本文關(guān)鍵詞：高速逆流色譜與液相微萃取方法在烏頭類生物堿分離及檢測中的應(yīng)用研究　出處：《吉林大學(xué)》2017年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：烏頭類生物堿是毛莨科烏頭屬植物的主要成分,具有抗炎、鎮(zhèn)痛、抗腫瘤、強(qiáng)心等藥理作用,同時(shí)也是毒性成分。因此,該類藥材使用前必須經(jīng)過嚴(yán)格的炮制和檢驗(yàn),否則極易引起中毒甚至死亡事件的發(fā)生。為保證上述藥材及其制劑藥用安全性,需要完善的檢測方法作為保障,而檢測方法的建立也需要高純度的烏頭類生物堿標(biāo)準(zhǔn)品作為前提條件。本論文首先對(duì)烏頭類生物堿標(biāo)準(zhǔn)品的分離純化方法進(jìn)行了研究,在此基礎(chǔ)上對(duì)包括中藥材、中成藥、血漿及尿液在內(nèi)的不同基質(zhì)中烏頭類生物堿的檢測方法進(jìn)行了研究,以期為烏頭屬藥材及其制劑質(zhì)量控制、烏頭類生物堿毒理學(xué)、法醫(yī)學(xué)和藥代動(dòng)力學(xué)研究提供新的檢測方法。首先研究了利用高速逆流色譜同時(shí)分離附子中苯甲酰烏頭原堿、苯甲酰次烏頭原堿、苯甲酰新烏頭原堿三種主要單酯型生物堿的方法。使用制附子乙醇粗提物作為分離樣品,考察了不同的溶劑體系、主機(jī)轉(zhuǎn)速、流動(dòng)相流速對(duì)分離結(jié)果的影響。最終選用氯仿-甲醇-正丁醇-HCl水溶液(4:1:1:5,v/v)的四元溶劑體系,主機(jī)轉(zhuǎn)速800 rpm,流動(dòng)相流速4.0 m L/min。在此條件下,三種烏頭類生物堿在200min內(nèi)全部基線分離,得到的三個(gè)化合物純度分別為98.2%、98.0%、98.8%。該分離方法具有樣品回收率高、制備量大、節(jié)省溶劑、操作簡單、快速等優(yōu)點(diǎn),為本文后續(xù)烏頭堿成分檢測方法的研究提供了標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。針對(duì)于中藥材附子中烏頭類生物堿的檢測,本文建立了離子液體雙水相提取-高效液相色譜測定附子中六種烏頭類生物堿含量的方法。附子樣品經(jīng)離子液體水溶液超聲提取后,加入無機(jī)鹽形成雙水相系統(tǒng),烏頭類生物堿被富集到上層離子液體相中,直接注入高效液相檢測。通過考察不同的離子液體雙水相體系、離子液體用量、無機(jī)鹽用量、pH值、提取時(shí)間等因素對(duì)提取率的影響確立了最佳提取條件。在此條件下方法的加樣回收率范圍為80.37~107.18%,RSD值范圍為2.13~4.87%。與傳統(tǒng)提取方法相比,該方法具有消耗的試劑和樣品量少,耗時(shí)短,靈敏度高的優(yōu)點(diǎn)。鑒于離子液體雙水相在烏頭類生物堿提取方面的優(yōu)異性能,本論文還研究了利用離子液體雙水相結(jié)合有機(jī)溶劑反萃取和非有機(jī)溶劑反萃取制備烏頭類生物堿提取物的方法�？疾炝寺确隆⒍燃淄�、乙酸乙酯、正己烷四種有機(jī)溶劑對(duì)離子液體相中烏頭類生物堿的反萃取率。結(jié)果顯示,除去正己烷之外的三種有機(jī)溶劑的反向萃取率都比較高,一次萃取率在75%以上;非有機(jī)溶劑反萃取的方法是通過原位置換反應(yīng)使親水型離子液體轉(zhuǎn)化為疏水型離子液體,利用含酸水溶液反向萃取離子液體中烏頭類生物堿,雖然過程比較復(fù)雜,但具有反萃取過程中不使用揮發(fā)性有機(jī)溶劑的優(yōu)點(diǎn)。針對(duì)常用中成藥小活絡(luò)丸中雙酯型烏頭類生物堿含量低、基質(zhì)復(fù)雜的特點(diǎn),本論文研究設(shè)計(jì)了氣體輔助離子液體分散液液微萃取和離子液體均勻液液微萃取結(jié)合高效液相色譜檢測小活絡(luò)丸中三種雙酯型烏頭類生物堿含量的方法。通過考察離子液體的種類及用量、pH值、充氣時(shí)間對(duì)萃取率的影響確立氣體輔助離子液體微萃取方法的最佳條件。同時(shí),通過考察置換劑的種類及用量、離子液體用量、pH值對(duì)萃取率的影響確立離子液體均勻液液微萃取方法的最佳條件。在此條件下,兩種方法的回收率范圍分別為85.83~94.44%和81.67~93.06%。氣體輔助離子液體分散液液微萃取方法擁有更好的回收率且離子液體用量更少。利用該方法結(jié)合高效液相檢測了不同廠家生產(chǎn)的小活絡(luò)丸中三種雙酯型烏頭類生物堿的含量。結(jié)果顯示,三個(gè)廠家生產(chǎn)的小活絡(luò)丸中雙酯型烏頭類生物堿的含量有一定差別,但總量都比較低。在上述研究基礎(chǔ)上,本論文還對(duì)生物樣品,包括血漿與尿液中烏頭類生物堿的檢測方法進(jìn)行了研究。針對(duì)血漿樣品黏度大,蛋白質(zhì)、脂肪等干擾物質(zhì)多的特點(diǎn),本文建立了基質(zhì)固相分散-渦旋輔助分散液液微萃取結(jié)合高效液相色譜檢測血漿中六種烏頭類生物堿含量的方法。通過考察固相分散劑、洗脫劑、萃取劑、鹽濃度、pH值等因素對(duì)回收率的影響確立了最佳實(shí)驗(yàn)條件。在此條件下六種烏頭類生物堿的加樣回收率范圍為73.81~101.82%,RSD值范圍為2.35~6.56%。該方法能有效去除血漿中干擾基質(zhì)對(duì)目標(biāo)分析物的影響,同時(shí)具有較高的靈敏度,適用于血漿中痕量烏頭類生物堿的檢測。針對(duì)尿液樣品黏度低、蛋白質(zhì)含量相對(duì)較少的特點(diǎn),本文建立了泡騰輔助離子液體分散液液微萃取磁性納米粒子吸附結(jié)合高效液相色譜測定尿液中多種烏頭類生物堿含量的方法。本方法將冰醋酸與微量離子液體及納米Fe_3O_4低溫下凝結(jié)成冰片,加入到溶有Na2CO3的尿液中,生成的CO2使離子液體分散的同時(shí)增加目標(biāo)分析物與離子液體的接觸面積。泡騰結(jié)束后利用外部磁鐵分離吸附在Fe_3O_4磁性納米粒子表面的離子液體。通過考察泡騰劑的組成、離子液體的種類及用量、磁性納米Fe_3O_4用量、解吸劑等多種因素對(duì)回收率的影響確立了最佳實(shí)驗(yàn)條件。在此條件下六種烏頭類生物堿的加樣回收率范圍為81.11~106.67%,RSD值范圍為2.70~6.49%,表明方法的加樣回收率良好,可以應(yīng)用于尿樣中痕量烏頭類生物堿的檢測。綜上,本論文首先研究了快捷高效的制備烏頭類生物堿標(biāo)準(zhǔn)品的方法;其次針對(duì)不同的樣品特點(diǎn)研究設(shè)計(jì)了多種液相微萃取方法,結(jié)合高效液相色譜建立了不同基質(zhì)的藥物及生物樣品中烏頭類生物堿的綠色分析方法,同時(shí)為中藥藥效物質(zhì)的分析檢測與質(zhì)量控制提供了新的研究思路。
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：O629.3;O652

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本文編號(hào)：1329589