發(fā)布時間：2017-12-17 22:04

  本文關(guān)鍵詞：富硒花生蛋白的制備及其對小鼠酒精肝損傷的作用機制

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【摘要】：本研究以富硒花生為原料,首先建立富硒花生中有機硒定量分析方法,探索硒富集與相關(guān)營養(yǎng)成分的關(guān)系;對富硒花生蛋白制備工藝進行優(yōu)化,并深入分析加工中硒的耗損規(guī)律;最后通過動物模型和細(xì)胞模型對富硒花生蛋白的生物學(xué)效應(yīng)進行評價,得出如下結(jié)論:(1)建立了超聲波結(jié)合酶法提取、HPLC-ICP-MS檢測的富硒花生有機硒定量方法。探究了不同富硒程度花生的基本營養(yǎng)成分(蛋白、脂肪、可溶性多糖、粗纖維、淀粉)、氨基酸組成、礦物質(zhì)組成、蛋白分子量分布、抗氧化活性等的變化規(guī)律,發(fā)現(xiàn)硒的富集對花生蛋白、多糖、礦質(zhì)等營養(yǎng)物質(zhì)的積累產(chǎn)生影響;且在相同的蛋白質(zhì)濃度下,樣品硒含量變化趨勢與其抗氧化活性變化趨勢具有良好的一致性。(2)研究發(fā)現(xiàn)硒主要分布在花生蛋白中,花生油脂基本不含硒。超高壓輔助提取技術(shù)(壓力300 MPa、時間5 min)結(jié)合恒溫水浴浸提6 h溶劑法可高效脫脂。堿溶蛋白約占富硒花生溶解性蛋白的55%,含硒量較高且具有較好的抗氧化活性。通過單因素結(jié)合響應(yīng)面設(shè)計確定了提取溫度50℃,沉淀pH 5.5、提取液pH 9.0、提取時間95 min和液料比11 mL/g的富硒花生分離蛋白(SePP)最佳提取工藝條件,蛋白純度約為87%。明確了從富硒花生原料到蛋白,加工過程中37%的硒損失發(fā)生在干燥、浸泡、脫衣、破碎、脫脂、蛋白提取階段,并對損失原因進行了解析。(3)通過建立小鼠酒精性肝損傷(ALD)模型,探究SePP干預(yù)小鼠ALD的功效。血液學(xué)指標(biāo)研究表明,中、高硒劑量的SePP能夠明顯緩解ALD;硒劑量相同時,SePP和硒代蛋氨酸(SeMet)效果相當(dāng),但亞硒酸鈉沒有效果。過量酒精攝入引起胰島素抵抗,且導(dǎo)致肝臟氧化應(yīng)激發(fā)生,被認(rèn)為是小鼠ALD的主要誘因。SePP和SeMet在降低胰島素水平和緩解氧化應(yīng)激方面都有顯著作用,亞硒酸鈉效果不明顯。酒精導(dǎo)致小鼠腸道微生物的豐度降低,菌落組成也發(fā)生改變,尤其是促使消化球菌科Peptococcaceae、毛螺菌科Lachnospiraceae、梭菌科Clostridiaceae、氏菌屬Roseburia等豐度降低,疣微菌門Verrucomicrobia豐度升高。而一定硒量的SePP和SeMet干預(yù)后,由酒精導(dǎo)致的"壞"微生物的增長和"好"微生物的下調(diào)得到顯著恢復(fù)和改善。(4)在細(xì)胞水平探究了SePP和SeMet對酒精肝的作用效果及機制,發(fā)現(xiàn)500μM的酒精使小鼠AML-12細(xì)胞存活率顯著下降、大量細(xì)胞凋亡,10μM SeMet和等硒量的SePP對正常細(xì)胞沒有毒性,可顯著恢復(fù)酒精誘導(dǎo)的細(xì)胞存活率下降,抑制凋亡發(fā)生,且SePP作用效果更好。其主要作用機制,一方面是抑制酒精激活的乙醇脫氫酶(ADH)和細(xì)胞色素同功酶(CYP2E1),從而降低活性氧(ROS)水平、抑制氧化損傷。另一方面通過激活P38來調(diào)控核轉(zhuǎn)錄因子(Nrf-2),促進抗氧化酶HO-1、GCLC等表達(dá),從而降低酒精導(dǎo)致的細(xì)胞損傷。綜合以上,富硒花生蛋白是富硒花生適宜的高附加值產(chǎn)品形式,能夠在酒精肝損傷疾病中發(fā)揮保護作用。
【學(xué)位授予單位】：中國農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：TS201.21

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：1301709