本文關(guān)鍵詞：不同兒茶素-β-乳球蛋白納米粒特性與腫瘤細(xì)胞抑制活性差異　出處：《浙江工商大學(xué)》2017年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：兒茶素是茶葉中活性物質(zhì)的主要成分,具有良好的抗氧化作用和腫瘤抑制效果,應(yīng)用前景良好。但因特殊的分子結(jié)構(gòu),兒茶素容易發(fā)生氧化、聚合等反應(yīng),易降低其生物活性而限制其在各領(lǐng)域的應(yīng)用。β-乳球蛋白(β-LG)是牛奶中乳清蛋白的主要成分,可作為優(yōu)良的包埋材料用于生物活性物質(zhì)的包埋。應(yīng)用納米技術(shù)用β-LG對(duì)兒茶素進(jìn)行包埋可有效提高兒茶素的穩(wěn)定性和生物利用率。本文采用熱激法,制備了表沒食子兒茶素沒食子酸酯(EGCG)、表兒茶素沒食子酸酯(ECG)、表沒食子兒茶素(EGC)、表兒茶素(EC)等四種不同兒茶素的β-LG納米粒,比較了納米�；緟�(shù)與兒茶素結(jié)構(gòu)之間的構(gòu)效關(guān)系;研究了 EGCG、ECG、EC和β-LG的相互作用;比較了各兒茶素納米粒對(duì)不同腫瘤細(xì)胞的增殖抑制活性差異,篩選出對(duì)各納米粒敏感的腫瘤細(xì)胞;通過體外試驗(yàn)和動(dòng)物體內(nèi)試驗(yàn),初步探明了EGCG-β-LG納米粒的對(duì)A375人體黑色素瘤細(xì)胞增殖的部分抑制機(jī)理。主要結(jié)果如下:1、在pH 7.0,熱激溫度為85℃下制備不同摩爾比的EGCG、ECG、EGC、EC 的β-LG 納米粒(EGCG-NPs、ECG-NPs、EGC-NPs、EC-NPs)。各兒茶素納米粒的粒徑和Zeta電位隨摩爾比增加而增加,包埋率和兒茶素裝載量隨之降低。兒茶素和β-乳球蛋白摩爾比32:1時(shí),各兒茶素納米粒的Zeta電位在-30～-34 mV之間,穩(wěn)定性較好,粒徑均在30～35 nm左右,且分散均勻,呈球形。2、兒茶素納米粒的基本參數(shù)與兒茶素的類型關(guān)系密切,EGCG-NPs、ECG-NPs 的粒徑比 EGC-NPs、EC-NPs 的小,Zeta 電位比EGC-NPs、EC-NPs的大,但EGC-NPs、EC-NPs納米粒的包埋率和裝載率比EGCG-NPs、ECG-NPs的要高,納米化可以延長兒茶素的抗氧化時(shí)效。3、EGCG、ECG和EC能使β-LG產(chǎn)生熒光猝滅作用,猝滅過程為靜態(tài)猝滅,且是一放熱過程;熱力學(xué)參數(shù)和分子對(duì)接結(jié)果顯示:在三種兒茶素和β-乳球蛋白的相互作用時(shí)的△S均為正值,△H均為負(fù)值,表明疏水作用是各兒茶素單體與β-LG之間的主要作用力,其次是氫鍵和靜電作用,EGCG、ECG與β-LG的結(jié)合能比EC大。4、兒茶素納米粒對(duì)腫瘤細(xì)胞的增殖抑制率呈劑量效應(yīng)和時(shí)間效應(yīng),不同兒茶素納米粒對(duì)不同腫瘤細(xì)胞的增殖抑制率差異不同。四種納米粒對(duì)A375等多個(gè)腫瘤細(xì)胞增殖的抑制率有不同程度的改善:EGCG-NPs對(duì)A375、MSTO-211H、Hela、TE~(-1)、SK-OV-3、C-33 A、CACO-2等細(xì)胞的增殖抑制率相對(duì)EGCG改善明顯;ECG-NPs對(duì)A375、MSTO-211H、NCI-N87、Hela、TE~(-1)、SPC-A~(-1)、B16、SK-OV-3、C-33 A等細(xì)胞的增殖抑制率相對(duì)ECG改善明顯;EGC-NPs對(duì)MSTO-211H、B16、SK-OV-3、C-33 A等細(xì)胞的增殖抑制率相對(duì)EGC改善明顯;EC-NPs對(duì)MSTO-211H、NCI-N87、SK-OV-3、C-33A等細(xì)胞的增殖抑制率相對(duì)EC改善明顯;四種兒茶素納米粒對(duì)769-P、22RV1、4T1、BxPC-3等細(xì)胞的增殖抑制率改善不明顯。5、用EGCG濃度為40 μg·mL~(-1)的EGCG-NPs處理A375人體黑色素瘤細(xì)胞48h后發(fā)現(xiàn),A375出現(xiàn)了典型的細(xì)胞凋亡形態(tài);流式細(xì)胞儀檢測(cè)顯示,EGCG-NPs使A375腫瘤細(xì)胞凋亡率明顯上升。因此,細(xì)胞凋亡是EGCG-NPs導(dǎo)致A375腫瘤細(xì)胞死亡的主要原因。6、用相關(guān)試劑盒檢測(cè)Caspase-3和Caspase-9后顯示,EGCG-NPs會(huì)使腫瘤細(xì)胞的Caspase-3和Caspase-9活性顯著提高;Western blot法檢測(cè)表明,EGCG-NPs處理后A375細(xì)胞的Cleaved-Caspase-3、Cleaved-Caspase-9和Bax三種蛋白的表達(dá)量上升,而Bcl-2含量下降表明EGCG-NPs影響細(xì)胞內(nèi)線粒體膜的通透能力,并促使細(xì)胞色素C釋放而引發(fā)凋亡信號(hào),從而激活Caspase-3和Caspase-9的活性。因此,EGCG-NPs誘使內(nèi)源性線粒體細(xì)胞釋放色素C可能是細(xì)胞凋亡的機(jī)制。7、對(duì)負(fù)荷A375細(xì)胞移植瘤小鼠尾靜脈給藥EGCG-NPs(10 mg·kg~(-1)day,等價(jià)于EGCG),腫瘤抑制率是39.74%,為同劑量EGCG的腫瘤抑制率的1.6倍,增效作用顯著。
【學(xué)位授予單位】：浙江工商大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：TS201.4

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本文編號(hào)：1317173