xué)是系統(tǒng)生物學(xué)的一個分支,它研究的是作為各種代謝路徑的底物和產(chǎn)物的小分子代謝物,通過對這些小分子代謝物的深入研究,有可能找出相關(guān)的生物標(biāo)志物,分析生物標(biāo)志物所涉及的代謝途徑,進而判斷機體所處的生理狀態(tài),并解析機體對外源性或內(nèi)源性刺激進行應(yīng)答的反饋信息,具有整體性、系統(tǒng)性和動態(tài)性的特點。將代謝組學(xué)的方法應(yīng)用于食品領(lǐng)域中,可以全面考察某種食品或營養(yǎng)物質(zhì)對機體代謝的影響,判斷變化發(fā)生的層面,從分子水平上認(rèn)識其作用機制。本文以大鼠作為研究對象,以TTYY作為外源性刺激,分析大鼠機體抗氧化能力的變化,并利用代謝組學(xué)方法研究大鼠在刺激作用下的機體的代謝響應(yīng),從整體上研究代謝物組和代謝通路的變化,從而解析TTYY的作用機制。主要研究內(nèi)容如下:(1)TTYY的抗氧化功能評價采用注射D-半乳糖的方法建立大鼠的氧化損傷模型,并對氧化損傷大鼠進行灌胃TTYY處理,測其血清、肝臟和腎臟提取液,指標(biāo)主要分為四方面:(1)脂質(zhì)氧化產(chǎn)物:丙二醛(MDA);(2)蛋白質(zhì)氧化產(chǎn)物:羰基;(3)抗氧化酶活性:超氧化物歧化酶(SOD)、過氧化氫酶(CAT)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)和總抗氧化力(T-AOC);(4)抗氧化物質(zhì):谷胱甘肽(GSH)。結(jié)果顯示,TTYY處理使MDA和羰基含量下降,抗氧化酶活性和GSH含量升高,且處理劑量不同改變的效果不同,0.4mg TTYY/g體重的處理劑量效果最佳,說明TTYY減輕了脂質(zhì)和蛋白質(zhì)的氧化損傷,提高了抗氧化酶活性和抗氧化物質(zhì)含量,增強了大鼠機體的抗氧化能力。根據(jù)抗氧化功能評價結(jié)果判斷原則規(guī)定,上述四項指標(biāo)中有三項為陽性,即可判定該受試樣品抗氧化功能動物實驗結(jié)果為陽性。本實驗中四項指標(biāo)均為陽性,據(jù)此判定多肽TTYY具有抗氧化功能。(2)TTYY作用于大鼠的血清和尿液代謝組學(xué)研究應(yīng)用代謝組學(xué)方法研究大鼠分別灌胃TTYY10天、20天和30天后血清和尿液代謝物組的變化,采用PCA和PLS-DA得分圖方法分析劑量組與對照組之間的分類聚合情況,采用PLS-DA載荷圖方法提取差異性代謝產(chǎn)物,結(jié)果發(fā)現(xiàn)處理10天代謝物基本沒有變化,處理20天有少量代謝物有變化,處理30天有多種代謝物有變化,說明在本文所研究的時間范圍內(nèi)30天是最佳處理時間。從差異性代謝產(chǎn)物中提取生物標(biāo)志物,血清中鑒定出10種:丙酮酸、亮氨酸、甘氨酸、膽堿、纈氨酸、3-羥基丁酸、丙氨酸、乙酸、谷氨酸和肌酸,尿液中鑒定出14種:丙酮酸、纈氨酸、檸檬酸、馬尿酸、膽堿、琥珀酸、苯丙氨酸、乙酸、乳酸、3-羥基丁酸、肌酸、肌酸酐、丙氨酸和牛磺酸。(3)TTYY作用于大鼠的肝臟代謝組學(xué)研究應(yīng)用代謝組學(xué)方法研究大鼠分別灌胃TTYY10天、20天和30天后肝臟代謝物組的變化,采用PCA和PLS-DA得分圖方法分析劑量組與對照組之間的分類聚合情況,采用PLS-DA載荷圖方法提取差異性代謝產(chǎn)物,結(jié)果發(fā)現(xiàn)處理10天或20天都只有少量代謝物有變化,處理30天有多種代謝物有變化,說明在本文所研究的時間范圍內(nèi)30天是最佳處理時間。從差異性代謝產(chǎn)物中提取生物標(biāo)志物,共鑒定出8種:異亮氨酸、亮氨酸、肝糖原、膽堿、纈氨酸、乳酸、肌酸和�；撬�。根據(jù)血清、尿液和肝臟中的生物標(biāo)志物涉及的代謝途徑研究機體代謝通路的變化,結(jié)果發(fā)現(xiàn),TTYY處理改變了大鼠的能量代謝、脂質(zhì)代謝和氨基酸代謝水平,各種代謝水平均向著增強中心能量代謝途徑的趨勢改變,證明TTYY對大鼠機體有積極的影響。(4)TTYY對氧化損傷大鼠的保護性作用的血清和尿液代謝組學(xué)研究采用注射D-半乳糖的方法建立大鼠的氧化損傷模型,鑒定出與氧化損傷有關(guān)的生物標(biāo)志物,血清中有亮氨酸、異亮氨酸、纈氨酸、丙氨酸、丙酮酸、乳酸、乙酸、極低密度脂蛋白和低密度脂蛋白,尿液中有乳酸、乙酸、磷酸乙醇胺、甲酸、丙氨酸、膽堿、甘氨酸、丙酮酸、2-酮戊二酸、檸檬酸、�；撬岷捅揭阴８拾彼帷ρ趸瘬p傷大鼠灌胃不同劑量的TTYY,測定血清和尿液代謝物組的變化,鑒定與TTYY有關(guān)的生物標(biāo)志物,結(jié)果發(fā)現(xiàn)這些生物標(biāo)志物與氧化損傷有關(guān)的生物標(biāo)志物的種類基本相同,變化趨勢相反,說明TTYY可以緩解或恢復(fù)D-半乳糖造成的氧化損傷。(5)TTYY對氧化損傷大鼠的保護性作用的肝臟代謝組學(xué)研究采用注射D-半乳糖的方法建立大鼠的氧化損傷模型,鑒定出與氧化損傷有關(guān)的生物標(biāo)志物,主要有異亮氨酸、亮氨酸、肝糖原、膽堿、纈氨酸、谷氨酰胺、乳酸、乙酸、酪氨酸、肌酸和�；撬�。對氧化損傷大鼠灌胃不同劑量的TTYY,測定肝臟代謝物組的變化,鑒定與TTYY有關(guān)的生物標(biāo)志物,結(jié)果發(fā)現(xiàn)這些生物標(biāo)志物與氧化損傷有關(guān)的生物標(biāo)志物的種類基本相同,變化趨勢相反,說明TTYY可以緩解或恢復(fù)D-半乳糖造成的氧化損傷。對血清、尿液和肝臟中的生物標(biāo)志物涉及的代謝途徑進行分析,發(fā)現(xiàn)D-半乳糖處理后,大鼠的能量代謝、氨基酸代謝及脂質(zhì)代謝均發(fā)生改變,代謝效率降低,但是經(jīng)灌胃TTYY后,這種改變得以緩解和恢復(fù),代謝強度也有所增加,PPM組最接近于對照組,即TTYY的最佳劑量是0.4mg TTYY/g體重。因此可以得出結(jié)論,TTYY對大鼠機體有保護性作用。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：TS201.2

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本文編號：1632320