本文關鍵詞：扇貝裙邊中抗氧化活性肽和牛磺酸的綜合提取工藝研究

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【摘要】：抗氧化活性肽是具有清除自由基能力的多肽,可以維持機體內(nèi)的正常代謝,改善人體生理功能,延緩衰老,保護人體健康。與其他抗氧化劑相比,具有更強的抗氧化活性、多樣性和安全性,人們對天然抗氧化肽的需求量越來越高。因此,從不同生物中制備抗氧化活性肽是近幾年研究的熱點問題。扇貝是我國重要的經(jīng)濟海產(chǎn)品,近幾年扇貝養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展迅速,扇貝加工生產(chǎn)的扇貝柱口感上佳,味道鮮美,是國際上公認的高檔水產(chǎn)品。在扇貝柱的生產(chǎn)加工過程中,會產(chǎn)生大量的扇貝裙邊下腳料,其內(nèi)含有豐富的營養(yǎng)成分和多種生物活性物質(zhì),例如�；撬�、蛋白質(zhì)、DHA等等。人們已經(jīng)從扇貝裙邊中提取了抗氧化活性肽,但是在制取的過程中,其中的�；撬岜焕速M掉。�；撬嵊捎诰哂歇毺氐纳砗退幚砉δ�,廣泛應用于食品和藥品兩方面。天然�；撬崤c化學合成的�；撬嵯啾�,具有無毒性,副作用小,工藝操作相對簡單,投資少等特點。人們致力于從海洋生物中獲取�；撬岬墓に囇芯�。研究表明,扇貝裙邊可以作為提取�；撬岬牟牧�,但在制取�；撬岬倪^程中,大量的蛋白質(zhì)隨廢水流出。如果能夠采用合理的途徑從扇貝裙邊中同時提取出抗氧化活性肽和�；撬�,不僅可以避免資源浪費和環(huán)境污染,而且可以最大化地提高經(jīng)濟效益。因此,本文以扇貝裙邊為原料,對抗氧化活性肽和�；撬岬木C合提取工藝進行研究。主要通過優(yōu)化扇貝裙邊蛋白質(zhì)的提取工藝；正交實驗確定堿性蛋白酶、中性蛋白酶、酸性蛋白酶水解扇貝裙邊蛋白質(zhì)的最佳酶解條件；對得到的酶解多肽進行分離純化；研究各多肽組分和混合肽的抗氧化活性；在提取扇貝裙邊蛋白質(zhì)的同時,對蛋白質(zhì)鹽析后離心的上清液進行牛磺酸的提取工藝研究。具體研究內(nèi)容和結(jié)果如下：扇貝裙邊蛋白質(zhì)的最佳提取工藝為：扇貝裙邊預處理,以料液比1：5(m/v),4℃條件下浸提4h,離心得上清；50%-60%飽和度的硫酸銨鹽析,離心得蛋白質(zhì)沉淀,緩沖液溶解蛋白質(zhì)沉淀；透析除鹽；以0.02moI/L pH6.5醋酸銨作為洗脫液,洗脫速度0.5mL/min,上樣量10mL,進行Sephadex G-75凝膠過濾層析；收集合并洗脫峰,冷凍干燥,于-20℃冰箱保存。采用四因素三水平的正交實驗對堿性蛋白酶、中性蛋白酶、酸性蛋白酶的酶解條件進行優(yōu)化。最終確定出堿性蛋白酶對扇貝裙邊蛋白質(zhì)的最佳酶解條件：加酶量為6000U/g,反應pH11,溫度45℃,反應時間4h；中性蛋白酶對扇貝裙邊蛋白質(zhì)的最佳酶解條件：加酶量為8000U/g,反應pH7.0,溫度45℃,反應時間3h；酸性蛋白酶對扇貝裙邊蛋白質(zhì)的最佳酶解條件：加酶量為4000U/g,反應pH4.0,溫度45℃,反應時間4h。對三種酶解產(chǎn)物的多肽和經(jīng)SephadexG-25凝膠過濾層析得到的洗脫峰組分進行抗氧化活性測定,結(jié)果表明中性蛋白酶的酶解產(chǎn)物對羥自由基的清除率最高為64.16%,其IC5o值為134mg/mL,對羥自由基具有很強能力；酸性蛋白酶的酶解產(chǎn)物對DPPH自由基的清除率最高,但最大清除率僅為34.76%,對DPPH自由基的清除能力一般。扇貝裙邊中牛磺酸的提取工藝為：對蛋白質(zhì)鹽析后離心的上清液進行色素吸附；以蒸餾水為洗脫液,流速1.5mL/min,加樣量2mL,進行H+型陽離子樹脂交換層析,得到純品�；撬�,測定�；撬岬幕厥章蕿�70.26%,雖然低于其他海洋生物提取�；撬岬幕厥章�,但是從扇貝裙邊中成功獲取兩種提取物。
【關鍵詞】：扇貝裙邊 抗氧化活性肽 �；撬� 提取工藝
【學位授予單位】：中國海洋大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：TQ914.2
【目錄】：

• 摘要5-7
• Abstract7-14
• 第一章 前言14-26
• 1. 扇貝裙邊14-17
• 1.1 扇貝裙邊簡介14
• 1.2 扇貝裙邊的營養(yǎng)價值14-16
• 1.3 扇貝裙邊的利用現(xiàn)狀16-17
• 2. 牛磺酸17-21
• 2.1 �；撬岷喗�17-18
• 2.2 牛磺酸的生理功能和應用18-20
• 2.2.1 保肝利膽18
• 2.2.2 抗氧化作用18
• 2.2.3 維持細胞膜正常功能18-19
• 2.2.4 促進大腦發(fā)育19
• 2.2.5 對心臟的調(diào)節(jié)作用19
• 2.2.6 調(diào)節(jié)物質(zhì)代謝19-20
• 2.2.7 �；撬岬膽�20
• 2.3 牛磺酸的研究現(xiàn)狀20-21
• 3. 抗氧化活性肽21-24
• 3.1 自由基與抗氧化活性肽21-23
• 3.2 抗氧化肽的提取工藝研究23-24
• 3.2.1 合成法23
• 3.2.2 發(fā)酵法23-24
• 3.2.3 水解法24
• 4. 立題背景及研究意義24-26
• 第二章 扇貝裙邊中蛋白質(zhì)的提取工藝26-36
• 1. 實驗材料及藥品儀器26-28
• 1.1 實驗材料26
• 1.2 實驗藥品及溶液配制26-28
• 1.2.1 實驗藥品26-27
• 1.2.2 溶液配制27-28
• 1.3 實驗儀器28
• 2. 實驗方法28-31
• 2.1 扇貝裙邊蛋白質(zhì)硫酸銨鹽析最佳飽和度確定28-30
• 2.1.1 扇貝裙邊預處理28
• 2.1.2 扇貝裙邊浸提28-29
• 2.1.3 扇貝裙邊蛋白質(zhì)鹽析29
• 2.1.4 蛋白質(zhì)濃度的測定29
• 2.1.5 最佳硫酸銨飽和度的確定29-30
• 2.2 葡聚糖凝膠層析條件的確定30-31
• 2.2.1 Sephadex G-75凝膠層析30-31
• 3. 實驗結(jié)果與分析31-35
• 3.1 扇貝裙邊鹽析的最佳硫酸銨飽和度31-32
• 3.2 扇貝裙邊蛋白質(zhì)葡聚糖凝膠過濾層析最佳工藝確定32-34
• 3.3 最佳工藝條件下蛋白質(zhì)的回收率34-35
• 4. 本章討論35-36
• 第三章 扇貝裙邊蛋白質(zhì)的酶解工藝研究36-50
• 1. 實驗材料與藥品儀器36-37
• 1.1 實驗材料36
• 1.2 實驗藥品及溶液配制36-37
• 1.2.1 實驗藥品36-37
• 1.2.2 溶液配制37
• 1.3 實驗儀器37
• 2. 實驗方法37-41
• 2.1 三種蛋白酶對扇貝裙邊蛋白質(zhì)水解度測定37-38
• 2.2 單酶酶解工藝優(yōu)化38-39
• 2.2.1 堿性蛋白酶酶解工藝優(yōu)化研究38-39
• 2.2.2 酸性蛋白酶酶解工藝優(yōu)化研究39
• 2.2.3 中性蛋白酶酶解工藝優(yōu)化研究39
• 2.3 單酶酶解產(chǎn)物抗氧化活性測定39-40
• 2.4 雙酶酶解工藝40
• 2.5 復合酶酶解工藝40-41
• 3. 結(jié)果與分析41-48
• 3.1 不同蛋白酶對扇貝裙邊蛋白質(zhì)的水解度41-42
• 3.2 單酶酶解工藝優(yōu)化42-45
• 3.2.1 堿性蛋白酶單酶水解扇貝裙邊蛋白質(zhì)工藝優(yōu)化42-43
• 3.2.2 中性蛋白酶單酶水解扇貝裙邊蛋白質(zhì)工藝優(yōu)化43-44
• 3.2.3 酸性蛋白酶單酶水解扇貝裙邊蛋白質(zhì)工藝優(yōu)化44-45
• 3.3 扇貝裙邊單酶酶解產(chǎn)物的抗氧化活性45-46
• 3.4 扇貝裙邊蛋白質(zhì)的雙酶酶解產(chǎn)物的抗氧化活性46-48
• 3.5 扇貝裙邊蛋白質(zhì)的混合酶酶解產(chǎn)物的抗氧化活性48
• 4. 本章討論48-50
• 第四章 扇貝裙邊活性肽的分離純化及抗氧化活性測定50-60
• 1. 實驗材料與藥品儀器50-51
• 1.1 實驗材料50
• 1.2 實驗藥品50-51
• 1.3 實驗儀器51
• 2. 實驗方法51-52
• 2.1 酶解產(chǎn)物預處理51
• 2.2 Sephadex G-25凝膠過濾層析51
• 2.2.1 凝膠的處理51
• 2.2.2 裝柱51
• 2.2.3 加樣51
• 2.2.4 洗脫51
• 2.3 抗氧化活性測定51-52
• 2.3.1 羥基自由基清除率測定51-52
• 2.3.2 DPPH自由基清除率測定52
• 3. 結(jié)果與分析52-58
• 3.1 堿性蛋白酶酶解活性肽凝膠過濾層析及抗氧化活性測定52-54
• 3.1.1 Sephadex G-25凝膠過濾層析52-53
• 3.1.2 堿性蛋白酶酶解活性肽的抗氧化活性53-54
• 3.2 中性蛋白酶酶解活性肽凝膠過濾層析及抗氧化活性測定54-56
• 3.2.1 Sephadex G-25凝膠過濾層析54
• 3.2.2 中性蛋白酶酶解活性肽的抗氧化活性54-56
• 3.3 酸性蛋白酶酶解活性肽凝膠過濾層析及抗氧化活性測定56-58
• 3.3.1 Sephadex G-25凝膠過濾層析56
• 3.3.2 酸性蛋白酶酶解活性肽的抗氧化活性56-58
• 4. 本章討論58-60
• 第五章 扇貝裙邊中�；撬岬闹苽涔に�60-65
• 1. 實驗材料與實驗藥品儀器60-61
• 1.1 實驗材料60
• 1.2 實驗藥品60-61
• 1.2.1 實驗藥品60
• 1.2.2 溶液配制60-61
• 1.3 實驗儀器61
• 2. 實驗方法61-62
• 2.1 蛋白質(zhì)鹽析上清液預處理61
• 2.2 H型陽離子交換柱層析工藝61
• 2.2.1 樹脂的處理61
• 2.2.2 �；撬岬募兓�61
• 2.3 牛磺酸標準曲線的測定61-62
• 2.4 �；撬岷康臏y定62
• 3. 結(jié)果與分析62-63
• 3.1 �；撬針藴是�62
• 3.2 �；撬犭x子交換層析62-63
• 4. 本章討論63-65
• 總結(jié)65-67
• 參考文獻67-70
• 致謝70-71
• 個人簡歷71
• 發(fā)表的學術論文71

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本文編號：686742